浙貝母三種炮制規格的質量評價

浙貝母是百合科植物浙貝母。我是ronima工具的干燥葉子。這是道地材料的“浙江八味”之一。主要產于金華省、寧波市殷墟地區。具有清熱化痰止咳、解毒散結消癰等功效。主要有效成分為生物堿和皂苷,其中貝母素甲和貝母素乙的含量是《中國藥典》規定檢測的指標成分。近年來浙貝母的炮制方法不一,厚片在常規煎煮時常有白心難以煎透,影響藥效。為了符合2009年國家中醫藥管理局頒布的《醫療機構中藥煎藥室管理規范》藥料應充分煎透,做到無糊狀塊、無白心、無硬心的要求,本文通過HPLC-ELSD法檢測浙貝母三種主流炮制規格(鮮切烘干薄片、鮮切無硫厚片、硫熏厚片)的貝母素甲、貝母素乙含量,明確質量最佳的炮制品;考察煎膏得率和有效成分含量的相關性,確定合理的煎煮方法。1實驗材料1.1浙貝母常用植物生長特性同批浙貝母原藥材均來自浙江磐安縣新渥鎮浙貝母標準化生產基地,由浙江中醫藥大學飲片廠鄭建寶和溫州市第三人民醫院曾國武藥師鑒定為百合科植物浙貝母FritillariathunbergiiMiq.的鱗莖。鮮切烘干薄片:原產地趁鮮切薄片,通過帶式干燥機80℃干燥,外觀平展呈黃白色;鮮切無硫厚片:原產地趁鮮切厚片,曬干,外觀皺縮呈灰褐色;硫熏厚片:原產地趁鮮熏硫,切厚片,曬干,外觀光潔呈粉白色。1.2測試劑1.3色譜加入系統U-3000高效液相色譜儀(配Chromeleon色譜工作站,美國戴安公司);AlltechELSD3300蒸發光散射檢測器(美國奧泰科技有限公司)。2方法和結果2.1三種原料和一種浙江貝母飲料的有效成分含量2.1.1流動相、流速色譜柱:DIONEXAcclaimC18色譜柱(4.6mm×250mm,5um);流動相:乙腈-0.1%二乙胺(70:30);流速:1.0mL/min;ELSD條件:漂移管溫度為42℃,載氣(高純N2)流速為1.0L/min。2.1.2對照品溶液的制備精密稱取貝母素甲2.92mg、貝母素乙2.16mg置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,制成含貝母素甲0.292g/L、貝母素乙0.216g/L對照品溶液。2.1.3混合液-液法取各樣品粉末(過四號藥篩)約2g,精密稱定,置燒瓶中,加濃氨試液4mL浸潤1h,精密加入三氯甲烷-甲醇(4:1)的混合溶液40mL,稱定重量,混勻,置80℃水浴中加熱回流2h,放冷,再稱定重量,加上述混合溶液補足減失的重量,濾過。精密量取續濾液10mL,置蒸發皿中蒸干,殘渣加甲醇使溶解并轉移至2mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻過0.45μm微孔濾膜即得。每個樣品平行制備兩份供試液。2.1.4外標法測定貝素甲、苯乙的含量分別精密吸取對照品溶液5μL、10μL、20μL,供試品溶液10μL,注入液相色譜儀,每份樣品液進樣兩次測定,用外標法對數方程分別計算各樣品貝母素甲、貝母素乙的含量。2.1.5標準曲線的繪制分別進樣對照品溶液5μL、10μL、20μL各測定兩次,以進樣量(μg)對數值為橫坐標,峰面積對數值為縱坐標繪制標準曲線。得到貝母素甲的線性方程為Y=1.3032X+0.9163(r=0.09996);貝母素乙的線性方程為Y=1.3858X+0.0.8261(r=0.09997)。浙貝母的三種炮制規格中,鮮切無硫厚片的貝母素甲和貝母素乙的含量最高,見表1。2.2制備0.5%小糖酸鈉的最佳配方精密稱取浙貝母鮮切無硫厚片10g,分別置于燒杯中浸泡0.5h、1h、2h后煎煮兩次:第一次加10倍量的水煎煮30min,不時補足水量;第二次加8倍量的水煎煮15min,不時補足水量。煎煮后藥渣稱重,用剪刀小心剝離出白心部分,60℃烘干3h后稱重,比較白心部分占所取飲片的質量比率;煎液分別用三層紗布過濾,合并濾液濃縮至適量置以干燥至恒重的蒸發皿中,在水浴上蒸干后,于105℃干燥3h,置干燥器中冷卻30min,迅速精密得到煎膏重量,并計算煎膏占飲片的含量(煎膏得率)。每種浸泡時間平行制樣兩份。2.2.2外標法測定貝素甲和方案取前面制得的各煎膏加2%HCl溶解,酸水溶液以石油醚萃取,棄去石油醚層,以氨水調pH值至9以上后再以氯仿萃取,取氯仿萃取液合并后水浴蒸干,殘渣加甲醇使溶解并轉移2mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻過0.45μm微孔濾膜即得供試品溶液。按同樣的色譜條件,取各供試品溶液10μL,注入液相色譜儀,每份樣品液進樣兩次測定,用外標法對數方程分別計算各樣品貝母素甲、貝母素乙的含量。隨著浙貝母鮮切無硫厚片浸泡時間的延長,煎煮后藥渣的白心比率降低,而煎膏得率及其中貝母素甲、貝母素乙總含量均是增高,見表2,圖1。3特性的篩選和條件確定通過HPLC-ELSD法檢測浙貝母三種主流炮制規格的貝母素甲、貝母素乙含量,結果鮮切無硫厚片>硫熏厚片>鮮切烘干薄片,而且其單獨含量和總量都是上述的排序,初步判定,鮮切無硫厚片質量最佳,硫磺熏蒸次之,后者雖然飲片外觀美白,有一定的防霉作用,但有效成分含量降低,殘留硫有損人體健康,不宜采用;鮮切烘干薄片有效成分含量最低,可能是浙貝母生物堿不耐高溫的原因,建議采用低溫干燥技術。浙貝母的煎膏量與有效成分含量成正相關。浙貝母飲片在常規煎煮前應先浸泡1h以上,才能使有效成分溶出更多。建議將“厚片”改為“薄片”,避免飲片白心、硬心、煮不透,這樣既能提高臨床療效,又能節約資源。本文通過摸索一系列的漂移管溫度和載氣流速,比較對照品溶液的圖譜響應值和峰面積大小,最終確定漂移管溫度42℃、載氣(高純N2)流速1.0L/min為最佳ELS