老琥草中鞣質和總黃酮類物質的提取_第1頁
老琥草中鞣質和總黃酮類物質的提取_第2頁
老琥草中鞣質和總黃酮類物質的提取_第3頁
老琥草中鞣質和總黃酮類物質的提取_第4頁
老琥草中鞣質和總黃酮類物質的提取_第5頁
全文預覽已結束

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

老琥草中鞣質和總黃酮類物質的提取

秋天草是牛蒡科植物。它是一種古老的鸛草科野生動物。干燥的土壤是多年生草本植物。它嘗起來又重又苦,性格平。它進入肝、脾和腎。具有驅風、除濕、經絡、緩解和腹瀉的功效。常用于民間和實驗研究。研究結果表明,鞣質具有多種生物活性,如抗腫瘤、抗過敏、抗衰老等,黃酮類化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多種生理活性。老鸛草的主要化學成分包括鞣質、黃酮、有機酸、揮發油等,且以鞣質和黃酮尤為豐富。因此,老鸛草中鞣質與黃酮具有很大的研究及開發價值。為了獲得經濟實用的老鸛草中鞣質和黃酮類物質提取方法,筆者等以乙醇作為提取溶劑,分別運用滲漉法與超聲提取法提取老鸛草中鞣質和總黃酮類化合物,用干酪素法測定鞣質含量,用比色法測定總黃酮含量,并對兩種提取方法進行了比較。1材料和方法1.1材料表面1.1.1特芬材料購自蘭州黃河中藥材市場,經蘭州大學藥學院鑒定為老鸛草,用粉碎機打成粗粉備用。1.1.2槲皮素對照品沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號110831-200302);槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號100081-200406);Folin試劑:鎢酸鈉10g,加85%磷酸8mL,與蒸餾水75mL混合,加熱回流3h,冷卻后加水稀釋至100mL,避光保存。其余試劑均為分析純。1.1.3auw200e,koios公司,kueo分光光度計(Evolution60,Thermo公司),離心機(RC5Cplus,SORVALL公司),超聲儀(SK5200LH,KUOOS公司),電子天平(AUW120D,SHIMADZU公司)。1.2實驗方法1.2.1老氏草醇浸膏超聲提取液與老鰲草醇浸膏的復合方法,及其比較超聲提取液中新型助劑的含量測定以沒食子酸為對照品,利用鞣質在堿性條件下與鎢酸鈉反應產生藍色,其顏色深度與含量成正比的原理,測定老鸛草乙醇浸膏及超聲提取液中鞣質含量;以槲皮素為對照品,利用黃酮類分子中的酚羥基可與Al3+在堿性溶液中顯色的原理,測定老鸛草乙醇浸膏及超聲提取液中總黃酮含量。1.2.2對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的沒食子酸對照品20mg,置于100mL棕色容量瓶中,加90%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液Ⅰ。精密稱取干燥至恒重的槲皮素對照品6.7mg,置于25mL棕色容量瓶中,用90%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液Ⅱ。1.2.3老連帶樹葉片浸膏的制備準確稱取老鸛草粗粉2g,加90%乙醇約30mL,超聲提取30min,提取后過濾,重復處理3次,用90%乙醇洗滌殘渣,合并提取液至100mL棕色容量瓶中,加90%乙醇至刻度,搖勻,作為供試品溶液Ⅰ(生藥濃度20mg/mL)。準確稱取老鸛草粗粉2.0kg,用93%的工業酒精浸潤后裝入滲漉柱,加入該濃度酒精并使液面浸沒藥粉,于室溫下密閉放置24h后,調節滲漉液呈勻速滴狀流出。共加入10倍量酒精,過濾、合并濾液,在55℃下將滲漉液減壓濃縮,揮干溶劑后得棕色浸膏(1g浸膏相當于25g生藥材),浸膏置于4℃冰箱貯存。精密稱取老鸛草浸膏100mg,用90%乙醇溶解并定容至50mL容量瓶中,搖勻,作為供試品溶液Ⅱ(生藥濃度50mg/mL)。1.2.4folin試劑分別量取對照品溶液Ⅰ1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL棕色容量瓶中,分別依次加入90%乙醇溶液4.0、3.0、2.0、1.0、0mL于各容量瓶中,然后加入0.1mol/L醋酸-醋酸鈉緩沖溶液(pH5.0)至刻度,搖勻。分別量取各溶液1.0mL置于另一組10mL棕色容量瓶中,各加入Folin試劑0.5mL,再加1.5%碳酸鈉溶液至刻度,搖勻,室溫放置15min后離心5min(3000r/min)。以不加沒食子酸的試劑混合液作為空白對照。將對照品溶液在500-900nm波長范圍內進行光譜掃描,確定最大吸收波長,根據在最大吸收波長處的吸光度,繪制標準曲線,得出回歸方程。精密量取對照品溶液Ⅱ0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分別置于10mL棕色容量瓶中,加5%亞硝酸鈉0.3mL,放置6min,加10%硝酸鋁0.3mL,放置6min,加4%氫氧化鈉2mL,加90%乙醇至刻度,搖勻,放置15min。以不加槲皮素標準品的試劑混合液作為空白對照。將對照品溶液在250-700nm波長范圍內進行光譜掃描,確定最大吸收波長,根據在最大吸收波長處的吸光度,繪制標準曲線,得出回歸方程。1.2.5精密度測試精密量取同一對照品溶液6份,在最大吸收波長處測定吸光度,計算RSD值。1.2.6穩定性試驗待供試品溶液顯色后,分別對供試品溶液Ⅰ、Ⅱ每隔30min在最大波長處測定一次吸光度,連續考察3h,分析樣品含量差異。1.2.7樣品含量的測量1.2.7.不同碳酸鈉溶液的配制精密量取供試品溶液Ⅰ15mL、Ⅱ10mL分別盛于25mL棕色容量瓶中,各加入0.1mol/L醋酸-醋酸鈉緩沖溶液10mL,再用90%乙醇定容至25mL、混勻,得樣品溶液Ⅰ、Ⅱ;分別精密量取1mL,置10mL棕色容量瓶中,加入Folin試劑0.5mL,再加1.5%碳酸鈉溶液至刻度,搖勻,室溫放置15min,后離心5min(3000r/min)。在780nm波長處測定吸光度,按標準曲線計算出供試品溶液中沒食子酸含量(mg)。1.2.7.供試品溶液中沒食子酸含量mg的測定分別精密量取供試品溶液Ⅰ、Ⅱ各10mL,加至已盛有干酪素0.35g的50mL具塞錐形瓶中,密塞,置30℃搖床,100r/min振搖1h后,取出,放冷,搖勻,過濾,棄去初濾液,精密量取續濾液1mL,置10mL棕色容量瓶中,加入Folin試劑0.5mL,再加1.5%碳酸鈉溶液至刻度,搖勻,室溫放置15min,后離心5min(3000r/min)。在780nm波長處測定吸光度,按標準曲線回歸方程計算出供試品溶液中沒食子酸含量(mg)。按下式計算鞣質的含量:鞣質含量=總酚量-不被吸附的多酚量1.2.7.硝酸鹽鋁溶液的配制分別精密量取供試品溶液Ⅰ5mL、Ⅱ3mL,置10mL棕色容量瓶中,加5%亞硝酸鈉0.3mL,放置6min,再加10%硝酸鋁0.3mL,放置6min,加4%氫氧化鈉2mL,加90%乙醇至刻度,搖勻,放置15min。在372nm波長處測定吸光度,按標準曲線回歸方程計算出供試品溶液中總黃酮含量(mg)。2結果2.1根據老鸛草中鉻含量的測定2.1.1標準曲線及線性范圍將對照品溶液在500-900nm波長范圍內進行光譜掃描,在780nm處均有最大吸收,故確定在780nm下測定各溶液的吸光度,在此波長處測定吸光度A為縱坐標,濃度C(mg/mL)為橫坐標,得回歸方程:A=123.665C+0.05427,r=0.99933,在0.002-0.010mg/mL的范圍內,沒食子酸濃度與吸光度有良好的線性關系。根據樣品在780nm的光吸收值按標準曲線回歸方程計算出供試品溶液中鞣質含量(mg),結果詳見表1。2.1.2精密度測試在波長780nm處測定吸光度,RSD為1.2591%(n=6),結果表明儀器精密度良好。2.1.3顯色后時間的確定待供試品溶液顯色后,分別對供試品溶液Ⅰ、Ⅱ每隔30min在波長780nm處測定一次吸光度,連續考察3h,結果表明顯色后15min至3h內樣品含量無顯著差異。表明供試品溶液在3h內穩定。2.2黃酮含量測定2.2.1線性關系將對照品溶液在250-700nm波長范圍內進行光譜掃描,在372nm處均有最大吸收。以372nm處測吸光度A為縱坐標,濃度C(mg/mL)為橫坐標,得回歸方程A=47.485C+0.00629,r=0.9991,在0.00268-0.0134mg/mL范圍內,槲皮素濃度與吸光度有良好的線性關系。根據樣品在372nm的光吸收值,按標準曲線回歸方程計算出供試品溶液中總黃酮含量(mg),結果詳見表2。2.2.2精密度測試精密量取同一對照品溶液6份,在波長372nm處測定吸光度,RSD為2.6433%(n=6),結果表明儀器精密度良好。2.2.3顯色后時間的確定待供試品溶液顯色后,分別對兩類供試品溶液每隔30min在波長372nm處測定一次吸光度,連續考察3h,結果表明顯色后15min至3h內樣品含量無顯著差異。表明供試品溶液在3h內穩定。3討論3.1生理活性的0.2法本實驗采用羅文毓等設計的改良干酪素法測定鞣質含量,其特點在于干酪素能選擇性地結合有生理活性的鞣質,因此測出的是具有生理活性的鞣質,而無生理活性的鞣

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論