實驗十一秦皮中七葉苷、七葉內酯的提取、分離和鑒定秦皮為本樨科白蠟樹屬植物白蠟樹(FraxinusChinensisPoxb)或苦瀝白蠟樹(F.rhynchophyllaHance)或小葉白蠟樹(F.bungeanaDC)的樹皮，味苦，性微寒。具有清熱、燥濕、收澀作用。主治溫熱痢疾、目赤腫瘤等癥。秦皮中含有多種內酯類成分及皂苷、鞣質等，其中主要有七葉苷、七葉內酯、秦皮苷及秦皮素等。多有抗菌消炎的生理活性，七葉內酯對細菌性痢疾、急性腸炎有較好治療效果，兼有退熱作用，毒付作用小，幾無苦味。適于小兒服用。一．秦皮中主要成分的結構及性質1.七葉苷(esculin)，又叫馬粟樹皮苷：白色粉末狀結晶，mp205?206°C。易溶于熱水(1:15)，可溶于乙醇(1:24)，微溶于冷水(1:610)，難溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚、氯仿。在稀酸中可水解。水溶液中有藍色熒光。HOHO0^；?OHOHO0^；?O七葉苷(esculin)HOg[u_O七葉內酯(esculetin)2.七葉內酯2.七葉內酯(esculetin)：黃色針狀結晶,mp276C。易溶于沸乙醇及氫氧化鈉溶液,可溶于乙酸乙酯，稍溶于沸水，幾不溶于乙醚、氯仿。3.秦皮苷(fraxin)：mp205C。秦皮素(fraxetin)秦皮苷(秦皮素(fraxetin)4?秦皮素(fraxetin)：mp227?228C。實驗目的掌握從秦皮中提取、分離七葉苷、七葉內酯的方法。熟悉七葉苷、七葉內酯的性質及鑒定法。實驗原理根據七葉苷、七葉內酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇將二者提取出來，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分離之。實驗材料材料秦皮粗粉、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、無水硫酸鈉、甲醇、1%FeCl3、濃氨水、甲苯、甲酸乙酯儀器索氏提取器、紫外燈、試管、梨形分液漏斗、布氏漏斗、精制棉、循環水泵、旋轉蒸發器、電熱套、水浴鍋實驗內容提?。喝∏仄ご址?50g于索氏提取器中，加400ml乙醇回流10-12小時，得乙醇提取液，減壓回收溶劑至浸膏狀，即得總提取物。分離：在上述浸膏中加40ml水加熱溶之。移入分液漏斗中，以等體積氯仿萃取二次，將氯仿萃取過的水層蒸去殘留氯仿后加等積乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以無水硫酸鈉脫水，減壓回收溶劑至干，殘留物溶于溫熱甲醇中，濃縮至適量，放置析晶，即有黃色針狀結晶析出。濾出結晶。甲醇、水反復重結晶，即得七葉內酯。將乙酸乙酯萃取過的水層濃縮至適量，放置析晶，即有微黃色晶體析出。濾出結晶。以甲醇，水反復重結晶，即得七葉苷。鑒定：1.化學檢識：取七葉苷、七葉內酯各少許分別置試管中，加乙醇1ml溶解。加l%FeCl3溶液2—3滴，顯暗綠色，再滴加濃氨水3滴，加水6ml,日光下觀察顯深紅色。2．薄層鑒定：吸附劑：硅膠G樣品：七葉苷、七葉內酯標準品及自制七葉苷、七葉內酯的醇溶液。展開劑：甲醇—甲酸乙酯—甲苯(1:4:5)顯色：1)uv254燈下觀察，七葉苷為灰色熒光，七葉內酯為灰褐色。2)以重氮化對硝基苯胺噴霧顯色，七葉苷和七葉內酯均呈瑪瑙色。結果：七葉苷Rf=O.04，七葉內酯Rf=0.28實驗六從三棵針中提取、分離小檗堿與小檗胺三棵針為小檗屬(Berberis)植物，種類繁多，是黃連、黃柏的重要代用品。根中含多種生物堿，有季胺類生物堿，如小檗堿(Berberine)1.2—3%,根皮含3—5.5%，少量巴馬亭(Palmatine)、藥根堿(Jatrorrhigine)、非洲防己堿(Columbamine)、木蘭花堿(Magnoflorine),有叔胺堿，如小檗胺(Berbamine)O.45—3.84%，尖刺堿(Oxyacanthine)，異粉防己堿(1sotetrandrine)等。小檗堿是一種常用的抗菌藥，對菌痢、腸炎、上呼吸道感染等疾病有良好的療效。小檗胺有升白、降壓、利膽及鎮咳等作用，對預防和治療白細胞減少療效較好。一.三棵針中已知生物堿的結構和性質1.小檗堿(Berberine)一種異喹啉生物堿。分子式[C20H18NO4]o又稱黃連素。存在于小檗科等4科10屬的許多植物中。小檗堿從乙醚中可析出黃色針狀晶體。熔點145r。溶于水，難溶于苯、乙醚和氯仿。小檗堿為一種季銨生物堿，與氯仿、丙酮、苯均能形成加成物，從水或稀乙醇中析出的晶體帶有5.5分子結晶水；若從氯仿、丙酮或苯中結晶，也帶有相應的結晶溶劑分子。小檗堿用不同的堿處理，可得到季銨式、醛式和醇式等三種不同形式的小檗堿，其中以季銨式最穩定。小檗堿鹽酸鹽(BerberineChSride)C2oH16O4N^Cl2H2O，熔點205r(分解)，微溶于冷水，較易溶于沸水，其硝酸鹽及氫碘酸鹽，極難溶于水(冷水約1:2000)。小檗堿的中性硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽在水中溶解度較小，小檗堿的鹽類在水中的溶解度：鹽酸小檗堿1:500硫酸小檗堿1:30(酸性鹽1:100)枸櫞酸小檗堿1:125磷酸小檗堿1:15OCH小檗堿對溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、淋球菌和弗氏、志賀氏痢疾桿菌均有抗菌作用，并有增強白血球吞噬作用。小檗堿的鹽酸鹽(俗稱鹽酸黃連素)已廣泛用于治療胃腸炎、細菌性痢疾等，對肺結核、猩紅熱、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定療效。2.小檗胺(Berbamine)白色或無色結晶，難溶于水，易溶于乙醇中，可溶于乙醚，氯仿、石油醚。二．實驗目的1．了解小檗堿，小檗胺的結構與性質，掌握提取分離方法。2．了解小檗堿，小檗胺的鑒識反應及薄層色譜鑒別。三．實驗原理本實驗的提取分離原理是：小檗堿、小檗胺的硫酸鹽易溶于水，小檗堿的鹽酸鹽難溶于水，小檗胺的鹽酸鹽可溶于水，游離的小檗堿為季胺堿可溶于水，游離的小檗胺是叔胺堿，難溶于水。因此，將植物原料用稀H2SO4溶液浸泡，然后用石灰乳調至PH12左右，小檗堿游離而溶于水，小檗胺含酚羥基成鈣鹽也溶于水，粘液質及過量硫酸生成不溶性鈣鹽而沉淀析出，再加NaCl,并用鹽酸調pH8左右時，小檗堿成難溶性的氯化小檗堿而析出，小檗胺游離析出，最后利用氯化小檗堿在熱水中溶解度較大的性質與小堿胺分離。四．實驗材料材料三棵針粗粉、燒杯(lOOOmL、100mL、50mL)、0.2%H2SO4(V/V)、紗布、石灰乳、8%NaCl(W/V)、濃HC1、乙醇、2%活性炭、5%NaOH、乙醚、濃HNO3、鋅粒、濃H2SO4、固體硝酸鈉、KMnO4、5%HCl、氯仿、甲醇、氨水儀器點滴板、lOOOmL圓底燒瓶、層析柱、試管、梨形分液漏斗、布氏漏斗、精制棉、循環水泵、旋轉蒸發器、水浴鍋、電吹風五．實驗內容小檗堿與小檗胺的提取分離取三棵針粗粉100克，置1000毫升三角瓶內，加700毫升0.2%(V/V)的H2SO4溶液浸泡24小時，紗布過濾，再用400毫升酸水同法提取一次，合并兩次濾液于搪瓷缸內，攪拌下加人石灰乳至pH至12,靜置30分鐘，抽濾，濾液中加入計算量(8%W/V)的NaCl,靜置，待沉淀完全后，滴加濃HCl至PH至8?8.5，于80°C熱水中保溫半小時，靜置，抽濾，所得沉淀于60C以下干燥，稱重，置100毫升燒杯中，加入30倍量蒸餾水，加熱至沸，趁熱抽濾，濾液內含小檗堿，沉淀為小檗胺的粗品。精制：趁熱向上述濾液中滴加濃鹽酸，調pH至2，靜置氯化小檗堿沉淀析出，抽濾，60C以上干燥，稱重，計算得率(不得低于0.2%)上步所得沉淀，60C以下干燥，稱重，置50毫升燒杯中，加20倍量乙醇加熱溶解，加入2%活性炭，再加熱煮沸5分鐘，熱過濾，濾液蒸除乙醇，剩1/4量，冷卻，滴加蒸餾水至不再析出沉淀為止，用5%NaOH調pH至8—8.5,80C水浴加熱5分鐘左右，放置，抽濾，干燥，再以10倍量乙醚溶解，過濾，回收乙醚，得白色小檗胺。鑒識1．小檗堿的鑒識取氯化小檗堿水溶液數滴，加濃HNO31滴，觀察現象，再滴加濃HNO3觀察有何變化?解釋現象。取氯化小檗堿水溶液數滴，加鋅粒少許，再加濃H2SO4數滴，觀察現象并解釋。取氯化小檗堿水溶液數滴；加5%NaOH2?3滴，再加丙酮數滴，觀察現象并解釋。2．小檗胺的定性取小檗胺結晶少量，置白瓷板上，加5%HC1滴使溶解再加固體硝酸鈉使之飽和，移入毛細管中觀察。取l?2粒KMn04置白瓷板上，加5%HCl數滴使溶解，再加少量小檗胺結晶，觀察顏色變化。薄層色譜層析板：硅膠G板，110°C，活化半小時。展開劑：氯仿—甲醇—氨水(15:4:0.5)樣品：氯化小檗堿乙醇液氯化小檗堿標準品液小檗胺乙醇液小檗胺標準品液顯色：碘蒸汽或改良磺化鉍鉀六．實驗說明及注意事項：1．用硫酸浸泡時，硫酸的濃度以0.2％為宜，此時生成的硫酸小檗堿在水中溶解度較大若加入過量，小檗堿就形成酸式硫酸鹽，水中溶解度就降低(1:100)