高效液相色譜法測定蒲公英中木草素的含量

蒲公英是薔薇科植物的蒲公英（taraxacumhand.maya），以及屬于各種植物的干燥全草。蒲公英中含有多種化學(xué)成分,如三萜類、黃酮類、有機(jī)酸等。而木樨草素及其葡萄糖苷為蒲公英中主要的黃酮類化合物之一。木樨草素具有多種藥理活性,如抗炎、抗腫瘤、抗過敏、抗纖維化等。為了考察宜賓地區(qū)蒲公英的質(zhì)量,本文把木樨草素作為考察對象之一,建立了高效液相色譜法測定蒲公英中木樨草素的含量。結(jié)果宜賓七個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)蒲公英中有六個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)木樨草素的含量高于四個(gè)市售外地蒲公英藥材。1儀器和試劑盒1.1儀器高效液相色譜儀(美國Waters公司);startoriusCP225D電子天平(德國)。1.2產(chǎn)品及藥材鑒定木樨草素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110885-200102);蒲公英(宜賓本地采集,經(jīng)重慶中藥研究院趙素云教授鑒定為亞洲蒲公英(TaraxacumasiaticumDahlst.)及市售蒲公英藥材;乙腈(色譜純,DIKMA公司),水為超純水,其余試劑為分析純。2方法和結(jié)果2.1乙腈-1.1%磷酸法色譜柱:KromasilC18柱(200mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸溶液(28:72);流速:1.0ml·min-1;檢測波長:349nm;柱溫;35℃;進(jìn)樣量:20μl;理論板數(shù)按木樨草素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。在此色譜條件下,木樨草素與相鄰峰的分離度良好,溶劑對測定無干擾。色譜圖見圖1。2.2貯備液的配制精密稱取木犀草素對照品適量,用甲醇配制成100μg·ml-1的貯備液。精密量取3ml貯備液,置100ml量瓶中,加甲醇定容,搖勻,作為對照品溶液。2.3供試品溶液的制備精密稱取1g蒲公英粉末,置具塞錐形瓶中,精密加入50ml5%甲酸的乙醇溶液,稱定重量,超聲處理(200W,40kHz)30min,放冷,再稱定重量,用5%甲酸的乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.4進(jìn)樣、色譜條件的確定分別精密量取對照品貯備液0.5,1.5,3,4.5,6ml置100ml量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,制成系列濃度溶液,按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣,分別測定其峰面積。以峰面積A對濃度C(μg·ml-1進(jìn)行線性回歸,其回歸方程為:A=1.163×105C+3.024×103(r=0.9998),線性范圍0.515～6.180μg·ml-1。2.5精密度測試精密吸取對照品溶液20μl,按色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,測得木樨草素峰面積的RSD為0.4%。2.6標(biāo)準(zhǔn)品溶液與供試品溶液中木草素的峰面積rsd分別吸取上述對照品溶液和供試品溶液各20μl,每隔2h進(jìn)樣測定一次,共測定6次,對照品溶液與供試品溶液中木樨草素峰面積的RSD分別為0.9%、1.4%。結(jié)果表明對照品溶液和供試品溶液均在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.7外標(biāo)法計(jì)算含量取蒲公英粉末按“2.3”項(xiàng)的方法制備供試品溶液6份,分別進(jìn)樣,記錄色譜圖,按外標(biāo)法計(jì)算含量。木樨草素平均含量為1.62mg·g-1,RSD為0.8%,表明本法重復(fù)性良好。2.8對照品貯備液的配制取已知木樨草素含量為0.166mg·g-1的蒲公英粉末0.5g共9份,分別準(zhǔn)確加入一定量的木樨草素對照品貯備液,按“2.3”項(xiàng)的方法配制成低、中、高不同濃度的溶液。在“2.1”項(xiàng)的色譜條件下進(jìn)樣20μl,記錄色譜圖,計(jì)算回收率,結(jié)果平均回收率為102.10%,RSD為1.25%(n=9)。2.9樣品測定取蒲公英粉末,照“2.3”項(xiàng)的方法制備供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)的色譜條件測定。以外標(biāo)法計(jì)算樣品中木樨草素的含量,結(jié)果見表1。3流動(dòng)相的確定試驗(yàn)以甲醇為溶劑,在200～400nm波長范圍內(nèi)測定木樨草素的紫外吸收光譜,結(jié)果其最大吸收波長為349nm,故選擇349nm為檢測波長。試驗(yàn)中分別采用了甲醇-磷酸水溶液系統(tǒng)、甲醇-水-醋酸系統(tǒng)、乙腈-水-醋酸系統(tǒng)以及乙腈-磷酸水溶液系統(tǒng),結(jié)果乙腈-磷酸水溶液系統(tǒng)下,木犀草素的峰形與分離度均良好,因此選用了乙腈-磷酸水溶液作為流動(dòng)相,