黑果腺肋花楸提取物的急性毒性和致突變性研究

黑果林冠層是薔薇科灌木。由于其高的經濟和生態價值，她在20年前在國外首次引進中國。這種水果含有豐富的營養和生物活性物質，具有較強的抗逆性、抗炎性和抗菌性。1材料和方法1.1測試對象黑果腺肋花楸果提取物溶液，其主要功效成分為原花青素(含量為2.79%)，擬用于功能性保健食品，由山西某科技公司生產。1.2動物飼料和動物房SPF級健康成年昆明種小鼠，由廣西醫科大學實驗動物中心繁殖，實驗動物生產許可證號SCXK(桂)2014-0002，質量合格證號45000300000854、45000300000864。動物飼料由廣東省醫學實驗動物中心生產，生產許可證號SCXK(粵)2013-0002，質量合格證編號44200300016584。動物房為屏障系統，使用許可證號SYXK(桂)2016-0002。動物實驗室溫度為22～25℃，相對濕度為55%～70%。1.3試驗消毒鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102四種菌株，購于美國MOLTOX公司。1.4實驗方法1.4.1試驗前食性測定采用最大耐受量試驗法，選取體質量為18～22g的昆明種成年小鼠20只，雌、雄性各10只，試驗前禁食16h，不限飲水。采用最大給藥量法，按0.02mL/g給小鼠灌胃黑果腺肋花楸果提取物溶液1次，濃度為20mg/kg(原花青素的濃度為558mg/kg)，灌胃后觀察、記錄小鼠的中毒表現，觀察14d，以半數致死劑量(medianlethaldose,LD1.4.2試驗菌株設置采用經鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102四種試驗菌株，設8、40、200、1000、5000μg/皿5個濃度組，同時設自發回變對照、溶劑對照和陽性誘變劑對照。自發回變對照不加受試物，其余條件相同。采用平板摻入法，將試驗菌株增菌液0.1mL、受試溶液0.1mL，代謝活化組再加入10%S1.4.3成年小鼠引進設2.5、5、10g/kg3個濃度組，同時設陰性(溶劑)對照和環磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)陽性對照，每組10只25～30g的昆明種成年小鼠，雌、雄性各5只。按0.02mL/g給小鼠灌胃受試物2次(間隔24h)，于末次給受試物后6h處死小鼠，取胸骨骨髓制片，甲醇固定，Giemsa染色，在油鏡下觀察每只小鼠的1000個嗜多染紅細胞(PCE)，計數含微核的細胞數，計算微核細胞率。同時計數200個嗜多染紅細胞，計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比值(PCE/NCE)。1.4.4精子畸形試驗劑量及對照組設計同1.4.3項，每組10只25～35g的昆明種成年雄性小鼠，每天灌胃給受試物1次，連續5d，于末次給受試物后第30天處死動物，解剖取出兩側附睪，置生理鹽水中輕輕將其撕裂、搖晃，過濾取精子制片，伊紅染色，在高倍鏡下觀察每只小鼠的1000個完整精子，計算精子畸形率。1.5畸形率等指標的統計結果實驗動物的體質量、菌落數、微核細胞率、PCE/NCE及精子畸形率等指標的統計結果以xˉ±s表示。骨髓細胞微核試驗各組間的微核細胞率的均數比較采用Poisson分布的近似正態法進行統計分析，精子畸形試驗各組間的精子畸形率的均數比較采用χ2結果2.1小鼠的體質量變化給予黑果腺肋花楸提取物溶液14d內，未發現小鼠有中毒體征和死亡，小鼠的進食和飲水未見異常，小鼠的體質量增長未受到明顯影響，見表1。觀察期結束解剖小鼠，肉眼觀察心臟、肺臟、肝臟、腎臟、脾臟、胰腺、睪丸、卵巢及胃腸等主要器官組織未見異常。由此可見，該受試物對小鼠的急性經口毒性LD2.2細菌回復突變試驗細菌回復突變試驗的結果見表2，在加入或不加入S2.3ctx對小鼠骨髓細胞微核試驗結果骨髓細胞微核試驗的結果見表3，黑果腺肋花楸提取物各劑量組的微核率及PCE/NCE值與陰性對照組接近，差異無統計學意義(P>0.05)，各劑量組的PCE/NCE值均不少于陰性對照組的20%，而CTX陽性對照組的微核率則顯著高于陰性對照組(P<0.01)，提示未見該受試物對小鼠的骨髓細胞有損傷和抑制作用。2.4小鼠精子畸形試驗精子畸形試驗的結果見表4，黑果腺肋花楸提取物各劑量組的精子畸形率與陰性對照組接近，差異無統計學意義(P>0.05)，而CTX陽性對照組的精子畸形率則顯著高于陰性對照組(P<0.01)，提示未見該受試物對雄性小鼠的精子產生畸變作用。3急性毒性試驗黑果腺肋花楸被引進我國種植的時間不長，迄今未見有中毒報道，現有文獻尚無黑果腺肋花楸果實、果汁和提取物的任何有害和毒性作用的數據本研究檢測黑果腺肋花楸提取物的急性毒性，并聯合體外細菌回復突變試驗與