活血化瘀促進(jìn)骨折愈合的機(jī)制淺述

梁巖張顯勝（山東省平度市第五人民醫(yī)院，青島266742）活血化瘀促進(jìn)骨折愈合的機(jī)制淺述梁巖張顯勝（山東省平度市第五人民醫(yī)院，青島266742）目的本文的目的是為了探討中醫(yī)活血化瘀中藥制劑對(duì)大鼠成骨細(xì)胞功能作用影響及其機(jī)制，為中醫(yī)活血化瘀法促進(jìn)骨折愈合提供依據(jù)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：復(fù)元活血湯含藥血清能夠通過(guò)促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞合成和分泌堿性磷酸酶，促進(jìn)成骨細(xì)胞功能，為活血化瘀中藥促進(jìn)成骨細(xì)胞功能及活血化瘀法促進(jìn)骨折愈合提供了依據(jù)。中醫(yī)活血化瘀法；骨折愈合；提升機(jī)制研究本文選用復(fù)元活血湯含藥血清為藥物組，采用血清藥理學(xué)方法培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，分別在培養(yǎng)第1，2，3，4，5天做MTT法細(xì)胞增殖功能測(cè)定、PNPP法ALP活性測(cè)定、AKP法成骨細(xì)胞堿性磷酸酶定量測(cè)定以及第3，5，7，9，12，15天做茜素紅染色礦化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)。通過(guò)對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)隨時(shí)間變化的觀察以及各組之間對(duì)比，來(lái)探索復(fù)元活血湯含藥血清對(duì)大鼠成骨細(xì)胞功能作用影響及其機(jī)制。1活血化瘀法促進(jìn)骨折愈合的機(jī)制研究1.1復(fù)元活血湯的構(gòu)成與藥理作用分析臨床常用的骨折治療方法就是活血化瘀法，可以促進(jìn)骨折愈合及其損傷修復(fù)，能明顯加快微循環(huán)血流速度，增加毛細(xì)血管網(wǎng)的通透性，清除血凝塊及其代謝產(chǎn)物，使斷端產(chǎn)生良好血供，為骨折愈合提供營(yíng)養(yǎng)及清除代謝產(chǎn)物。活血可以促進(jìn)骨折斷端成骨細(xì)胞的增值與分化功能，從而加速骨折的愈合。通過(guò)我們的實(shí)驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)中藥活血藥對(duì)成骨細(xì)胞的增值與分化均有明顯的促進(jìn)作用，且具有明顯的劑量依賴性。中藥復(fù)元活血湯是依據(jù)活血化瘀法而制定的，由柴胡、當(dāng)歸、紅花、穿山甲、大黃、桃仁、甘草等組成的復(fù)方中藥，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、改善微循環(huán)的藥理作用。現(xiàn)代研究已經(jīng)證明復(fù)元活血湯可以促進(jìn)大鼠的骨折愈合，提高骨鈣含量，并可降低血液粘度，改善血液循環(huán)。1.2活血化瘀法對(duì)骨折愈合的機(jī)理1.2.1提高成骨細(xì)胞的活性成骨細(xì)胞主要由內(nèi)外骨膜和骨髓基質(zhì)內(nèi)的充質(zhì)始祖細(xì)胞分化而來(lái)，是骨組織工程的基本三要素之一。成骨細(xì)胞的功能有：合成分泌膠原與糖蛋白，形成骨基質(zhì)，骨基質(zhì)的主要成分是Ⅰ型膠原，由成骨細(xì)胞合成，并通過(guò)堿性磷酸酶等多種酶介導(dǎo)骨組織的礦化過(guò)程；參與了破骨細(xì)胞性骨吸收的調(diào)控作用，維持骨的代謝平衡，成骨細(xì)胞是骨吸收刺激因子，PTH、前列腺素等的直接作用者，因?yàn)槌晒羌?xì)胞表達(dá)它們的受體，成骨細(xì)胞提供了向破骨細(xì)胞傳遞骨吸收信號(hào)的“第二信使”，激活破骨細(xì)胞和調(diào)節(jié)骨吸收；分泌多種造血生長(zhǎng)因子，成骨細(xì)胞可以分泌GM-CSF、G-CSF等造血生長(zhǎng)因子。成骨細(xì)胞對(duì)造血干、祖細(xì)胞調(diào)控的前提條件是成骨細(xì)胞必須與造血細(xì)胞直接接觸。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)MMT法觀察復(fù)元活血湯含藥血清對(duì)成骨細(xì)胞增殖功能有明顯的促進(jìn)作用；通過(guò)PNPP法觀察其能促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化，雖在早期不明顯，但隨著時(shí)間推移效果更明顯；通過(guò)計(jì)數(shù)成骨細(xì)胞的礦化結(jié)節(jié)發(fā)現(xiàn)能促進(jìn)成骨細(xì)胞的礦化結(jié)節(jié)形成；最后，通過(guò)對(duì)成骨細(xì)胞堿性磷酸酶的定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)含藥血清能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞合成與分泌AKP。因此，中醫(yī)活血化瘀法能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞的功能。1.2.2改善骨折局部血液循環(huán)與血液的流變學(xué)性質(zhì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子是目前公認(rèn)最強(qiáng)的促血管形成因子，通過(guò)與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的特異性受體結(jié)合，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生與血管生成，是促進(jìn)血管再生的最終通道。研究發(fā)現(xiàn)，中藥活血祛瘀能夠促進(jìn)骨折愈合過(guò)程中VEGF的表達(dá)并降低血液的粘稠度。不少臨床研究發(fā)現(xiàn)：桃紅四物湯在骨折愈合過(guò)程中，具有正向調(diào)高VEGFmRNA轉(zhuǎn)錄水平，延長(zhǎng)局部VEGFmRNA高表達(dá)時(shí)間，促進(jìn)骨折斷端微血管新生，加快骨痂毛細(xì)血管重建，促進(jìn)骨折愈合的作用，復(fù)元活血湯可降低血液粘度且與劑量成正相關(guān)。1.2.3刺激骨生長(zhǎng)因子的分泌骨生長(zhǎng)因子是從骨基質(zhì)、骨器官及其骨細(xì)胞培養(yǎng)液中分離出來(lái)的，如BMP、FGF、VEGF、PDGF、IGF-1、IGF-2以及神經(jīng)肽類等，在骨折愈合過(guò)程中發(fā)揮了積極作用。實(shí)驗(yàn)觀察表明活血化瘀湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠骨折愈合過(guò)程中的TGF-β1表達(dá)的影響可以發(fā)現(xiàn)活血化瘀湯能夠通過(guò)促進(jìn)TGF-β1表達(dá)，促進(jìn)軟骨內(nèi)成骨，最終促進(jìn)骨折愈合。2評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)選用SD大鼠乳鼠頭蓋骨獲取成骨細(xì)胞，采用血清藥理學(xué)的方法培養(yǎng)成骨細(xì)胞，試驗(yàn)方法的選擇與具體操作尚須要進(jìn)一步完善。骨折愈合中各種因子的作用及其相互關(guān)系目前尚不完全明了。活血化瘀中藥對(duì)成骨細(xì)胞的影響及其途徑有待進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示復(fù)元活血湯含藥血清能夠通過(guò)促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞合成和分泌堿性磷酸酶，促進(jìn)成骨細(xì)胞功能，進(jìn)而從分子細(xì)胞學(xué)水平證明活血化瘀法能夠促進(jìn)骨折愈合。［1］劉瑩瑩.中藥復(fù)方藥代動(dòng)力學(xué)研究新進(jìn)展［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，01.［2］張恒.復(fù)方活血湯對(duì)大鼠骨折轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1、血清Ⅰ型膠原骨鈣表達(dá)