腫瘤的基因診斷溫州醫學院檢驗醫學院溫州醫學院附一醫檢驗科陶志華腫瘤的基因診斷溫州醫學院檢驗醫學院1

腫瘤是細胞的異常增生有結構、功能和代謝的異常具有超過正常細胞增生能力腫瘤概念腫瘤是細胞的異常增生腫瘤概念2

在細胞內核酸代謝的異常:腫瘤細胞和正常細胞的核酸代謝有顯著的不同；不同類型腫瘤細胞的核酸代謝也有較大的差異；相同惡性程度腫瘤細胞的核酸代謝也有所不同。

腫瘤是一種分子病在細胞內核酸代謝的異常:腫瘤是一種分子病3

癌基因的激活抑癌基因的失活（或缺失）腫瘤發生機理癌基因的激活腫瘤發生機理4原癌基因癌基因病毒癌基因腫瘤抑制基因腫瘤轉移相關基因腫瘤耐藥基因等腫瘤相關基因原癌基因腫瘤相關基因5細胞基因組中具有能夠使正常細胞發生惡性轉化的基因癌基因在正常細胞的基因組中存在不表達狀態表達水平不足以引起細胞的惡性轉化癌基因：細胞基因組中具有能夠使正常細胞發生惡性轉化的基因癌基因：6定位功能癌基因，產物分泌蛋白生長因子sisPDGFβ鏈跨膜蛋白受體型酪氨酸激酶erbB,EGF受體erbB2,EGF樣受體(neu)fms,CSF-1受體膜結合蛋白G-蛋白非受體型酪氨酸激酶rasp21rassrcpp60src胞漿可溶性蛋白非受體型酪氨酸激酶絲氨酸/蘇氨酸激酶信號轉導連接蛋白ab1rafcrk,SH2/SH3調節蛋白vav,SH2調節蛋白胞核蛋白轉錄因子mycmybfosjunerbA,T3受體表1細胞癌基因按其產物定位和功能分類定位功能癌基因，產物分泌蛋白生長因子sisPDGFβ鏈跨膜7能夠抑制細胞惡性轉化或抑制細胞異常增殖的基因

目前研究較多的有p53基因、pRB基因、p16蛋白、p15蛋白、p21等。

抑癌基因能夠抑制細胞惡性轉化或抑制細胞異常抑癌基因8基因染色體定位相關腫瘤基因產物及功能RB13q14RB、成骨肉瘤、胃癌、SCLC、乳癌、結腸癌p105，控制生長WT11p13WT、橫紋肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、肝母細胞瘤WT-ZFP，負調控轉錄因子NF-117p12神經纖維瘤、嗜鉻細胞瘤、雪旺氏細胞瘤、神經纖維肉瘤GAP，拮抗p21rasBDCC18q21.3結腸瘤P192,細胞粘附分子p5317p13星狀細胞瘤、膠質母細胞瘤、結腸癌、乳癌、成骨肉瘤、SCLC、胃癌、磷狀細胞肺癌P53控制腫瘤生長erbA17q21ANLLT3受體，含鋅指結構的轉錄因子表2已確定的幾種抑癌基因

基因染色體定位相關腫瘤基因產物及功能RB13q14RB、成骨9野生型P53生物學活性當DNA損傷的時候,P53基因就明顯表達使細胞在G1期生長阻滯，促使細胞凋亡。抑制腫瘤細胞生長保持DNA完整性野生型P53生物學活性當DNA損傷的時候,P53基因就明顯表10包括腫瘤轉移促進基因或腫瘤轉移抑制基因。腫瘤轉移相關基因包括腫瘤轉移促進基因或腫瘤轉移抑制腫瘤轉移相關基因11其表達使腫瘤細胞對藥物產生耐藥的基因。

腫瘤耐藥基因其表達使腫瘤細胞對藥物產生耐藥的基因。腫瘤耐藥基因12

血小板衍生生長因子（PDGF）表皮生長因子（EGF）VGF基因等腫瘤生長因子

血小板衍生生長因子（PDGF）腫瘤生長因子13

腫瘤的基因診斷腫瘤的基因診斷目前主要集中在以下幾個方面：腫瘤轉移標志物腫瘤抗藥基因突變的癌基因腫瘤相關的病毒基因腫瘤的基因診斷腫瘤的基因診斷目前主要集中在以下幾個方面：14標志分類機制分子標志應用于癌癥診斷分子遺傳性染色體易位

t(9；22)，t（14；18），t(11；12)等白血病、淋巴瘤等點突變p53,ERras等胃癌、膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、結腸癌、胰腺癌、肺癌等缺失BRCA1，BRCA2，DCC等乳腺癌、結腸癌改變拼接CD44，muc-1,VLA-4等結腸癌、腎癌、乳腺癌、腦瘤等擴增erb-B2,EGFR,N-myc,ras乳腺癌、腦瘤、神經母細胞瘤比例改變明膠酶A/TIMP2乳腺癌轉移等病毒性病毒轉化HPV,HCV,HBV，EBV宮頸癌、肝癌、鼻咽癌等組織性組織分化PSA,PSMA前列腺癌muc-18,酪氨酸酸酶，Mage-3黑素瘤AFP,白蛋白肝癌甲狀腺球蛋白甲狀腺癌NPGP9.5，酪氨酸羥化酶表面活性物質等神經母細胞瘤腫瘤性腫瘤細胞特征CEA肺癌、結腸癌、胃癌、乳腺癌β-HCG黑素瘤等CK-19肺鱗癌端粒酶結腸癌、乳腺癌、頭頸部癌等微衛星體等結腸癌、乳腺癌、頭頸部癌等表3

腫瘤基因診斷的分子標志及其應用標志分類機制分子標志應用于癌癥診斷分子遺傳性染色體易位t(15

可分為四大類組織特異性基因標志腫瘤特異性基因標志血管生成因子其它與腫瘤轉移相關的分子及基質蛋白酶及其抑制劑腫瘤轉移基因標志物可分為四大類腫瘤轉移基因標志物16組織特異性基因標志物指腫瘤組織和/或起源正常組織所特有，在淋巴組織和血細胞中不存在的。如角質蛋白家族（CK）mRNA、粘蛋白基因、表皮生長因子受體（EGFR）mRNA等。

.組織特異性基因標志物指腫瘤組織和/或起源正常組織所特有，在淋17腫瘤特異性基因標志物存在于腫瘤及其起源的正常細胞中，不存在于其他細胞。如CEAmRNA、AFPmRNA、PSAmRNA等。

腫瘤特異性基因標志物存在于腫瘤及其起源的正常細胞中，不存在于18血管生成因子如血管內皮細胞生長因子（VEGF）等。

血管生成因子如血管內皮細胞生長因子（VEGF）等。19腫瘤抗藥基因對于腫瘤化療效果及預后進行推測；還可以將腫瘤抗藥基因導人骨髓細胞，特別是骨髓干細胞中，提高機體對于抗腫瘤化療藥物的耐受程度，如此可以加大抗腫瘤化療藥物的使用劑量，提高抗腫瘤化療的治療效果。腫瘤抗藥基因對于腫瘤化療效果及預后進行推測；20腫瘤抗藥基因多藥抗性基因一l（MDR1），其編碼的蛋白如P-糖蛋白起排流泵作用。.其它一些與細胞內藥物代謝有關的基因也可以看作是腫瘤抗藥基因，如谷胱苷肽S一轉移酶（GST），可使機體解毒功能增強；癌基因bcl-2的表達可抑制腫瘤化療藥物所誘導的腫瘤細胞程序化死亡等。

.

腫瘤抗藥基因多藥抗性基因一l（MDR1），其編碼的蛋白如P-21突變的癌基因癌基因的突變是癌基因激活的重要方式和途徑。除了見到較大范圍片段的缺失或插人以及染色體轉位之外，大多數情況下，都是少數核苷酸或單個堿基的突變。.癌基因點突變的檢測單鏈構象多態性（SSCP）檢測技術等.突變的癌基因癌基因的突變是癌基因激活的重要方式和途徑。除了見22腫瘤相關的病毒基因EB病毒（EBV）人乳頭瘤病毒（HPV）乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染對于這些腫瘤組織細胞中相關病毒基因及其編碼產物的檢測，可以作為這些類型的腫瘤診斷的標志。致瘤病毒引起的惡性轉化作用引起了人們極大的關注腫瘤相關的病毒基因EB病毒（EBV）對于這些腫瘤組織細胞中相23腫瘤基因診斷的常用方法PCR、RT-PCRSouthernblot雜交技術、Northernblot雜交技術基因芯片基因測序。腫瘤基因診斷的常用方法PCR、RT-PCR24腫瘤基因的分子診斷意義

1.腫瘤的早期診斷和篩選2.腫瘤療效監測3.腫瘤的預后判斷4.腫瘤微轉移檢測

腫瘤基因的分子診斷意義1.腫瘤的早期診斷和篩選25腫瘤基因檢測在腫瘤微轉移檢測中

應用舉例腫瘤基因檢測在腫瘤微轉移檢測中

應用舉例26腫瘤的基因診斷課件27前列腺癌特異性基因DD3PCA3

DD3PCA3是一種非編碼RNA的基因，定位于9q21～22染色體。它為前列腺癌特異性基因之一，DD3PCA3mRNA僅在前列腺癌細胞中表達，而在其它正常組織和癌組織以及細胞系中均不表達。

前列腺癌特異性基因DD3PCA3DD3PCA3是一種非編碼28DD3mRNA14外顯子擴增結果M：50bpDNALadder；1：LNCaP陽性對照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結腸癌；10：結腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉移性腺癌；18：淋巴結轉移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤；23：試劑空白。DD3mRNA14外顯子擴增結果M：50bpDNA29DD3mRNA13外顯子擴增結果M：50bpDNALadder；1：LNCaP陽性對照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結腸癌；10：結腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉移性腺癌；18：淋巴結轉移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤；23：試劑空白。DD3mRNA13外顯子擴增結果M：50bpDNA30DD3mRNA34外顯子擴增結果M：50bpDNALadder；1：LNCaP陽性對照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直腸癌；8：直腸癌癌旁；9：結腸癌；10：結腸癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲狀腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：軟組織纖維肉瘤；17：轉移性腺癌；18：淋巴結轉移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝臟；21：膽囊；22：胎盤；23：試劑空白。DD3mRNA34外顯子擴增結果M：50bpDNA31前列腺組織和其他腫瘤組織及癌旁組織DD3mRNA檢測結果前列腺組織和其他腫瘤組織及癌旁組織DD3mRNA檢測結果32

M：50bpDNA標準；1：LNCaP陽性對照；2：BPH；3：健康男性志愿者；4～10為PCa；11為試劑空白。

外周血DD3mRNA的RT-PCR擴增電泳圖

M：50bpDNA標準；1：LNCaP陽性對照；2：BP33RT-PCR檢測結果

44例PCa組中13例可見DD3mRNA陽性結果(其中B期、C期及D期分別有為0例、2例，11例)。30例BPH患者和18名健康男性志愿者標本中均未檢出DD3mRNA。

RT-PCR檢測結果44例PCa組中13例可見DD3mR34外周血DD3mRNA的巢式RT-PCR擴增電泳圖

M：50bpDNA分子量標準；1：LNCaP陽性對照；2：陰性對照(女性)；3：BPH患者；4：健康男性志愿者；5～8：未治療的PCa；9：試劑空白外周血DD3mRNA的巢式RT-PCR擴增電泳圖M：5035巢式RT-PCR檢測結果44例PCa組中21例可見DD3mRNA陽性結果(其中B期、C期、D期分別有1例、5例、15例)30例BPH患者和18名健康男性志愿者均未見陽性結果

巢式RT-PCR檢測結果44例PCa組中21例可見DD3m36兩種方法對PCa患者外周血DD3mRNA檢出率比較RT-PCR巢式RT-PCR+-+130-823注：χ2=20.2，P<0.001；Kappa＝0.629，P<0.001

兩種方法對PCa患者外周血DD3mRNA檢出率比較巢式RT37外周血DD3mRNA巢式RT-PCR方法的靈敏度

M:50bpDNA分子量標準；1～6:依次為105、104、103、102、101、1個LNCaP細胞/ml全血；7:陰性對照；8:試劑空白

外周血DD3mRNA巢式RT-PCR方法的靈敏度M:5038組別

DD3mRNA檢出率(%，例數)

PCa（未治療）

100%（11/11）

BPH

0%（0/30）

健康男性志愿者（對照）

0%（0/18）

注：經卡方檢驗，χ2＝59.0P<0.01不同前列腺疾病患者其外周血DD3mRNA檢出率比較

巢式RT-PCR組別DD3mRNA檢出率(%，例數)PCa（未治療）39PCa不同臨床分期未治療組和治療組DD3mRNA陽性率比較(%,例數)

臨床分期DD3mRNA未治療組內分泌治療組B期100.0(1/1)0.0（0/2）C期100.0(3/3)25.0（2/8）*D期100.0(7/7)34.8(8/23)**合計100.0(11/11)30.3(10/33)**注：內分泌治療組與未治療組比較，*P<0.05，**P<0.01巢式RT-PCRPCa不同臨床分期未治療組和治療組DD3mRNA陽性率比較40謝謝!謝謝!41樹立質量法制觀念、提高全員質量意識。8月-238月-23Sunday,August6,2023人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。01:28:2801:28:2801:288/6/20231:28:28AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。8月-2301:28:2801:28Aug-2306-Aug-23加強交通建設管理，確保工程建設質量。01:28:2801:28:2801:28Sunday,August6,2023安全在于心細，事故出在麻痹。8月-238月-2301:28:2801:28:28August6,2023踏實肯干，努力奮斗。2023年8月6日1:28上午8月-238月-23追求至善憑技術開拓市場，憑管理增創效益，憑服務樹立形象。06八月20231:28:28上午01:28:288月-23嚴格把控質量關，讓生產更加有保障。八月231:28上午8月-2301:28August6,2023作業標準記得牢，駕輕就熟除煩惱。2023/8/61:28:2801:28:2806August2023好的事情馬上就會到來，一切都是最好的安排。1:28:28上午1:28上午01:28:288月-23專注今天，好好努力，剩下的交給時間。8月-238月-2301:2801:28:2801:28:28Aug-23牢記安全之責，善謀安全之策，力務安全之實。2023/8/61:28:28Sunday,August6,2023相信相信得力量。8月-232023/8/61:28:288月-23謝謝大家！樹立質量法制觀念、提高全員質量意識。8月-238月-23We42樹立質量法制觀念、提高全員質量意識。8月-238月-23Sunday,August6,2023人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。01:28:2801:28:2801:288/6/20231:28:28AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。8月-2301:28:2801:28Aug-2306-Aug-23加強交通建設管理，確保工程建設質量。01:28:2801:28:2801:28Sunday,August6,2023安全在于心細，事故出在麻痹。8月-238月-2301:28:2801:28:28August6,2023踏實肯干，努力奮斗。2023年8月6日1:28上午8月-238月-23追求至善憑技術開拓市場，憑管理增創效益，憑服務樹立形象。06八月20231:28:28上午01:28:288月-23嚴格把控質量關，讓生產更加有保障。八月231:28上午8月-2301:28August6,2023作業標準記得牢，駕輕就熟除煩惱。2023/8/61:28:2801:28:2806August2023好的事情馬上就會到來，一切都是最好的安排。1:28:28上午1:28上午01:28:288月-23專注今天，好好努力，剩下的交給時間。8月-238月-2301:2801:28:2801:28:28Aug-23牢記安全之責，善謀安全之策，力務安全之實。2023/8/61:28:28Sunday,August6,2023相信相信得力量。8月-232023/8/61:28:28