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文檔簡介

1.實驗目的掌握網織紅細胞玻片法的原理及操作方法，了解動物骨髓造血功能評價方法。動物骨髓造血功能測定2.實驗原理骨髓中紅細胞系統發育過程：多能干細胞→單能干細胞→原始紅細胞→早幼紅細胞→中幼紅細胞→晚幼紅細胞→

網織紅細胞→成熟紅細胞網織紅細胞（reticulocyte,Ret或Reti）是界于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的過渡型細胞。因其胞質內殘存少量核糖體和RNA等嗜堿性物質，經煌焦油藍等染液活體染色后呈藍色網織狀或點粒狀，故名網織紅細胞，可與完全成熟的紅細胞區別。骨髓造血越活躍，網織紅細胞越多，所以計數血液里網織紅細胞可以反映骨髓造血的活躍程度。在造血異常情況下，如溶血性貧血、急性大失血、缺氧、注射貧血小鼠血清時外周血網織紅細胞會明顯增高；再生障礙性貧血時網織紅細胞減少。一些缺乏造血物質引起的貧血，在正確補充了造血物質以后就會出現網織紅細胞升高的反應。所以網織紅細胞計數不僅反映骨髓造血功能的活躍程度，幫助貧血的診斷，還能幫助我們判斷某些類型貧血的療效。3.失血性貧血模型的制備（1）左手抓取固定小鼠。（2）用干棉球蘸取1%肝素溶液，涂抹于眼眶。（3）右手持一根蘸有1%肝素溶液的毛細管，從眼內眥刺入眼底，刺破眶后靜脈叢放血約0.5ml，24h后，即失血性貧血，完成貧血模型制備。4.實驗器材--略5.實驗方法---活體染色法：玻片法（還可通過某些血液自動分析儀、流式細胞術檢測法進行網織紅細胞計數）加染液：于載玻片上滴加1%煌焦油藍乙醇溶液1滴，待其自然干燥/烘干后備用。加血液：取血液l滴，滴在干燥的染料上，混勻后，蓋 上蓋玻片。鏡檢：低倍鏡下選擇紅細胞分布均勻、著色好的部位后，換高倍鏡或油鏡觀察。胞質中有藍色網織狀或點粒狀者為網織紅細胞。計數：計數實驗組與對照組1000個紅細胞中的網織紅細胞 數并比較。網織紅細胞百分數=計數1000個紅細胞中的網織紅細胞數1000參考值：①成人：0.5%～1.5%。②新生兒3%～6%。③兒童:0.5%～1.5%。5.注意事項：用乙醇染液時，應待乙醇揮發干燥后，才能加血液混合，否則血液易凝固。染液：染液質量直接影響網織紅細胞計數的準確性。煌焦油藍染液長期普遍應用，但溶解度低，易形成沉渣吸附于紅細胞表面；新亞甲藍對

Ret染色力強且穩定，是WHO推薦使用的染液。染色過程：室溫低時，可放置37℃溫箱或適當延長染色時間。染液與血液的比例以1∶1為宜。標本：因網織紅細胞在體外仍繼續成熟，其數量隨著保存時間的延長而遞減，所以標本采集后應及時處理；標本染色后也應及時測定，因染料吸附可人為增高網織紅細胞計數值。觀察：選擇紅細胞分布均勻、網織紅

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