抗EB病毒核抗體檢測標準操作規程××醫院檢驗科臨床免疫室作業指導書文件編號:XXX生效日期：共頁第頁1.目的建立檢測血清中抗EB病毒核抗體含量的標準操作規程，保證實驗結果的精確性及準確性。2.原理試劑盒中每個微孔板條含有8個可拆分的包被有EBNA1的微孔。第一次溫育時，稀釋后的樣本在微孔中反應，如果樣本陽性，特異性IgG與抗原結合；為了檢測結合的抗體，再加入酶標抗人IgG抗體(酶結合物)進行第二次溫育；然后加入酶底物，發生顏色反應；顏色的深淺與抗EBVCA抗體的濃度成正比。3.標本要求根據試劑盒說明書要求收集存儲樣本，血清標本采集用標準樣本試管或含分離膠的試管，血漿樣本采集使用肝素(Li，Na)或K3EDTA，一般來說，標本在2~8℃可穩定7天，－20℃可穩定6個月。4.試劑與儀器G5.操作步驟l清用1．0ml標本緩沖液稀釋并用漩渦混勻器充分混勻(不適合用加樣槍混勻)。5．2·加樣：按加樣方案向相應微孔分別滴加標準品、陽性對照、陰性對照或稀釋后的患者標本各100μl。緩沖液在微孔中至少保留30~60s，然后再倒掉。清洗后(包括人工或自動)應將微孔板倒置在吸水紙上甩打，以去除殘存的清洗液。注意：清洗后遺留在微孔中的殘液(＞10μl)可干擾底物反應而導致低吸光度值偏低。清洗不充分(如清洗少于3次、清洗液太少或清洗時間太短)可能導致吸光度值偏高。5．5·酶結合物溫育：滴加100μl酶結合物至每一微孔。室溫(18~25℃)溫育30min。5．8·終止反應：以與加色原／底物液時相同的速度和順序滴加100μl終止液至每一微前，輕輕搖動微孔板以使液體擴散均勻。約30min。6.校準應按照試劑說明書對陽性對照和陰性對照進行檢測，保證這些陰性和陽性對照值在范圍7.質控檢測樣本時可采用第三方質控品進行質量控制，質控間隔期應適用于各實驗室的具體要求。檢測值應落在確定的范圍內，如出現質控值落在范圍以外，應采取校正措施。8.結果判斷半定量：按以下公式計算對照血清或患者標本吸光度與標準品吸光度的比值，半定量估計結果：比值＝對照血清或患者標本的吸光度值／標準品的吸光度值，其中比值＜0．8為陰份患者標本做重復實驗。9.生物參考區間10.性能參數具體參見相應的試劑說明書。11.臨床意義11．1·EB病毒(EBV)，是成人中最普遍存在的病毒。EBV是傳染性單核細胞增多癥的病原體。傳染性單核細胞增多癥是與咽炎和淋巴結病有關的發熱性疾病，并且經常伴有肝脾腫大，但很少有出疹。另外還發現EBV感染與伯基氏淋巴瘤和鼻咽癌也有關。需區別傳染性單核細胞增多癥、巨細胞病和弓形體病，在非典型的病例，還需區別艾滋病病毒或其他感染。在孕期EBV經胎盤感染胎兒，會損傷胎兒心臟、眼睛和肝臟。EBV感染還會造成從顯微鏡性血尿至急性腎功能衰竭等不同程度的腎臟疾患。11．2·EBV感染的特征是形成抗EBVCA(EB病毒殼抗原)抗體，抗EBNA(EB病毒核心抗原)1~6的抗體以及抗EBVEA(EB病毒早期抗原)抗體。在90％的EBV感染早期患者血清中檢測到抗EBVCAIgM抗體，同時采用ELISA可檢測到EBVCAIgG抗體滴度的升高。EBV感染早期的特征是IgG抗體的滴度至少升高2倍，同時抗EBNA1抗體陰性。EBV感染后機體首先合成的是EBV核抗原(EBNA1~6)，然后是EBVEA與EBVCA。但是EBNA只有在B細胞被破壞后才能與免疫系統接觸，因此與抗原的產生順序相反，EBV感染后較早檢出的是抗EBVCA和EBVEA抗體。11．3·抗EBVCAIgM抗體陽性，同時抗EBVCAIgG抗體滴度的升高能有效提示EBV急性感染。可采用EBVCAIgG親和力檢測試劑盒確認EBV早期感染。在EBV原發性感染中可以檢測到抗EBVEAIgA抗體，但在復發中卻很少出現。在70％~80％的傳染性單核細胞增多癥急性期患者中可暫時性出現抗EBVEAIgG抗體。高滴度的抗EBVCAIgA抗體以及抗EBVEAIgG抗體提示伯基氏淋巴瘤或者鼻咽癌，因此這個檢測的意義重大。11．4·鑒于抗EBVEA抗體有時會出現在急性感染或者不明顯的疾病期。因此采用血清學方法往往很難區分