二、實驗動物微生物和寄生蟲控制的等級普通動物

(conventionalanimalCV)清潔級動物

(cleananimalCL）無特定病原體動物

(specificpathogenfreeanimal,SPF)無菌動物和悉生動物

(germfreeanimalGF)(gnotobioticanimalGN)

)（一）普通動物(ConventionalanimalCV)

指動物不攜帶主要的人獸共患病、自身的烈性傳染病的病原體及體外寄生蟲的實驗動物。飼養在普通環境下;建立消毒防疫制度、動物房操作規程等動物飼養和實驗設施要符合最基本的要求動物僅供作教學、或預備實驗時使用。（二）清潔級動物(cleananimalCL

除普通動物應排除的病原體外，不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的病原。

如：清潔級小鼠

排除8種細菌、5種病毒、7種寄生蟲;

清潔級大鼠

不應攜帶8種細菌、2種病毒、7種寄生蟲2023/7/20清潔級動物應注意如下幾點：引種應來源更高等級的動物;飼養、繁殖或使用在溫、濕度可控的屏障環境；物品如籠具、墊料、器具、飼料和飲水等，應滅菌處理;要建立嚴格管理制度和操作規范。清潔級動物已是我國目前主要使用的質量控制等級的動物，已被廣泛地應用于生命科學研究、新藥研制和安全評價等領域的動物實驗之中。2023/7/20（三）無特定病原體動物

(SpecificPathogenFreeAnimal,SPF)

指在清潔級動物的基礎上，動物不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學實驗干擾大的病原。

清潔級動物和無特定病原體動物差異：

SPF動物需要控制的微生物和寄生蟲的種類更多2023/7/20來源：無菌剖腹產動物保種、飼育及使用：在屏障環境中設施：屏障環境并經常性的監測從事的人員：應當接受實驗動物學的專門培訓。應用：SPF動物廣泛地于腫瘤免疫學、病理學、藥物學、毒理學、生物制品研制及生物醫學等方面，尤其在放射、燒傷等醫學研究領域具有特殊的應用價值。

SPF動物已是國際公認的標準的實驗動物.2023/7/20（四）無菌動物和悉生動物無菌動物:(germfreeanimalGF)動物不攜帶任何以現有手段可檢出的微生物和寄生蟲，來源由普通動物經無菌剖腹產手術，幼仔置于無菌隔離器中，由人工哺乳或代乳飼育而成。悉生動物:(gnotobioticanimalGN)

在無菌動物中人為地植入已知的一種或數種微生物的動物被稱為悉生動物。2023/7/20種類培育者及育成時間小鼠Pleasants,1959大鼠Reyniers等，1946:Gustafsson,1948;Pleasants,1959豚鼠Miyakawa等,1958;Tanami,1959;Pnillips等,1959;Horton和Hickey,1961;Newton和Dewitt,1961兔Wostmann和Pleasants,1959;Luckey,1963狗Glimsedt,1946貓Bleby,1969山羊、綿羊Smith,1961,1966豬Whitenair,等,1960馬駒Drummond等,1973猴Reyniers,1942雞Reyniers,1943鵪鶉Woodard等,1965;Miles,1966已育成的無菌動物2023/7/20健康動物處死浸在37℃滅菌液中送進無菌隔離器剖腹手術切除子宮將子宮浸消毒液即送到另一只隔離器中切開子宮取胎用滅菌紗布揩拭仔體并電刀斷臍放入隔離器內人工喂乳或保姆代養1、無菌動物技術2023/7/202、無菌動物的特征形態學改變消化系統

腸道肌層薄，張力低，盲腸肥大，腸粘膜絨毛增多，肝臟重量下降循環系統心臟相對縮小血液系統白細胞增多網狀內皮系統脾臟縮小，無三級濾泡，功能降低泌尿系統腎臟較小2023/7/20功能和代謝的改變免疫功能

網狀內皮系統、淋巴組織發育不良，缺乏丙種球蛋白，吞噬細胞能力弱。生長率

無菌鳥類比普通鳥類生長率高；無菌大、小鼠和普通動物相同；無菌豚鼠、兔生長率比普通動物慢。生殖

在生殖方面的影響？？？。2023/7/20代謝

代謝周期比普通動物長；血中含氮量少，腸道對水的吸收率低營養無菌對豚鼠、兔的營養吸收有影響，無菌動物腸道上皮細胞更新率低，腸壁物質交換較慢,通過膽汁排泄代謝產物的速度減慢壽命

無菌動物比普通動物壽命長2023/7/203、無菌動物在生物醫學研究中的應用

微生物學研究中的應用√

研究某些疾病的病原：提供組織培養的無菌組織；研究病原體的致病作用與機體的關系。如：將溶組織阿米巴接種到無菌豚鼠的盲腸內不能引起感染。在普通豚鼠中卻能引起致死性感染

探討單一病原體的致病作用如貓瘟病毒正常貓易感染，無菌則不易受感

2023/7/20微生物學研究中的應用研究微生物間的拮抗作用

如：霍亂弧菌單菌感染無菌幼豚鼠可使其死亡；但同時感染產氣莢膜桿菌時，動物不發生死亡。福氏痢疾桿菌單菌經口感染無菌幼豚鼠時死亡；但先經口接種活的大腸桿菌，無菌豚鼠不致死亡，腸道里只能檢出大腸桿菌，而沒有痢疾桿菌。

病毒病研究2023/7/20免疫學研究中的應用

（免疫學研究是發展無菌動物的原因之一）免疫功能與機體感受性的關系⑴特異性抗細菌抗體；⑵肺泡巨噬細胞的活力；⑶唾液中的溶菌酶和白細胞；⑷對內毒素的全身反應等都明顯降低2023/7/20√研究丙種球蛋白和特異性抗體：無菌動物血清中γ一球蛋白含量低。用無抗原性飼料喂無菌動物，小鼠血清中完全缺乏丙種球蛋白。無菌小豬中用無抗原性的飼料時，血清里完全沒有丙種球蛋白和特異性抗體存在。

2023/7/20放射醫學研究

放射致無菌動物粘膜損傷較普通動物輕微。？？？在營養代謝研究中的應用

探討細菌和維生素的關系

許多營養成分依靠腸道細菌降解。腸道細菌可合成VB、VK，應用無菌動物可研究那些菌可合成VB、VK

探討細菌與膽汁酸代謝的關系微生物可使膽汁酸發生化學變化，減少其再吸收。2023/7/20在腫瘤研究中的應用免疫抑制劑的研究：因普通動物用免疫抑制劑可降低其抵抗力，致其繼發感染而死亡；要用無菌動物進行。用于致癌作用和微生物關系的研究：

如：大腸桿菌產物－乙基硫氨酸為致癌物；無菌大鼠口服蘇鐵素無致癌性，普通大鼠口服蘇鐵素可誘發結腸和其他部位的癌變尿道癌在普通實驗動物中少見，但在無菌動物中卻較常見（如無菌大鼠）。

可能的原因：微生物可產生或改變化學物質的致癌性2023/7/20老年病學

（探討微生物和老化的關系）無菌大鼠的心、肝、腎、腦沒有與年齡相關的病變普通大鼠壽命為2年左右，無菌大鼠壽命為3－4年毒理學研究

藥物的毒理作用常與腸道內的微生物代謝有關如：正常豚鼠對青霉素過敏，無菌動物無此反應2023/7/20

4、悉生動物及應用

又稱已知菌動物（AnimalwithBactericFlora）特點：悉生動物和無菌動物一樣，實驗結果排除了動物體內不明確的微生物對實驗結果的干擾用途

單一微生物與機體的互相關系觀察多種微生物之間及其與機體之間的互相關系和菌群失調現象施以物理、化學等致病因子，觀察機體、微生物、致病因子三方面互相關系

（如：無菌動物不發生遲發性過敏反應，而感染大腸桿菌的悉生動物可發生遲發性過敏反應）2023/7/20要求2023/7/20三、不同等級實驗動物的微生物要求

1、實驗動物微生物和寄生蟲等級2023/7/202、實驗動物微生物和寄生蟲學等級國家標準2023/7/202023/7/202023/7/202023/7/202023/7/202023/7/202023/7/202023/7/202023/7/202023/7/20四、不同等級實驗動物的比較GFSPF清潔動物普通動物傳染病無無較少有或可能有寄生蟲無少較少有或可能有實驗結果明確明確明確有疑問應用動物數少少較少多長期實驗可能好可能好可能好困難統計價值很好好較好較差自然死亡率很低低較低高長期實驗成活率約100％約90％約80％約40％實驗的準確設計可能可能可能不可能結果討論價值很高高中低2023/7/20（一）動物傳染病的三個基本環節1、傳染源：患病動物、隱性感染者和病死的動物、某些野生動物和患病人2、傳播途徑：病原通過一定的方式或媒介再次侵入易感動物體內包括空氣飛沫傳播、經水及食物傳播、蟲媒傳播、墊料等水平傳播和垂直傳播。3、易感動物:

對某種病原體有易感性的動物稱為易感動物。

五、實驗動物傳染性疾病的預防2023/7/20

（二）實驗動物傳染病以預防為主對實驗動物疾病很少進行治療，而以預防為主1、藥物治療可能會影響實驗結果;2、康復動物可能長期帶毒，成為傳染源;3、對小動物治療，經濟上不劃算;4、狗、靈長類治療，受到疾病類型和研究性質的影響.2023/7/20（三）實驗動物傳染病預防措施

1、合理的環境設施是預防疾病的必備條件；2、嚴格執行科學管理制度和標準操作程序；3、建立并保持飼養健康的動物種群；4、嚴格監護動物健康狀況（哨兵動物sentinelAnimal）；5、大動物及時預防接種。

2023/7/20病毒：流行性出血熱病毒、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒、狂犬病毒、猴皰疹病毒（B病毒）、馬爾堡病毒、猴痘、亞巴病毒、甲肝等。第二節實驗動物常見感染性疾病一、在實驗動物中導致人獸共患病的主要病原體2023/7/20細菌：沙門氏菌、布氏桿菌、鼠疫、鼠咬熱、志賀氏菌、結核分枝桿菌等真菌：石膏樣毛癬菌、石膏樣小孢子菌、羊毛狀小孢子菌、新生隱球菌、莢膜組織胞漿菌等。寄生蟲：弓開體、卡氏肺囊蟲，梨形鞭毛蟲等。2023/7/20二、實驗動物主要烈性傳染病病原體（可嚴重影響動物健康）鼠痘病毒（小鼠脫腳病病毒）、兔出血癥（兔瘟）病毒、犬細小病毒（急性出血性腸炎）、犬瘟熱病毒等。三、引起實驗動物一般性疾病的病原體病毒：小鼠肝炎病毒、仙臺病毒、猴D型反轉錄病毒等。細菌：多殺巴氏桿菌、泰澤氏菌、鼠棒狀桿菌、肺支原體等寄生蟲：多種體內寄生蟲。2023/7/20四、實驗動物部分微生物疾病（一）病毒性疾病流行性出血熱

（EpidemicHemorrhagicFever,EHF）為人獸共患病,病毒主要存在于野生嚙類動物在實驗動物，多呈隱性感染和持續帶毒狀態，無臨床癥狀，但傳給人則引發疾病。2023/7/20流行性出血熱1、病原學屬漢坦病毒，單鏈RNA結構，有囊膜，可凝集鵝的紅血球。此病毒對環境和理化因素的抵抗力較差：對脫氧膽酸鹽和脂溶劑敏感；紫外線可使其迅速滅活；4～－20℃條件下較穩定，56℃30min可將其殺死。不耐酸，PH2～3時1h可使其完全滅活.流行性出血熱2023/7/20２、流行病學Ａ、傳染源：人的傳染源有3種類型：

①野鼠型：主要由野外黑線姬鼠傳播，多發生在農業區，青壯年易感，一般病情較重；②家鼠型：由褐家鼠傳播，農村和城市均可發生，病情較輕，多無典型的5期經過；③大鼠型：發生在以大鼠或小鼠為實驗對象的的實驗室。2023/7/20Ｂ、傳播途徑：主要以螨等為傳播媒介，含有病毒的血、尿等經人的皮膚破損處使人患病；氣溶膠吸入感染是主要的傳播途徑。Ｃ、易感者：主要是人，其次為大鼠、小鼠、豚鼠、兔等實驗動物。(動物感染后可不發病，而人則發病。)流行性出血熱2023/7/20３、癥狀

人感染后出現發熱、出血、休克、腎功能受損和循環衰竭等癥狀，嚴重時可導致死亡（病死率為3%～20%不等，一般為5%左右）。有典型臨床五期表現：

(1)發熱期

3～5天，“三痛癥”癥狀:發熱伴頭痛、眼眶痛及腰痛;另外顏面及周身皮膚潮紅和眼結膜水腫，病重者皮膚有廣泛性出血或瘀斑。

(2)低血壓期在熱退時血壓下降,有紫紺及休克表現。

(3)少尿期

(4)多尿期(5)恢復期

流行性出血熱2023/7/204、病理變化大鼠感染多無病理變化；小鼠的組織廣泛性充血、出血、滲出、變性、壞死。５、診斷

多數易感動物感染該病毒表現無癥狀，其診斷主要靠血清特異抗體檢測，也可在感染大鼠的肺組織中查到病毒抗原。常用的方法有ELISA和IF。流行性出血熱2023/7/20６、預防與控制A、防止野鼠進入動物飼養室和實驗室：野鼠是本病的主要傳染源和病毒攜帶者。Ｂ、進入動物室的實驗人員應戴口罩和手套，以防吸入氣溶膠和被鼠咬傷傳染。Ｃ、定期做血清檢查。Ｄ、無菌剖腹取胎和屏障系統飼養可根除該病毒感染。流行性出血熱2023/7/20是一種人獸共患病；在實驗動物多呈隱性感染，小鼠感染后可不出現癥狀，但可通過胎盤傳給子代。

主要侵害中樞神經系統，呈現腦脊髓炎癥狀。人類感染可引起流感樣或腦膜炎癥狀淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎（Lymphocyticchoriomeningitis，LCM）2023/7/20淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎1、病原學

LCM病毒屬沙粒病毒，單鏈RNA，有囊膜。可在雞胚絨毛尿囊膜上增殖，但不產生可見痘斑;在小鼠、地鼠、猴、牛等動物和人的多種細胞培養生長。LCM病毒對乙醚敏感，不耐熱，56℃1h，紫外線或0.1%甲醛都可滅活。2023/7/20２、流行病學：Ａ.傳染源：感染LCM病毒的野小鼠、無癥狀帶病毒小鼠。Ｂ.傳播途徑：接觸帶病毒動物的分泌物、排泄物；吸血昆蟲傳播、以及胎盤垂直傳播等。Ｃ.易感者：小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、猴、兔、狗、人易感淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎2023/7/20３、癥狀：

實驗動物多呈隱性，無癥狀；人感染發病主要呈腦脊髓炎癥狀類似流行性感冒，頭痛、肌肉痛、發熱、惡心、嘔吐、喉痛、畏光；有時發疹、下痢、咳嗽和腦膜炎嚴重者侵犯中樞神經引起腦膜炎淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎2023/7/204、診斷

LCM病毒通常是無癥狀感染；懷疑本病時，可將患病動物的血清、腦脊液或病變組織接種在SPF小鼠腦內，SPF小鼠4－5天后，全身及四肢抽搐痙攣而死亡。用血清學方法檢測LCM病毒抗體。5、預防與控制嚴格防止野鼠和感染鼠等進入動物室與實驗室。加強血清學監測。淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎2023/7/206、對實驗研究的干擾作用人類感染可引起流感樣癥狀或腦膜炎。影響動物機體的免疫系統：在B、T淋巴細胞和巨噬細胞中大量復制，從而抑制體液免疫和細胞免疫應答；在腫瘤研究方面：（1）常可污染移植腫瘤；（2）促進移植腫瘤在體內的生長。淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎2023/7/20鼠痘（MousePox）鼠痘病毒感染引起的小鼠烈性傳染病，患病動物往往未出現癥狀即死亡，死亡率高達90%以上。2023/7/201、病原學鼠痘病毒屬痘病毒科，雙鏈DNA結構。鼠痘病毒與其他痘病毒之間有一定的抗原關系鼠痘病毒對干燥、低溫有較強的抵抗力，但可100℃以上高溫及紫外迅速殺死，2％火堿、0.5％甲醛、0.3%石炭酸可殺死病毒。鼠痘2023/7/202、流行病學A.傳染源：病小鼠和無癥狀帶病毒小鼠。B.傳播途徑：接觸病鼠患處滲出液、分泌物及其污染物品。C.易感動物：小鼠尤其是A、C3H、DBA/2、BALB/c、CBA，幼鼠和衰老小鼠對本病特別易感，且常呈致死性。

但本病在野鼠中較少發生。鼠痘2023/7/203、癥狀：有的發病較急，迅速死亡，有的進程緩慢出現典型癥狀，感染后不但引起全身或局部皮膚痘疹，還發生肢體末端皮膚壞死壞疽，使之發生脫腳、斷尾和外耳缺損等病狀，故稱脫腳病但大部分小鼠為不顯性感染，有的小鼠可以既無癥狀，又可獲得免疫。鼠痘2023/7/204、病理變化肝、脾、淋巴結、胸腺廣泛性壞死，腸道的出血，腎、膀胱出血。皮膚：表皮增生、腫脹。皮膚上皮細胞、肝細胞及黏膜上皮細胞等處可見嗜酸性包涵體。鼠痘2023/7/205、診斷：

臨床癥狀可初步診斷，依據病理學診斷檢查包涵體，病毒分離、血清學檢查方法主要有ELISA等。6、預防與控制：定期監測、對可疑小鼠要隔離檢疫、證實后消滅整個感染鼠群。一切可能受感染的物品要高壓消毒，房間用福爾馬林等消毒劑熏蒸。經常監測，凈化種群，對死亡小鼠無害化處理。鼠痘2023/7/207、鼠痘病毒對實驗研究的干擾作用急性感染，小鼠突然死亡，實驗中斷；慢性型病例，出現全身癥狀，使實驗結果混亂，污染環境；隱性感染小鼠，實驗處理如實驗性結核、X射線、各種化學毒素、組織移植、腫瘤移植和運輸等，都可激活病毒而使鼠痘流行。鼠痘2023/7/20

兔病毒性出血癥（RabbitHemorrhagicDisease）2023/7/20猴B病毒病１、病原體（simianherpesvirusBvirus）猴B病毒是屬于皰疹病毒科，病毒對乙醚、脫氧膽酸鹽氯仿敏感，對熱敏感，50℃30min可將其殺滅，X光和紫外線對其有殺滅猴是B病毒的自然宿主，感染率可達10－60％。多數呈良性經過。2023/7/20２、臨床癥狀猴子一般呈隱性感染，無全身不適，飲食正常。初期在舌表面和唇緣有小皰疹，然后形成潰瘍，最后壞死結痂，7～14d自愈。鼻內常有少許粘液或膿性分泌物，常結膜炎和腹瀉。

人感染猴B病毒，可出現致死性疾病。肌痛、發熱、頭痛；迅速發展為上行性麻痹；感覺異常、復視、運動失調、抽搐、吞咽困難，直至死亡。猴B病毒病2023/7/20２、臨床癥狀猴一般呈隱性感染，無全身不適，飲食正常。初期在舌表面和唇緣有小皰疹，然后形成潰瘍，最后壞死結痂，7～14d自愈。鼻內常有少許粘液或膿性分泌物，常結膜炎和腹瀉。

猴B病毒病2023/7/20人感染猴B病毒，可出現致死性疾病。

人類B病毒病的臨床癥狀同猴子的很不一樣。主要表現為上行性脊髓炎或腦脊髓炎。

被咬的局部區域疼痛、發紅、腫脹，出現皰疹，有滲出物，常常并發淋巴管和淋巴結炎。

出現上行性脊髓炎或腦脊髓炎的癥狀。

（感覺異常、復視、運動失調、抽搐、吞咽困難，直至死亡。）2023/7/20３、診斷根據臨床癥狀可初診，確診應進行病毒分離和血清學檢測４、預防操作人員被猴抓傷后要立即用肥皂水洗凈傷口，再用碘酒消毒，并觀察3周；同有疑似B病毒病變的猴子或猴組織接觸的人應帶口罩和護目鏡；盡量不要徒手捕捉猴子有開放性創傷的工作人員需待充分恢復后才能同猴子接觸。

猴B病毒病猴B病毒病2023/7/20仙臺病毒仙臺病毒屬于副粘病毒科,副粘病毒屬。嚙齒類實驗動物是仙臺病毒唯一自然宿主。實驗動物其他病毒性傳染病2023/7/20感染途徑空氣和接觸途徑是病毒傳播和擴善的方式。仙臺病毒除了鼻內途徑外，其它途徑均不引起小鼠的自然感染。偶爾可在腎、肝、脾、等器官發現病毒，但在尿、血和腸內則沒有病毒。2023/7/20不同品系小鼠對仙臺病毒感染的易感性和敏感性明顯不同。

在自發性流行中抵抗力大的小鼠如SJL/j等死亡率接近0％，高度易感小鼠如Swiss裸鼠則可接近100％。

感染的裸鼠其疾病癥狀出現的時間比有免疫機能的小鼠稍晚，并伴有進行性消瘦。在較長的時間里陸續死亡。2023/7/202.暫停繁殖，在相對靜止條件下保存這種非繁殖群直至感染消除(約2個月)，然后恢復繁殖。兩種方法

1.消滅已感染鼠群,重引符合標準的種鼠或用無菌技術剖腹取胎重建繁殖群。在屏障環境內的鼠群中仙臺病毒抗體陽性，若不及時清除所有被感染動物，導致屏障設施的失敗2023/7/20泰澤菌病（Tyzzer’sDi