生物化學(xué)與分子生物學(xué)

DNA重組和重組DNA技術(shù)DNARecombinationandRecombinantDNAtechnology第二十一章DNA重組（DNArecombination）是指不同DNA分子斷裂和連接而產(chǎn)生DNA片段的交換并重新組合形成新DNA分子的過(guò)程。重組DNA技術(shù)（recombinantDNAtechnology）是指在體外將兩個(gè)或兩個(gè)以上DNA分子重新組合并在適當(dāng)細(xì)胞中增殖形成新DNA分子的過(guò)程。第踏一耐節(jié)自際然蕩界D康N彼A重劍組外和們基專(zhuān)因真轉(zhuǎn)紙移D物N訂A末R忘e夠c鑒o寺m蠟b軟i煉n秩a油t腸i療o(wú)湯na爪n犬d粗G肆e垮n怒e片T示r賴(lài)a嬌n冬s掉f痰e派r禁i蝴n撐N殿a潮t買(mǎi)u幫r萍eD春N匙A重慢組同始源肅重貌組(味h率o捕m摸o絡(luò)l臥o任g如o毒u敞s倆r辟e召c驕o基m價(jià)b魄i羽n狐a凍t丹i怠o洗n拐)位隱點(diǎn)遇特喇異進(jìn)的吧重小組(丈s富i背t副e準(zhǔn)-防s連p端e股c板i佛f斃i火c墨r律e傳c躁o滋m位b健i趟n殿a央t釘i稼o極n喜)轉(zhuǎn)法座姐重?fù)尳M(般t詢(xún)r(jià)梨a賓n示s預(yù)p父o怕s水i裝t照i燒o蘆n覽r罰e夠c顛o旺m換b丑i見(jiàn)n規(guī)a窗t悠i多o廁n完)接偷合服作蒜用(懂c遍o新n請(qǐng)j與u著g死a遮t許i底o(hù)果n聯(lián))轉(zhuǎn)吉化掙作謙用(色t剖r鑄a叢n牧s造f賴(lài)o添r共m例a每t替i減o尺n挪)轉(zhuǎn)栗導(dǎo)蝴作既用(皮t絮r世a克n哈s攏d狠u辣c堪t溪i買(mǎi)o癢n劣)發(fā)押生運(yùn)在角同底源云序沸列削間犬的告重鞭組鼠稱(chēng)寬為同爛源溝重棟組(撿h唇o晝m緒o訂l料o巡壽g顯o扎u男s飯r勻e恒c銳o怖m(xù)魔b務(wù)i洽n辱a填t觀i拜o防n船)，又心稱(chēng)基把本唇重捆組輛（g臨e臨n餅e釀r朱a借l角r羽e次c慮o字m無(wú)b貞i翠n啟a幻玉t慈i碑o堪n）。查是確最測(cè)基元本戚的D盜N徒A重需組性方惡式釣，蹈通涂過(guò)箱鏈另的槍斷版裂志和梳再纏連槽接積，悟在午兩弊個(gè)D右N蓋A分撥子朗同漂源尸序使列文間叉進(jìn)圾行埋單繼鏈弟或棟雙輸鏈蝴片弱段是的蓄交腐換編。以E聚.濾c伐o騰l御i的遇同階源索重貢組殘為嫌例癥，悅了什解蘋(píng)同喝源隊(duì)重歲組鼓機(jī)雀制笨的H洲o庸l鄙l庫(kù)i助d吉a統(tǒng)y模鉆型一順、激同陷源下重辮組疏是再最詢(xún)基薦本衣的D環(huán)N猾A重射組獲方轟式H晚o溪l掀l晉i塌d鑰a譽(yù)y模潮型芝的4個(gè)棟關(guān)友鍵潑步光驟腫：兩浩個(gè)嫩同階源僑染專(zhuān)色異體D疏N列A排諸列餡整四齊交；片段重組體(patchrecombinant)拼接重組體(splicerecombinant)一料個(gè)D陰N菊A的脅一擊條建鏈飯斷構(gòu)裂洪、助并適與焰另紗一究個(gè)D培N峽A對(duì)徑應(yīng)蹦的爪鏈母連助接靠，栽形支成H解o駱l隔l結(jié)i架d乞a誰(shuí)y中譯間閣體班；通刺過(guò)避分脫支由移貼動(dòng)駛產(chǎn)孫生柔異培源飄雙漠鏈D孩N驅(qū)A；H答o我l盟l廢i糞d音a京y中釘間旅體吼切要開(kāi)冒并傅修言復(fù)類(lèi)，蹦形層成上兩伯個(gè)縫雙樸鏈炎重裂組字體D莫N賀A，罪分露別累為非：片當(dāng)段噴重騰組石體切針開(kāi)夠的狗鏈跟與街原瓣來(lái)凍斷宋裂櫻的稈是泉同捏一廢條憐鏈婦，勉重負(fù)組章體砌含旁有槽一巧段握異規(guī)源輸雙居鏈抽區(qū)渾，叫其霧兩京側(cè)魄來(lái)糾自碌同微一甘親追本D躺N栽A。拼證接被重免組愚體切尊開(kāi)險(xiǎn)的箏鏈躁并賠非燭原語(yǔ)來(lái)治斷無(wú)裂御的馬鏈晉，輩重慘組蕩體凱異魔源誕雙毛鏈主區(qū)饒的里兩標(biāo)側(cè)赴來(lái)?xiàng)椬园覆桓酵阌H賊本D上N訓(xùn)A。參岡與聚細(xì)洪菌D抖N游A同各源辨重鐮組會(huì)的佳酶協(xié)有導(dǎo)數(shù)束十巴種煙，秋其刻中唉最遲關(guān)紐奉鍵念的言是R也e鍵c繳A蛋蝴白、R變e堡c及B膠C譜D復(fù)異合喇物和R吼u屯v培C蛋福白。R汗e樹(shù)c敲B烘C津D復(fù)偵合衛(wèi)物具尼有求三招種呆酶扣活炎性罩，揚(yáng)即的依疏賴(lài)追于A謹(jǐn)T股P的榆核純酸太外嫩切孝酶旁活渴性日、成可屈被A贈(zèng)T章P增傷強(qiáng)見(jiàn)的班核識(shí)酸礎(chǔ)內(nèi)殿切翅酶達(dá)活停性黎以鉗及尋需忠要A膜T冤P的冊(cè)解膊螺淡旋煌酶違活騾性值。R叔e(cuò)露c件A蛋教白可既結(jié)丈合蓄單艙鏈D熔N譽(yù)A（s荒s匠D喚N罵A）圖，畏形委成R懷e御c繞A律-弊s顯s撓D甜N弊A復(fù)膚合誼物但。R設(shè)u劈燕v確C有響內(nèi)左切蹄酶葉活巧性繡，乏能芹專(zhuān)死一叫性吉識(shí)鈴別H鵲o桑l勒l(shuí)稍i腫d安a守y連胡接編點(diǎn)斑，順并癥有足選妙擇垮地恩切心開(kāi)銜同進(jìn)源供重佛組既體況的油中練間噴體殖。

內(nèi)切酶

(recBCD)DNA侵?jǐn)_(recA)分支遷移

(recA)

內(nèi)切酶(recBCD)

DNA

連接酶5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′3′3′5′3′5′3′3′5′5′3′5′3′5′3′H魄o互l攤l數(shù)i恢d雨a旁y中技間豬體5′3′5′3′5′3′5′3′Holliday中間體5′3′5′3′5′3′5′3′5杜′5′3′5′5′3′3′3′3′5′5′5′5′3′3′3′3′5′5′5′5′3′3′3′5′5′5′5′3′3′3′3′5′5′5′5′3′3′3′3′內(nèi)切酶(ruvC)內(nèi)切酶(ruvC)DNA連接酶DNA連接酶拼泳接重肅組廟體片宣段重爭(zhēng)組國(guó)體二巾、誰(shuí)位廈點(diǎn)少特堂異疤重盾組千是陳發(fā)突生挪在惡特訪異物位血點(diǎn)差間愚的D天N媽A整槽合位墳點(diǎn)江特捕異葛重美組(柳s陡i咐t林e辮-章s賊p隊(duì)e思c嘉i防f非i青c孫r脂e輸c肝o供m優(yōu)b礎(chǔ)i技n促a祖t跑i溉o箱n協(xié))是匹由鍵整瓦合歌酶壓催靜化敏，暑在籠兩砍個(gè)D艙N坡A序幻玉列壁的識(shí)特暮異掌位僻點(diǎn)酬間埋發(fā)紗生罵的避整辮合貴。λ噬交菌禾體園的牢整帝合聽(tīng)酶扛識(shí)圓別美噬昨菌歲體摟和獲宿織主班染騰色差體腳的弄特樹(shù)異污靶插位研點(diǎn)快發(fā)舍生計(jì)選評(píng)擇煙性煌整州合蹈；遞反麥轉(zhuǎn)臟錄障病沾毒漁整刊合夠酶喉可賤特那異露地糕識(shí)典別鵝、村整疏合叢反基轉(zhuǎn)況錄飲病倍毒c吃D專(zhuān)N賣(mài)A的長(zhǎng)鹿末嬌端蹤蝶重?cái)?fù)奴序霞列(榆l戀o堤n智g候t臥e寫(xiě)r燥m芳i償n忽a翻l帶r張e姥p宇e逃a宣t案,瞞L子T送R傷)。（櫻一堡）λ噬汁菌鬼體D非N謊A的眼整柴合（照二繼）近細(xì)蛾菌晉的哄特雪異肯位只點(diǎn)戚重桂組沙州門(mén)去氏歲菌H片老段著倒抄位破決兄定路鞭經(jīng)毛覺(jué)相碰轉(zhuǎn)凳變斜。h燒i奔x為健反累向漸重雞復(fù)戀序鉛列摟，示它轎們布之禽間澆的H片刷段捏可滿(mǎn)在H顏i孟n控毫制競(jìng)下痕進(jìn)介行籮特登異治位獻(xiàn)點(diǎn)白重沈組(倒闖位)。H片裙段擊上暢有存兩阻個(gè)阻啟源動(dòng)哀子P，吩其穴一艇驅(qū)忘動(dòng)h派i題n基枯因桿表錦達(dá)黃，釘另涉一足正測(cè)向剝時(shí)攀驅(qū)霉動(dòng)H止2和r草H腹1基滅因穴表衛(wèi)達(dá)胖，警反冷向(倒鋒位)時(shí)H威2和r愛(ài)H獲1不買(mǎi)表素達(dá)蘇。r致H辟1為H香1的雕阻淡遏伸蛋花白球基素因孕。H2鞭毛素

阻遏蛋白Hin重組酶轉(zhuǎn)位片段hinH2IH1H1鞭毛素hinH2IDNA啟動(dòng)序列H1啟動(dòng)序列沙關(guān)門(mén)盞氏繳菌H片價(jià)段蓬倒垂位驕決哄定魔鞭糖毛情相劈燕轉(zhuǎn)蹄變（映三扎）切免沃疫菌球乒蛋慶白罩基憐因繪的暈重劃排免射疫飼球河蛋否白(箱I找g縮慧)，災(zāi)由家兩屠條晨輕村鏈(耍L鏈)和逢兩蔥條騾重旦鏈(反H鏈)組綱成齊，亡分鼻別洲由宜三瞎個(gè)盲獨(dú)聲立歉的榨基開(kāi)因展族再編楊碼偷，桐其巧中寫(xiě)兩才個(gè)止編食碼昂輕詞鏈(和)，柜一塞個(gè)時(shí)編絹碼漢重危鏈儲(chǔ)。輕洲鏈膜的衫基缸因目片器段皇：重劍鏈尖的乒基逼因敗片進(jìn)段遷：LVJCLV

D

JC重粒鏈(跡I毛g路H脈)基閑因蠅的V術(shù)-糟D猴-蛋J重絲式排訊和妄輕粱鏈(傲I齊g隱L究)基英因驚的V鑼-貍J重護(hù)排亞均彼發(fā)賊生斯在沖特曬異逃位傳點(diǎn)迷上唉。豈在V片厘段大的蘋(píng)下悉游鏡，J片劍段憲的乒上捎游致以罵及D片嫌段湖的傍兩賢側(cè)留均顫存橫在捏保怨守母的胃重材組袋信酸號(hào)隔序隱列(圍r隔e六c怪o掙m延b誓i注n臭a庫(kù)t母i蠅o址n情s哀i艦g荷n搬a銷(xiāo)l彩s梨e誘q膝u慈e趙n艦c話(huà)e深,惡R哲S銀S泛)。碎此橫重向排燙的槐重洞組叉酶販基恐因r挑a徑g買(mǎi)(友r雷e列c腔o網(wǎng)m守b爛i哈n霜a拍t截i種o僵n打a鄉(xiāng)豐c枝t忍i否v扛a膜t冤i刪n度g費(fèi)g虧e供n豎e豆)共鼠有尋兩貢個(gè)忌，繪分霧別寫(xiě)產(chǎn)姻生是蛋蕩白振質(zhì)R旁A舞G霜1和R睬A置G枯2。CACAGTG(12/23)ACAAAAACCGTGTCCACTGTTTTTGG重組信號(hào)序列基因片段免貼疫很球待蛋社白臥基孟因捐重厲排描過(guò)層程三蔥、購(gòu)轉(zhuǎn)較座顯重?zé)o組可倉(cāng)使猾基劫因傲移鵝位由法插展入帶序貸列結(jié)和予轉(zhuǎn)膨座曬子悅介鋪導(dǎo)那的椒基相因廣移丟位捏或餃重局排趕稱(chēng)贊為轉(zhuǎn)協(xié)座(澆t厘r店a墾n潤(rùn)s進(jìn)p乘o憂(yōu)s犯i悅t統(tǒng)i軌o搜n汽)。大斤多停數(shù)為基形因郵在泥基諸因駕組堅(jiān)內(nèi)莖的導(dǎo)位應(yīng)置尾是誰(shuí)固扭定成的果，附但姻有視些估基浙因框可攜以石從閥一砌個(gè)飼位晃置數(shù)移纏動(dòng)退到拜另笛一性位弊置噴。曬這澡些侮可玩移想動(dòng)款的D眠N耍A序豈列萄包島括煩插書(shū)入搭序悼列散和斑轉(zhuǎn)斜座盆子緞。插彼入繳序怒列(彎i敲n檢s砍e辜r惱t批i泊o查n灶s藏e凝q距u仁e有n頂c貴e培s島,盛I垂S今)組堡成而：IRTransposaseGeneIR（模一務(wù)）棵插翻入朗序曬列拐轉(zhuǎn)誤座二屑個(gè)芹分鳥(niǎo)離擇的仰反晃向吧重田復(fù)(竊i罰n嚷v忠e雞r用t駛e批d仆r駝e棍p柿e智a噸t睛s接,袍I盾R魔)序鞋列特癢有憤的吧正麗向涉重劣復(fù)拋序習(xí)列一救個(gè)煩轉(zhuǎn)秒座吼酶致（t恐r軍a眠n穗s養(yǎng)p史o至s偏a晴s親e桌)編健碼艇基考因插鉆入敘序綁列穩(wěn)發(fā)桶生豬轉(zhuǎn)蠢座幣的朽形容式磁：保慮守攻性近轉(zhuǎn)譯座(巴c活o斯n之s輔e傲r歡v乞a銷(xiāo)t肯i冶v艷e疼t襯r梨a藏n包s幣p歷o專(zhuān)s波i炊t然i禁o知n界)復(fù)截制烤性芽轉(zhuǎn)優(yōu)座(至d野u芽p凳l屋i鳥(niǎo)c租a稿t嗓i皺v展e獵t覺(jué)r樣a當(dāng)n倉(cāng)s嗎p袋o穴s羨i多t豪i漸o破n賺)插形入黎序餓列王的謹(jǐn)復(fù)意制凡性箱轉(zhuǎn)最座轉(zhuǎn)氣座促子(糧t枕r熟a銳n恭s角p橋o緣瑞s岡o植n殲s納)—榮—可某從耗一私個(gè)校染閱色劍體宿位瓶點(diǎn)宰轉(zhuǎn)屆移片到喘另錢(qián)一匪位矮點(diǎn)異的挎分衡散忌重桂復(fù)讓序宵列恥。IRIRTransposaseGene有用基因（腹二船）我轉(zhuǎn)包座惑子藏轉(zhuǎn)卵座轉(zhuǎn)殃座西子騎組恥成無(wú)：反照向場(chǎng)重查復(fù)映序啊列轉(zhuǎn)擴(kuò)座解酶西編吊碼李基獲因抗構(gòu)生值素匹抗遞性勺等浸有件用彩的留基挽因細(xì)克菌唯的候可兔流陷動(dòng)赴性希元做件A賽插弊入清序刻列穗：叮轉(zhuǎn)綢座淺酶賴(lài)編競(jìng)碼姥基伴因筐兩漆側(cè)瘡連卡接齊反倍向按末掀端握重蓄復(fù)曉序戀列(箭司頭戚所齡示)B架轉(zhuǎn)爬座迫子T息n星3：珠含恒有輪轉(zhuǎn)爐座踩酶憐、β撒-內(nèi)今酰喝胺串酶采及挪阻翻遏霞蛋然白侵編球碼雜基迫因C斧轉(zhuǎn)全座程子T儲(chǔ)n翠1瘋0：輪含呢四汽環(huán)甲素永抗敗性譽(yù)基老因領(lǐng)及抗兩卻個(gè)彩相筍同伴的斃插宗入編序司列I霞S綿1防0斃L由惑轉(zhuǎn)乳座躲子個(gè)介浮導(dǎo)獸的岔轉(zhuǎn)侵座四配、歡原迎核域細(xì)進(jìn)胞面可童通咽過(guò)塌接止合衰、著轉(zhuǎn)攜化技和姑轉(zhuǎn)暮導(dǎo)瘡進(jìn)老行趙基鬧因趨轉(zhuǎn)期移唉或符重榨組（亦一充）女接頃合控作捆用當(dāng)副細(xì)愚胞棉與伶細(xì)晶胞劍、營(yíng)或匆細(xì)螞菌肢通桐過(guò)允菌艷毛角相饑互屈接通觸諒時(shí)怒，昏質(zhì)北粒D卷N未A從胃一大個(gè)掏細(xì)倚胞塊（版細(xì)貨菌膽）翼轉(zhuǎn)厚移僑至獵另輝一紫細(xì)農(nóng)胞配（葡細(xì)鉤菌途）估的D數(shù)N鈴A轉(zhuǎn)測(cè)移晨稱(chēng)錦為接朵合慘作臥用(死c磁o臨n流j迎u繁g渴a誕t屑i替o輪n金)。可捕接箱合錘質(zhì)波粒古如F因慘子(繭F地f運(yùn)a餐c彩t致o遠(yuǎn)r綁)細(xì)趁菌延染后色消體讀外志的稼小偷型磨環(huán)出狀源雙擊鏈D冠N漠A分書(shū)子佩。質(zhì)蹈粒（導(dǎo)二洽）講轉(zhuǎn)賓化撤作蒸用通紅過(guò)牛自炒動(dòng)膝獲撓取童或墻人鉗為直地印供排給以外瓜源D維N鏟A，療使戶(hù)細(xì)值胞趁或雹培屯養(yǎng)飼的鍋受禾體陜細(xì)享胞把獲占得幸新僅的善遺游傳荷表銳型嘆，幕稱(chēng)打?yàn)檗D(zhuǎn)鋸化濱作也用(閑t險(xiǎn)r僻a狼n蠻s犁f東o河r翁m排a地t戚i附o素n踐)。例智：溶笑菌鞋時(shí)搜，偶裂彩解若的D旱N羊A片脫段坊被懶另望一賞細(xì)介菌故攝側(cè)取澆。（徑三頸）譜轉(zhuǎn)購(gòu)導(dǎo)梨作請(qǐng)用當(dāng)罷病斬毒閣從鹽被巨感怖染誰(shuí)的事（產(chǎn)供朱體爸）莖細(xì)蝦胞啊釋膨放編出球來(lái)旋、唱再枯次昏感道染盜另周一夕（蛋供較體標(biāo)）價(jià)細(xì)蓮胞拾時(shí)謠，咐發(fā)減生攪在怪供錄體賞細(xì)教胞帳與泡受苦體律細(xì)飼胞趟之肝間合的D波N社A轉(zhuǎn)濟(jì)移駱及掙基谷因萍重堡組球即藍(lán)為轉(zhuǎn)攝導(dǎo)墻作陜用(稅t金r時(shí)a陡n柔s濃d烈u房誠(chéng)c康t逝i嚼o防n材)。λ噬麗菌慎體繭的攜生銀活盡史溶源菌恒生膊長(zhǎng)膀途乏徑(ly王s西i渾s專(zhuān)p魂a鴉t狼h版w刻a關(guān)y減)溶詢(xún)?cè)床蔷^生篇長(zhǎng)崇途瀉徑(贊l夏y江s萌o蠶g熊e摔n奸i些c做p緊a銹t棟h軋w跨a泛y局)第鼻二傅節(jié)替重帖組D積N東A技嗽術(shù)R巖e起c登o標(biāo)m害b收i存n騾a翠n嚷t撐D朝N狂A悠T盞e郊c粥h洪n魂o裁l撐o霧g連y重丑組D免N妹A技吐術(shù)旅的姜發(fā)旨展籍史1壯8漫6跳5年G販.懼J鞋.甜M觀e抬n堤d要e艇l的文豌觸豆以雜筑交滾試建驗(yàn)釣。1雁9再4德4年O懲.光T餃.礙A仆v柳e墳r群y的傳肺達(dá)炎躲球談菌腳轉(zhuǎn)語(yǔ)化釘實(shí)矩驗(yàn)?zāi)稀?頂9制7助3年襪美乞國(guó)徐斯陰坦武福境大熟學(xué)衫的批科架學(xué)古家雖構(gòu)蔽建竊第綢一悼個(gè)浙重精組D站N蒙A分廈子揮。1就9鑄7宰7年仇美扁國(guó)睛南齊舊穗金肥山護(hù)由呼博拔耶誕和延斯折旺刑森潔建蒼立睡世夢(mèng)界挖上漏第烈一府家浴遺壩傳勵(lì)工秧程冶公鳴司朗，盟專(zhuān)土門(mén)鵲應(yīng)列用首重昌組D語(yǔ)N杠A技營(yíng)術(shù)怨制擠造庫(kù)醫(yī)辭學(xué)宿上釀重齊要誓的漆藥斧物紋。1破9術(shù)8突0年遍開(kāi)確始可建詠造和第刑一冰家承應(yīng)音用秒重釋組D播N嫩A技榨術(shù)睜生垮產(chǎn)牛胰澆島考素戚的磨工趨廠回。1蘆9咽9遇7年媽英付國(guó)益羅白林工研脖究姻所售成誕功者的非克惑隆好了抱多虹莉墾。重漿組D蛾N菊A技倚術(shù)炮相牢關(guān)闊概奔念克究隆(拼c遇l遺o陜n撐e阿)姐:來(lái)諒自墳同棚一墨始同祖妖的飲相閉同垃副努本胳或忍拷絨貝尚的離集叼合科。獲托取陵同圾一漢拷絞貝曠的氏過(guò)豆程獄稱(chēng)奶為傘克員隆找化(孟c流l佩o喊n闊i娘n乓g襖)，擦即桑無(wú)牙性總繁功殖議。D摸N趕A克習(xí)隆技豆術(shù)挎水衡平歐：分撥子財(cái)克唱隆(勒m列o已l們e藍(lán)c來(lái)u銜l王a鏟r正c瓣l勁o筆n秋e繳)（鋸即D樂(lè)N艦A克轉(zhuǎn)隆糧）細(xì)憤胞嫂克賣(mài)隆個(gè)街體袍克挑隆劫（厚動(dòng)凝物稿或瘋植譽(yù)物腸）其鋪主江要溝過(guò)漁程數(shù)包待括終：腳在張?bào)w尾外踢將轟目勢(shì)的D懸N愛(ài)A片毒段瞧與赴能勝自忽主珍復(fù)企制綢的柔遺估傳蝕元捉件福（率又嚴(yán)叫瓣載廊體損）質(zhì)連攀接格，影形丙成媽重災(zāi)組D咽N模A分滲子廟，別進(jìn)軍而晉在物受航體雅細(xì)別胞括中作復(fù)細(xì)制長(zhǎng)、談擴(kuò)積增塘，荒從普而宰獲旗得媽單勸一D固N(yùn)據(jù)A分室子溪的弦大貸量擊拷扔貝芽。重桶組D頭N僵A技有術(shù)巷，順又病稱(chēng)責(zé)分蘇子違克授隆粥（m翼o國(guó)l廳e計(jì)c俯u霞l揪a動(dòng)r肥c蝦l嗎o猛n蜂i增n僑g）判或D限N編A克輔隆乞（D些N材A質(zhì)c接l牲o妻n朵i垃n指g）工或括基沃因晴工效程貍（g蜘e蒸n悄e打t禮i艘c顫e王n軟g好i鬧n損e創(chuàng)e愚r(nóng)杯i箏n謙g）蝦技究術(shù)目竿的休：①鞭分所離倘獲碼得架某臨一蜻感謎興羞趣慢的養(yǎng)基嘩因搭或D它N聲A②獲廣得臉感里興轉(zhuǎn)趣傳基靜因熄的仍表免達(dá)庫(kù)產(chǎn)忠物狂（躲蛋邀白弄質(zhì)姿）一惹、載重氧組D幟N掉A技翁術(shù)顏中辱常粘用野的古工鏡具告酶限紋制猜性收核曉酸邊內(nèi)目切毯酶D輔N薦A聚燥合魯酶Ⅰ逆撈轉(zhuǎn)仔錄屆酶T4D澇N幫A連糾接液酶堿歌性租磷矛酸紙酶末葵端憂(yōu)轉(zhuǎn)般移部酶T掙a碗qD席N階A聚世合襪酶重魂組D采N窄A技舒術(shù)踩中告常車(chē)用炕的靠工逮具引酶工具酶功能限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別特異序列，切割DNADNA連接酶催化DNA中相鄰的5′磷酸基和3′羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使DNA切口封合或使兩個(gè)DNA分子或片段連接DNA聚合酶Ⅰ①合成雙鏈cDNA分子或片段連接；②缺口平移制作高比活探針；③

DNA序列分析；④填補(bǔ)3末端Klenow片段又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53聚合、35外切活性，而無(wú)53外切活性。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈DNA3末端標(biāo)記等反轉(zhuǎn)錄酶①合成cDNA；②替代DNA聚合酶I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或DNA序列分析多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針末端轉(zhuǎn)移酶在3羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾堿性磷酸酶切除末端磷酸基限立制聚性西核篩酸素內(nèi)涼切歸酶(r妨e憶s傅t收r斑i蠢c胞t驕i免o時(shí)n假e反n揚(yáng)d壩o滋n拐u理c盈l佩e(cuò)重a屯s江e切)限扣制專(zhuān)性多核隊(duì)酸鉆內(nèi)撿切訊酶(輔r礎(chǔ)e碗s默t行r到i菌c諒t爬i站o恩n厚e尿n經(jīng)d顆o忽n看u濤c舒l臣e蠢a教s甩e姜,隊(duì)R肚E爭(zhēng))是韻一壯類(lèi)溉核倘酸掩內(nèi)耗切逆酶追，籌能師識(shí)賺別至雙括鏈D信N障A分宰子岡內(nèi)支部爪的替特壯異享序纖列,并杏裂武解爛磷挨酸灰二鎖酯嫌鍵嗚。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B法a蒼mH號(hào)Ⅰ定喪義福：與墊甲供基烤化日酶枝共耽同醉構(gòu)芬成猛細(xì)炊菌掩的城限毒制基修株飾提系隊(duì)統(tǒng)倘，脹限典制鞋外擠源D皆N拋A，儉保摟護(hù)慚自框身D懼N久A。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（企基樓因鞭工念程幼技邁術(shù)羨中厘常營(yíng)用Ⅱ型肅）分因類(lèi)題：作謊用頁(yè)：第賠一潑個(gè)轟字穿母勸取隱自潛產(chǎn)治生竿該仍酶財(cái)?shù)臅r(shí)細(xì)付菌叢屬師名惠，倉(cāng)用松大亭寫(xiě)標(biāo)；第川二祥、化第葛三擴(kuò)個(gè)亦字哭母凡是打該項(xiàng)細(xì)積菌踩的愉種覽名矮，鄰用著小顧寫(xiě)受；第限四絮個(gè)由字與母列代丸表育株丸；用芒羅更馬蕉數(shù)盲字炊表的示箏發(fā)快現(xiàn)慈的挖先理后駕次踢序景。命悼名改：Hi羞ndⅢ

屬

系

株序Ha篇e截m怖o早p肅h衫i臺(tái)l言u(píng)斯si候nf漂l窩u梳e參n勢(shì)z榜a條ed株流迎感囑嗜妻血牧桿嗽菌d株涉的炸第倡三羊種侮酶Ⅱ類(lèi)草酶商識(shí)企別道序馳列嬸特輝點(diǎn)—興—回滲文哈結(jié)腳構(gòu)(珍p冰a劈燕l(xiāng)垃i朱n魂d宰r火o鑒m以e腿)切江口壓：平胞端劍切撕口、粘俯端隱切敗口GGATCCCCTAGGB圣a折mH猶ⅠGTCCAGGCCTAGGATCCG+GGATCCCCTAGGH恒i弊nd柱ⅡGTCGACCAGCTGGACCTG+平鏡端播切予口黏參端嬸切壺口有筐些東限違制哈性眠內(nèi)表切鞏酶英雖獸然露識(shí)向別慕序絡(luò)列餐不賀完拘全霞相滲同朝，埋但會(huì)切星割D慚N存A后僑，需產(chǎn)窩生艙相盞同主的漲粘非性晴末擊端惰，鹽稱(chēng)朽為枯同角尾脹酶過(guò)。潑這楊兩編個(gè)柄相近同窄的丟粘酬性弓末狠端渠稱(chēng)診為淡配江伍最末荷端(綱c扭o他m基p恨a貢t唱i劇b鑄l狗e渣e話(huà)n伙d鬼)。B重a意mH誘ⅠB額gl席ⅡGGATCCCCTAGGAGATCTTCTAGAGCCTAGGATCCG++ATCTAG

GATCTA同螞尾兄酶來(lái)雖源姐不集同推的境限椅制投酶贊，局但掘能巨識(shí)壁別覆和描切銷(xiāo)割絡(luò)同饑一弱位共點(diǎn)光，邊這竟些掀酶虛稱(chēng)同誘裂辯酶剪或獸同母功鍛異謎源留酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B啟a樂(lè)mH且ⅠGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B閘s堵tⅠ同凝裂冰酶敬：名稱(chēng)識(shí)別序列及切割位點(diǎn)名稱(chēng)識(shí)別序列及切割點(diǎn)切割后產(chǎn)生５’突出末端:BamHⅠ5’…G▼GATCC...3’BglⅡ

5’…A▼GATCT...3’EcoRⅠ

5’…G▼AATTC...3’HindⅢ

5’…A▼AGCTT...3’

HpaⅡ

5’…C▼CGG...3’

MboⅠ

5’…▼GATC...3’

NdeⅠ

5’…GA▼TATG...3’切割后產(chǎn)生3’突出末端:ApaⅠ

5’…GGGCC▼C...3’HaeⅡ

5’…PuGCGC▼Py...3’KpnⅠ

5’…GGTAC▼C...3’PstⅠ

5’…CTGCA▼G...3’SphⅠ

5’…GCATG▼C...3’切割后產(chǎn)生平末端:AluⅠ

5’…AG▼CT...3’EcoRⅤ

5’…GAT▼ATC...3’HaeⅢ

5’…GG▼CC...3’PvuⅡ

5’…CAG▼CTG...3’SmaⅠ

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以質(zhì)粒為載體的D跳N岔A克隆過(guò)程（毀一蠢）斗目脅的題基扔因精的搶分禁離序獲潑取—南—分化籃學(xué)奶合配成嶄法要腦求改：居已掀知挨目毯的侍基宵因陡的哪核擔(dān)苷篩酸擁序攤列殃或劑其敗產(chǎn)瞎物旱的譜氨狂基犬酸宇序誘列秒。P罷C發(fā)R法從流基伙因館組D備N(xiāo)鑒A文押庫(kù)梯中鳴獲挎取紡目農(nóng)的D株N貪A從c蹤蝶D喉N證A文驢庫(kù)鳳中熟獲仇取門(mén)目鞏的D醉N趕A化真學(xué)晚合宅成寇法胃獲粗取探目抓的脂基伯因由換已曠知詞氨梳基暈酸屬序焰列蠢推申測(cè)覺(jué)可可能貪的D哈N蔬A序尤列憐。5P彎r露i緊m翅e優(yōu)r尼15P娃r(nóng)蹲i點(diǎn)m盡e謝r參2Cycle2Cycle1555555T仆e猴m獸p蓄l踏a株t盟e鐘D刻N(yùn)擇A2、P刑C剩R技見(jiàn)術(shù)開(kāi)的早工夫作凈原博理55555555Cycle355

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525～30次循環(huán)后，模板DNA的含量可以擴(kuò)大100萬(wàn)倍以上。P粉C嘩R技昌術(shù)致原項(xiàng)理呈示徒意恩圖P沙C率R的始基榴本避反躬應(yīng)隨步照驟變未性9水5邀?總C延刊伸7循2?C退朝火T畏m怨-辨5?C模豆板D還N床A特箱異尖性蠶引撇物耐摘熱D螺N烘A聚柄合替酶d求N長(zhǎng)T恩P杏sM抖g2若+P紅C陶R體賠系爆基洽本襖組懂成支成假分利為用稍特渣異快性蓬引爭(zhēng)物扮以c債D負(fù)N近A或嘗基直因忌組D遣N耕A為湯模弦板寺獲毀得縫已雁知盼目暮的克基屆因智片嫩段,或側(cè)與氏逆址轉(zhuǎn)寶錄小反菌應(yīng)伴相坑結(jié)勝合城，土直結(jié)接潔以號(hào)組掉織龜和扁細(xì)底胞蓄的m爪R傲N怒A為掉模警板必獲嘉得涼目狐的恩片臂段特；利慈用峽簡(jiǎn)投并騙引豎物密從c弦D研N購(gòu)A文之庫(kù)吵或儀基議因纏組誓文撫庫(kù)駕中弦獲惱得匠序否列手相炕似抽的蛾基蝦因質(zhì)片鼓段潮；利劫用抬隨藏機(jī)祥引鎮(zhèn)物輸從c植D娃N愉A文涉庫(kù)暖或達(dá)基竄因做組掃文羨庫(kù)史中晚克足隆掏基霸因嗽。P白C子R技?jí)K術(shù)的沈主重要浮用產(chǎn)途（因一茅）對(duì)目胸的泄基頓因繳的防克矮隆利武用P拌C距R技待術(shù)趕可償以炎隨宵意惠設(shè)的計(jì)盾引績(jī)物漫在箏體買(mǎi)外茂對(duì)志目蘿的色基柱因若片蜓段猛進(jìn)呼行反嵌秀和檢、性缺胖失份、碗點(diǎn)長(zhǎng)突委變柳等它改桐造蘭。P殘C丸R技哨術(shù)練高筑度騾敏寶感捏，訴對(duì)許模源板D盼N運(yùn)A的薪量格要出求講很寶低齡，墾是D碼N咸A和R捐N艱A微滾量葬分肆析宿的癢最典好萄方蹄法暢。（妹三予）D鈴N潮A和R總N冬A的星微濁量姑分菠析（烈二符）址基贈(zèng)因面突謊變將P之C冊(cè)R技皂術(shù)悅引茶入D邪N慢A序昏列陽(yáng)測(cè)帥定回，苦使匙測(cè)絲式序熔工孤作紛大倆為申簡(jiǎn)趕化掛，仰也銳提湯高奧了嚴(yán)測(cè)在序竿的診速高度折；待射測(cè)D貍N藝A片印段蒼既辭可畜克池隆莖到涉特濱定手的可載海體絨后栽進(jìn)財(cái)行廟序岸列公測(cè)腸定泳，華也弱可膽直偏接粱測(cè)嘴定波。P糕C誼R與裙其庸他須技巡壽術(shù)儉的滔結(jié)底合吉可體以哪大壁大膊提延高英基斬因丈突避變扛檢桶測(cè)叮的沸敏專(zhuān)感湖性?xún)r(jià)。（亡四導(dǎo)）D朋N牢A序查列害測(cè)危定（剝五衣）義基酒因郊突探變?nèi)し趾馕瞿孀⑥D(zhuǎn)牌錄P廈C沸R驕(牢r爹e遠(yuǎn)v療e省r贈(zèng)s冠e右t姨r顧a等n帶s集c右r版i謎p拾t蠟i拉o款n釘P取C伴R，R碰T躬-窮P艱C鵝R慣)是東將R樂(lè)N槽A的穴逆丑轉(zhuǎn)戀錄狹反努應(yīng)挑和P廈C鼠R反鵲應(yīng)鹽聯(lián)久合濾應(yīng)統(tǒng)用定的荷一滲種顯技賽術(shù)紹。R詞T破-智P結(jié)C備R是獸目偶前艘從聲組撿織體或洞細(xì)柿胞天中舒獲都得燈目蝴的擴(kuò)基勾因竟以爹及欣對(duì)相已灶知伏序宰列貪的R謀N愧A進(jìn)擾行疲定添性?xún)H及這半她定霉量姥分臣析別的組最挽有堪效密方疤法藝。（淡一柳）傾逆岔轉(zhuǎn)要錄P票C妻R技存術(shù)幾皂種店重戀要樸的P繭C辣R衍漆生棒技也術(shù)原申位P躬C狠R萌(貢i階n伐s膽i已t詠u行P環(huán)C凈R棟)是窗在適組之織任切劍片畝或率細(xì)漫胞棗涂積片周上渠的蘇單宅個(gè)孤細(xì)氣胞妙內(nèi)潛進(jìn)冷行持的P軌C桌R反念應(yīng)棒，吹然趣后話(huà)用傍特辭異遷性江探闊針痕進(jìn)羞行磨原鵝位敏雜瘋交頓，秤即凱可茅檢養(yǎng)出嗓待過(guò)測(cè)D餡N詞A或R獎(jiǎng)N解A是猶否繩在惡該太組熄織博或揮細(xì)陳胞鼠中梢存宣在型。原販位P顆C翁R方芽法烈彌喂補(bǔ)店了P格C誰(shuí)R技級(jí)術(shù)雀和寫(xiě)原鉛位淚雜穿交耕技冊(cè)術(shù)脆的獸不璃足企，抓是桑將壓目夜的替基季因用的謊擴(kuò)姿增如與熱定外位賠相反結(jié)酸合淹的距一奪種設(shè)最進(jìn)佳殃方關(guān)法兔。（粗二勁）盆原更位P宵C肺R技放術(shù)（件三閘）貨實(shí)睡時(shí)P熊C鼠R技診術(shù)實(shí)卡時(shí)P窄C盈R捧(蜂r培e味a敘l錦-濃t鄙i輩m揮e獨(dú)P小C鍵R歉)技秋術(shù)搶通雀過(guò)拆動(dòng)憐態(tài)叉監(jiān)殘測(cè)籍反濱應(yīng)盲過(guò)激程農(nóng)中調(diào)的憑產(chǎn)陜物粗量櫻，寧消竄除元了隆產(chǎn)某物廉堆偏積帽對(duì)惱定江量沾分使析逼的童干舌擾向，忍亦眨被桃稱(chēng)榴為亡定萌量P菌C叮R。實(shí)怕時(shí)P搖C越R技報(bào)術(shù)么原航理QR3'3'5'5'上游引物下游引物熒光標(biāo)記引物RQ3'3'5'5'實(shí)恥時(shí)P食C桑R分失類(lèi)負(fù)：實(shí)時(shí)PRC非探針類(lèi)探針類(lèi)1.TaqMan探針?lè)?.分子信標(biāo)探針?lè)?.FRET探針?lè)▓D2夸0愿-貧3鴨T般a懂q勢(shì)M撈a漠n探洗針慶法列實(shí)藍(lán)時(shí)P會(huì)C濁R原球理尿示季意鵲圖組孟織矩或出細(xì)回胞斯染負(fù)色色體D蜻N留A基顆因趴片解斷克市隆清載格體重釀組D倡N渣A分銅子含當(dāng)重妄組氏分縱子狠的容轉(zhuǎn)雕化單菌限鋪制肅性訪內(nèi)危切足酶受危體值菌基研因懼組D險(xiǎn)N杰A文墨庫(kù)存鍛在泰于吧轉(zhuǎn)產(chǎn)化年細(xì)香胞待內(nèi)各由聾克患隆段載獻(xiàn)體艷所州攜呼帶禿的如所尖有斤基煎因抓組D豈N晌A的四集憑合從品基饞因問(wèn)組D件N烏A文祝庫(kù)抱獲兇取裳目輪的扎基寨因限制酶切位點(diǎn)限制酶消化除去中間片段cosLRcoscosL左臂Rcos右臂真核生物染色體DNA限制酶部分消化外源DNA與載體DNA混合連接反應(yīng)體外包裝用重組噬菌體感染大腸桿菌~20KbDNA片段cosLRcos~20Kb外源DNA片段基因文庫(kù)用刊隨芝機(jī)辯切唯割穩(wěn)的焰真蕩核午生岔物升染漫色柿體D等N睬A片扛段儀構(gòu)新建螺基陵因區(qū)文同庫(kù)mRNAcDNA

雙鏈cDNA重組DNA分子cDNA文庫(kù)

反轉(zhuǎn)錄酶載體受體菌復(fù)制從c滴D支N役A文賽庫(kù)劉獲考取有目乞的泰基磨因逆轉(zhuǎn)錄酶AAAA

TTTTAAAASI核酸酶

DNA聚合酶Ⅰ堿水解

TTTT（虎二投）獻(xiàn)載驅(qū)體繩的求選鞋擇佛與謀構(gòu)原建—輕—選目霧的固不煤同巴，張操劫作失基銜因載的怕性受質(zhì)機(jī)不虹同妹，瞞載壯體盟的基選萍擇趙和血改抗建譯方胃法費(fèi)也搶不壤同插。目腫的保：①悼獲守得雪某曠一閃目庫(kù)的料基朗因謹(jǐn)或D政N脫A片筍段②杠獲封得艷目泥的D完N減A片詢(xún)段因所株編狡碼宇的宇蛋酬白氏質(zhì)載體插入DNA片段宿主細(xì)胞質(zhì)粒<5~10kb細(xì)菌，酵母λ噬菌體載體~20kb細(xì)菌黏粒~50kb細(xì)菌BAC~400kb細(xì)菌YAC~3Mb酵母不讓同朗載再體害的如克鍵隆錘容宮量標(biāo)及基適際宜拒宿臉主鄉(xiāng)豐細(xì)話(huà)胞（咬三標(biāo)）編目辮的D卻N貞A與豎載割體袋連煙接—版—接方守式肚：輸（1）單憂(yōu)一趁相緣瑞同套黏愉端醉連欺接（2）不煌同鬼黏鄉(xiāng)豐端稀連眠接（3）通膚過(guò)幟其腿他聽(tīng)措震施姑產(chǎn)求生濾黏聚端挺進(jìn)盾行川連倘接黏回端薦連既接B褲a竟mH俗Ⅰ切殘割尋反肯應(yīng)

GGATCCCCTAGGT洋4D蕉N剪A連聚接牛酶1逗5o裁CGATCCGGCCTAG+目的基因用BamHⅠ切割載體DNA用BamHⅠ切割重組體載體自連目的基因自連單孫一盈相縣同鉆黏刃端樣連喜接不把同乞黏非端歉連倆接仰（吩定紐奉向村克留隆謝）EcoRⅠ切割位點(diǎn)Bg

lⅡ切割位點(diǎn)+EcoRⅠ+Bg

lⅡ雙酶切EcoRⅠ+Bg

lⅡ雙酶切T4

DNA連接酶15oC重組體由酒平貓端吵加湖上盼新貪的寸酶陸切適位強(qiáng)點(diǎn)俱，液再按用超限飯制覺(jué)酶危切導(dǎo)除坦產(chǎn)置生牽粘稿性定末室端赤，鐵而獵進(jìn)厲行蠅粘塊端私連塘接。人塑工舟接缺頭(獅l恨i廳n累k葬e皮r峰)連洞接通更過(guò)袍其鴿他愧措返施姑產(chǎn)療生設(shè)黏驢端根進(jìn)煤行課連軌接人翼工順接動(dòng)頭蛾及熔其坡應(yīng)掠用CCGAATTCGGGCTTAAGC5′-3′-EcoRⅠEcoRⅠEcoRⅠEcoRⅠ在男末疲端債轉(zhuǎn)帳移證酶(辟t旬e王r您m貍i需n蓄a偷l敗t午r揀a餃n注s定f厲e科r悅a植s棉e是)的政作跑用辨下咱，資在D臂N腳A片廳段暖末的端茫加留上四同肆聚擴(kuò)物巨序嫂列貼、膊制蔬造浩出瓣粘湯性畜末朵端欠，削再畏進(jìn)扣行陜粘缸端組連仿接悄。同相聚啞物股加扇尾徑連陰接5′3′3′5′載體DNA5′3′3′5′目的基因限制酶或機(jī)械剪切限制酶5′3′3′5′5′3′T(T)nT

T(T)nT3′5′5′

3′3′5′3′A(A)nA

A(A)nA3′5′λ-核酸外切酶λ-核酸外切酶末端轉(zhuǎn)移酶+dATP末端轉(zhuǎn)移酶+dTTPT(T)nTA(A)nAA(A)nAT(T)nTT4

DNA連接酶15oC重組體5′P鞏C桃R法針造對(duì)染目戰(zhàn)的D澇N色A的5-和3-端礦，竄設(shè)愿計(jì)杠一播對(duì)等特晉異嶺引錦物綿，猶在濫每自條枯引泳物像的5-端止分喚別顧加忘上終不櫻同草的R悄E位豎點(diǎn)等，問(wèn)然銷(xiāo)后斗以貿(mào)目土的D魚(yú)N烘A為練模診板糟，帳經(jīng)P閘C漸R擴(kuò)子增竿便恥可少得是到磚帶首有聾引展物強(qiáng)序潤(rùn)列匹的筑目茫的D熄N棄A，騙再拉用螞相坑應(yīng)R牌E切釘割P夸C賣(mài)R產(chǎn)朱物愿，請(qǐng)產(chǎn)額生敞黏姑端四，臥隨型后匯便晌可砍與蕉帶領(lǐng)有竭相俯同釋黏銳端絮的淺線鴉性榴化活載累體擴(kuò)進(jìn)層行球有異效蠅連都接蝴。平切端鮮連艘接限湯制焦性青內(nèi)鐘切申酶煉切婚割給產(chǎn)桐生啊的命平門(mén)端粘項(xiàng)端音補(bǔ)貫齊金或掉切眼平柴形屋成涌的還平耍端適斯用煩于抹：目的基因載體限制性?xún)?nèi)切酶限制性?xún)?nèi)切酶T4DNA連接酶15oC重組體載體自連目的基因自連3郊.粘-平僚末乏端康連誕接黏-平揮末由端節(jié)連罵接論是奸指奏目悄的D定N優(yōu)A和區(qū)載句體觀之證間憂(yōu)通構(gòu)過(guò)更一央端臟為常黏嫁端掩、渾另室一公端開(kāi)為喪平心端拾的榮方罷式浩進(jìn)小行沒(méi)連例接瓦。屬花于友定燭向掘克票隆受慮體糧菌謀條懇件丟：安蘭全釋宿袍主殃菌限鄭制療酶蹲和抓重烘組終酶聯(lián)缺那陷處慎于揭感鴉受市態(tài)(吧c尊o觸m址p旦e終t口e痛n寨t損)導(dǎo)拔入過(guò)方略式障：轉(zhuǎn)除化(揮t情r窯a攔n釣s外f脹o京r建m奴a堂t勺i卸o茅n仗)轉(zhuǎn)匪染(齊t醒r伶a宅n房誠(chéng)s沾f耐e令c合t嚇i編o峰n貝)感祝染(運(yùn)i薪n預(yù)f谷e樂(lè)c做t比i龜o堅(jiān)n殺)（享四醒）妖重兇組D擊N洞A轉(zhuǎn)刮入妖受序體請(qǐng)細(xì)滑胞—劫—轉(zhuǎn)1粉.借賊助虧載替體展上鴿的色遺奶傳番標(biāo)類(lèi)志駛進(jìn)渴行受篩嶺選(殺1冊(cè))利獲用費(fèi)抗竹生乎素斤抗顛性可標(biāo)膽志講篩階選(發(fā)2禍)利氧用苦基翁因偉的和插翅入離失逢活/插搶入黑表朱達(dá)特牙性認(rèn)篩極選(除3暢)利現(xiàn)用任標(biāo)撓志侄補(bǔ)渴救嘩篩印選(型4茶)利近用