超氧化物歧化酶(SOD)的生產第六組錢龍SOD知識簡介1.SOD的概念超氧化物歧化酶是一種廣泛存在于動物、植物、微生物中的金屬酶，是生物體內抗氧化酶系中主要成員之一。2.SOD的分類按其結合的金屬離子可分為Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三種SOD知識簡介3.SOD的理化性質3.1SOD對氰化物和H2O2的敏感性長時間用過氧化氫處理可使CuZn-SOD和Fe-SOD失活，而Mn-SOD不受影響3.2SOD的吸收光譜特性CuZn-SOD具有獨特的紫外吸收光譜。由于色氨酸和酪氨酸的含量較低，它在280nm處并沒有最大吸收峰。CuZn-SOD的可見光最大吸收波長都在680nm左右，這反映了酶分子中Cu2+的光學特性。SOD知識簡介

3.3SOD穩定性及影響因素3.3.1PH、熱、蛋白酶的影響：SOD在pH5.3～9.6間催化性能良好，在pH4.5～pH11間能穩定存在。pH3.6時，CuZn-SOD中95%的Zn要脫落，在pH12.2時，SOD的構象會發生不可逆的轉變而使酶失活。3.3.2SOD對熱的穩定性與溶液中離子強度有關。當離子強度很低時,即使加熱到95℃,其活性損失也很少其他因素：SOD活性受飲料的色澤、成分、酸堿度、乙醇含量等多種因素的影響，只有在無色、近中性、無乙醇飲料中SOD活性較穩定。另外還發現有機溶劑和Cl對SOD的活性具抑制作用SOD的作用welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience它催化超氧陰離子轉化為H2O2和O2的反應，即催化超氧陰離子自由基O2-·發生歧化反應，從而清除O2-·，2O2-·+2H+→H2O2+O2，在生命體的自我保護系統中起著極為重要的作用，在免疫系統中也有重要的功，因而它能防御氧毒性，增強機體抗輻射損傷能力，防衰老。實訓目的（1）掌握SOD酶的提取、分離、檢測一般步驟。2）了解酶在提取過程中的兩個參數：回收率、純化倍數。3）掌握離心機的使用。實訓原理welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience

鄰苯三酚在堿性條件下，能迅速自氧化，釋放出O2-，生成帶色的中間產物，中間物的積累在滯留30～45s后，與時間成線性關系，一般線性時間維持在4min的范圍內，中間物在420nm波長處有強烈光吸收。當有SOD存在時，由于它能催化O2-與H+結合生成O2和H2O2，從而阻止了中間產物的積累，因此，通過測定光吸收即可求出SOD的酶活性。實訓器材welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience

大蒜，冷丙酮，磷酸緩沖液（PH7.8，0.05mol/L)氯仿-乙醇混合液鄰苯三酚濃鹽酸儀器：天平、石英砂、研缽、冷凍離心機、50mL離心管（8）、紫外-可見分光光度計、250mL三角瓶（8個）、玻璃棒（8根）、試劑瓶250mL（3個）、500mL（3個）、250mL燒杯（16個）、試管帶膠塞(80根)、移液管(5根)SO倉D的燙生產1.割SO每D酶新的提奇取稱取榆5克弦大蒜平蒜瓣甩，加臟入石膀英砂形研磨廉破碎膊細胞勇后，皺加入盈pH推7.源8,鋸0.棚05還mo殿l/籃L的張磷酸深緩沖等液（但pH咱7.吩8）原15別ml惠，繼去續研從磨2置0m榴in嘴,使就SO器D酶圣充分接溶解陣到緩壞沖液幸中，基然后革60家00昨r/稅mi封n冰揪凍離盆心1股5m挨in合，放所棄沉捕淀，而取上泉清液鳳。2.粒去除煉雜蛋士白上清自液中葵加入夕0.慘25堡倍體終積的者氯仿共——犬乙醇撈混合肌液攪揀拌1醉5m累in聽,6灶00塔0r射/m猜in邊離心服15獲mi喊n，映放棄幫沉淀伐，得靜到的劉上清姜液即疫是粗底酶液SO獄D的徹生產3.嫌SO少D酶獄的沉更淀分喇離粗酶另液在封攪拌市下緩務慢加月入固肉體硫濁酸銨贊至飽掛和濃塑度6禿0%布，持縫續攪允拌1省5m曉in畢，6勁00巾0r遍/m液in謀離心殺15捏mi頑n，金得到憐SO闖D酶畢沉淀4.涌將沉幻玉淀溶聯入p輩H7馳.8裕，0蜻.0挨5m活ol歉/L系的磷舅酸緩慢沖液照5m異L中嫂，然角后6送00撇0r蛙/m捕in病離心課15屈mi冷n，炒放棄量沉淀壟，取蔽上清依液，強用凝債膠s昂ep撫ha粥cy休lS賀-2北00鹿進行碎純化約，然獨后超電濾濃飼縮。SO嗽D的際生產5.厚用紫扛外分算光光歇度計翼測定僅濃液揉的蛋串白含軟量6.即將濃戒縮冷城凍干漸燥后敲即得源成品捉。連苯鹿三酚蛙自氧句化速囑率的蓮測定取4呢.5件ml糾緩沖砍液，掉在2本5℃他水浴匙中保凳溫1滋5m寨in鐮,加津入1儉0持連苯喪三酚濱液，凝迅速側搖勻空白百：取爬4.鉛5m夕l緩鴉沖液深，在勻25京℃水萄浴中輛保溫逃15搜mi墨n,嘗加雅入1聚0孔緩沖宇液，頭迅速扎搖勻倒入挎光徑疑1c木m的置比色宿杯中籌，在洋32與5n霧m波廊長下并于恒萬溫池廣中每穴隔3京0s健測A棵值一所次計算噴線形港范圍掃內，仰每1糧mi窯nA藏的增婚值，靈此即勝連苯彈三酚辜的自競氧化暴速率蠶，要引求自翼氧化降速率常控制艦在0鞋.0娃7O職D/淚mi唉n酶活鵝測定測定追方法稼與測獸連苯歲三酚協自氧坐化速棋率相市同取1能.5宣ml挎緩沖及液，唱在2椅5℃他水浴島中保艙溫1耀5m鏈in凍,加腰入3嗽ml愿酶液歪，加父入1叛0白連苯常三酚宮液，側迅速木搖勻空白阿：取亭1.勁5m廁l緩衫沖液黑，在搜25恥℃水鼓浴中茅保溫揀15泄mi癥n,豎加異入3幼ml霉酶液介，加泊入1控0梯緩沖院液，溜迅速粘搖勻計算蠶加酶紛后連擠苯三庫酚自市氧化駛速率SO讀D的幅生產試劑/ml空白管對照管OD1提取液OD2粗酶液OD2酶液OD2PH8.3緩沖液33333SOD提取液000.10.10.1蒸餾水21.81.71.71.7室溫放置20min鄰苯三酚00.20.20.20.2結果是計算酶活朗力單背位提取毫液酶罪活力移單位紀：=粱2（占OD咬1-倆OD模2）魚×5缺/0揭.1呢=粗酶佛液活考力單府位：滾=2裂（O反D1帶-O淡D2旦）×剪5/肯0.貌1=酶液勸活力水單位畏：=原2（淺OD個1-束OD觸2）頁×5陷/0息.1萄=總活互力提取腳液總削活力告U=墳活力攤單位冊×總值體積夜=粗酶族液總蘆活力蝦=活出力單貨位×睜總體脖積=酶液芽總活色力=鐘活力須單位躁×總涂體積耗=比活孟力提取針液酶竭液比傻活力媽U/獵mg剖=活母力單辰位/畏蛋白奴質濃能度=粗酶麥液比湯活力斥U/毀mg軟=活驅力單兩位/紫蛋白訊質濃匯度=酶液恩比活訂力U搶/m寸g=庸活力削單位耽/蛋誓白質孟濃度逮=注意身事項we身lc存om嗓e離to護u燈se攔t叨he感se徒P動ow鏟er怨Po噸in鍵t碎te昏mp勿la治te回s,粱N粘ew銳C華on吩te歲nt斑d查es勿ig貫n,傳1肥0新ye午ar掌s趨ex攜pe支ri撐en泊ce1.SOD的安全性大量角試驗掙和臨軌床應戀用表歇明，繁無享論何掙種給舉藥方亡式，怪除罕籃見的秋超敏勵反應凡外，途SO識D對隊人體堂無毒陣性。飄雖然窯SO顫D是輛Mr歉在3腹0賣00濃0以途上的涌蛋白哄質，勾但小卻未筑發現衣具有