關(guān)于微生物的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和大小的測(cè)定第1頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)使用目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺在顯微鏡下測(cè)定微生物大小的方法。

學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測(cè)定微生物數(shù)量的方法。

第2頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)材料顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、血球記數(shù)板、酵母菌懸液、蓋玻片、無(wú)菌滴管、吸水紙、擦鏡紙。第3頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定酵母菌細(xì)胞的大小

測(cè)定的工具：目鏡測(cè)微尺鏡臺(tái)測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際代表的長(zhǎng)度隨物鏡的放大倍數(shù)而改變，也會(huì)因使用不同的顯微鏡而產(chǎn)生誤差，因此在使用前必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺進(jìn)行校正。

第4頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三目鏡測(cè)微尺的校正：在40×鏡下，看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度平行，移動(dòng)載物臺(tái)，使目鏡測(cè)微尺的0點(diǎn)與鏡臺(tái)測(cè)微尺的某一刻度重合，然后，仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)完全重合的刻度。計(jì)算兩刻度間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。由于鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度每格長(zhǎng)10μm，所以可得

目尺每格長(zhǎng)度(μm)=（臺(tái)尺格數(shù)×10）/目尺格數(shù)菌體大小的測(cè)定：制作一片酵母菌的蓋片，取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，將蓋片置于載物臺(tái)上，然后在40×鏡下用目鏡測(cè)微尺測(cè)量菌體的長(zhǎng)和寬。第5頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三酵母菌顯微直接計(jì)數(shù)

方法：活菌計(jì)數(shù)法——平板菌落計(jì)數(shù)法；總菌計(jì)數(shù)法——血球計(jì)數(shù)板或霍瑟（PeroffHausser）細(xì)菌計(jì)數(shù)板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。第6頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三取清潔無(wú)油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋血蓋片。取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。用10×鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。在10×鏡下計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)4個(gè)（或5個(gè)）中格的平均值，然后求得每個(gè)中格的平均值。乘上16（或25）就得出計(jì)數(shù)區(qū)總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。注意事項(xiàng)：計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右。出芽計(jì)一半第7頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)結(jié)果目鏡測(cè)微尺標(biāo)定結(jié)果：

40×鏡下

倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是

μm。菌號(hào)酵母的直徑大小測(cè)定結(jié)果

目鏡測(cè)微尺格數(shù)實(shí)際直徑/μm1

2

3

4

5

均值

第8頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三將顯微計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于下表中。T表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；D表示菌液稀釋倍數(shù)。

各中格中菌數(shù)TD二室平均值個(gè)/ml12345第一室

第二室

第9頁(yè)，講稿共12頁(yè)，2023年5月2日，星期三問(wèn)題與討論為什么目鏡測(cè)微尺必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺來(lái)校正？

在顯微鏡下直接測(cè)定微生物數(shù)量有什么優(yōu)缺點(diǎn)？第10頁(yè)，講稿共12