中醫藥逆轉腫瘤多藥耐藥性的研究進展

【關鍵詞】抗藥性，多藥;抗藥性，腫瘤;抗腫瘤藥，植物;綜述文獻

腫瘤誘導化療不易緩解或緩解后極易復發，重要原因是腫瘤細胞的耐藥現象———多藥耐藥性。多藥耐藥性是指腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物產生抗藥性的同時，對結構和作用機制不同的抗癌藥物產生交叉耐藥性。MDR的形成機制十分復雜，腫瘤細胞可通過不同途徑導致MDR的產生。同時，單個MDR細胞可同時存在多種抗藥性的機制，一種或幾種聯合作用均可導致MDR的產生。MDR是腫瘤化療急需解決的難題，對其發生機制的研究和開發逆轉多藥耐藥性的藥物是當前腫瘤研究中的重要課題。隨著中醫藥對腫瘤化療減毒增效及逆轉腫瘤多藥耐藥性研究的深入，尋找開發逆轉腫瘤多藥耐藥性的高效、低毒中醫藥已成目前中醫腫瘤內科研究的重要課題［1］。現對近年來中醫在開發逆轉腫瘤多藥耐藥性方面的研究綜述如下。

1多藥耐藥性產生機制

腫瘤多藥耐藥性產生的原因和機制十分復雜，細胞可通過多種機制產生多藥耐藥性，與細胞膜有關的主要因素有P-糖蛋白、多藥抗藥性相關蛋白、肺多藥抗藥性相關蛋白、乳癌耐藥性相關蛋白等;與細胞質有關的主要因素有拓撲異構酶Ⅱ、蛋白激酶C、谷胱苷肽氧化還原系統等。但最重要的為P-gp介導的多藥耐藥性，即典型MDR［2，3］。

抗凋亡機制在腫瘤細胞發生發展及多藥耐藥性中起很重要作用［4］。化學結構和作用靶點各異的抗腫瘤藥物均可誘導腫瘤細胞凋亡，細胞對化療藥物多藥耐藥性的產生部分是凋亡受抑制的結果。已發現30多種基因對細胞凋亡起促進或抑制作用，如腫瘤抑制p53基因、抗腫瘤凋亡蛋白bcl-2家族、凋亡蛋白抑制因子IAP家族，但其發生機制仍不完全清楚。另外，癌基因C-jun編碼轉錄激活因子AP-1激活，謂之。該產物可識別特異基因的啟動子，與C-fos基因產物形成異源二聚體后，即可與基因結合并激活其轉錄，激活的PKC可持續活化，且其活性增強，對基因轉錄產生正向調節［5］。有研究表明MDR細胞株具有凋亡抗性，P-gp能延緩凋亡“瀑布”的出現。P-gp除了作為藥物外排泵外，能抑制Caspase-3和Caspase-8的激活，抑制大多數抗腫瘤藥物誘導細胞凋亡的核心通路———Caspase依賴性細胞凋亡［6］。

腫瘤多細胞球體是由多個腫瘤細胞組成的球狀聚集體，組織結構與實體瘤相似，和腫瘤單細胞相比，多細胞球體對化療MDR增加，滲透機制不足以完全解釋多細胞球體細胞的多藥耐藥現象。可能機制有:①多細胞球體細胞周期特異性敏感的細胞數減少;②細胞接觸或黏附介導的生存機制，化療多藥耐藥部分是凋亡受抑制的結果，細胞接觸或黏附可抑制細胞凋亡的發生，這也可能是多細胞球體細胞化療多藥耐藥的原因之一;③多細胞球體的生長微環境引起多藥耐藥相關基因活性變化［7］。逆轉MDR主要有2種途徑，開發對MDR細胞不具有多藥耐藥性的新抗腫瘤藥物及尋找MDR逆轉劑與抗腫瘤藥物合用，恢復MDR細胞對抗腫瘤藥物的敏感性，后者目前已在以下方面開展研究以克服MDR:①使用免疫治療藥物，如單克隆抗體;②使用能抑制P-gp功能的藥物;③抑制多藥耐藥基因表達;④逆轉MDR中醫藥的開發研究。

2中藥復方及臨床研究

1中藥方劑R1的無細胞毒濃度可完全逆轉人乳腺癌細胞系.阿霉素的MDR［8］。中藥R3的無細胞毒濃度可增加對ADM的敏感性，且與異搏定具有協同作用，可完全抑制P-gp的表達，呈時間依賴性，48h后P-gp表達完全消失。提示中藥R3可能通過抑制P-gp功能，增加ADM在細胞中濃度，調控的MDR［9］。

中醫藥對MDR腫瘤細胞有誘導凋亡作用。研究4種中藥提取物GLYC、DLEN、SPES、PC-SPES的提取液對小細胞肺癌H69、H69VP、正常肺上皮細胞BEAS-2作用表明，4種中藥提取物組方對腫瘤細胞的細胞毒作用強于對BEAS-2，不同中藥組方對細胞作用不同，在GLYC中細胞表現為壞死;在DLEN、SPES、PC-SPES中有凋亡表現，且用原位末端標記法分析確認后三者的表達為細胞凋亡［10］。

康萊特注射液對耐藥人白血病細胞和的作用實驗結果顯示:①人白血病耐藥細胞對KLT有輕度抗性;②KLT能明顯增強MDR細胞對化療藥物的敏感性，其逆轉作用呈劑量依賴關系;③KLT能誘導人白血病細胞凋亡［11］。

2晚期惡性腫瘤大多出現轉移和MDR。中醫學通過辨證論治對晚期惡性腫瘤治療有獨特優勢。為觀察急性白血病中醫辨證分型與P-gp表達及臨床療效關系的研究，蘇偉等［12］對146例急性白血病患者進行了分析總結。結果表明:氣血兩虛型患者P-gp表達較低，臨床緩解率較高，而氣陰兩虛型與溫毒瘀血型患者P-gp表達較高，臨床緩解率較低。此研究為今后通過辨證論治改善與MDR相關的中醫證候提供了理論依據。

中藥制劑拮新康對34例白血病患者進行體外細胞毒性試驗，結果顯示:長春新堿+拮新康組較長春新堿組細胞毒性明顯增加，其中20例為難治與復發的白血病患者對長春新堿已耐藥，但加拮新康后細胞毒性作用增強，同時拮新康本身對白血病細胞也有一定的抗腫瘤作用［13］。

3單味藥

1人參已證實人參對一些腫瘤細胞有增殖抑制作用，人參中的人參皂甙可抑制腫瘤血管形成及腫瘤轉移。人參皂甙Rg3對耐順鉑人肺腺癌細胞系A549DDP逆轉呈劑量依賴性、時間依賴性。以Rg3預處理癌細胞A549DDP12、24、36及48h后，耐藥相關蛋白MDR1、MRP、mRNA表達減弱，呈時間依賴性，而LRP表達無明顯時間依賴性［14］。人參皂甙Rb1對人肝癌的BEL-7402細胞-天然長春新堿耐藥對VCR的體外增敏作用有類似維拉帕米逆轉MDR的作用［10］。

人參皂苷Rb2的濃度、時間依賴性可抑制子宮內膜癌細胞向再構筑基底膜的浸潤。基質金屬蛋白酶-2與基底膜浸潤有關，進一步研究發現人參皂苷Rb2可抑制MMP-2的活性［15］。

2八角金盤八角金盤具有DNATopo異構酶抑制劑作用。2種MDR的KB細胞系均對從八角金盤提取物中的提取物產生的細胞毒高敏感。但對已知的3種成分體外單獨研究既不是Topo異構酶Ⅱ抑制劑，又不能產生細胞毒活性。3種成分的混合物似乎通過阻礙細胞對藥物聚集的選擇性發揮作用。也可能是其他成分或混合物具有抗DNATopo異構酶Ⅰ的活性［16］。

3砷劑砷劑主要是指雄黃［主要成分為硫化砷］和砒霜［有效成分為三氧化二砷］。砷化合物能與組織蛋白質中的巰基結合，使多種酶失活。谷胱苷肽S-轉移酶酶的催化活性部位有巰基參與，砷劑還可與次巰基結合，部分逆轉耐藥。三氧化二砷對阿霉素耐藥的體外有逆轉作用。三氧化二砷在非毒性劑量可增加細胞內ADM的含量，逆轉倍數為倍;非毒性、低毒性劑量作用前后CST-π酶活性有顯著改變，CST-πmRNA的表達水平也呈不同程度的下調［17］。

4中藥粗制劑

3種中藥“扶正祛邪”類制劑Ams-11、Fw-13、Tul-17臨床長期大量使用無毒副作用，在無細胞毒性的劑量范圍內，該3種中藥粗制劑均能明顯增強人卵巢癌多藥耐藥性細胞株SKVLB對抗癌藥物VCR的敏感性，且其逆轉作用呈劑量依賴關系。Ams-11與細胞SKVLB作用72h在1～的劑量范圍內對細胞SKVLB幾乎無毒性，μ可致15%細胞死亡，中藥Ams-11加入VCR后細胞死亡率提高，二者有顯著性差異;Ams-11生藥逆轉作用與5μ相當;Fw-13在～

對細胞SKV-LB幾乎無毒性，Fw-13生藥逆轉作用與5μ相當;Tul-17在3～100μ對細胞SKVLB幾乎無毒性，60μTul-17生藥逆轉作用與5μVRP接近。SKVLB細胞P-gp高表達，考慮此3種中藥粗制劑能逆轉其他腫瘤細胞由P-gp介導的MDR［18］。

5中藥單體

1具有鈣通道阻滯作用的中藥單體漢防己甲素、巴馬汀、小檗堿、丹皮酚、人參皂苷Rb1、蝙蝠葛堿、蓮心堿、左旋四氫巴馬汀、延胡索乙素、左旋千金藤立定、川芎嗪。因鈣通道阻滯劑能逆轉P-gp介導的MDR，故從中藥中篩選多類MDR調變劑具有廣闊前景。

上述藥物都有類似VRP的增效作用，尤其是漢防己甲素、蝙蝠葛堿、蓮心堿、左旋四氫巴馬汀、人參皂苷Rb1在人肝癌的BEL-7402細胞對VCR的體外增敏作用，有類似VRP逆轉MDR的作用。TTD和DRC能明顯增加阿霉素對耐阿霉素人乳腺癌細胞的細胞毒作用，并能增加ADR在的細胞內的積累，提示TTD和DRC能夠阻斷MDR細胞的藥物外排過程而逆轉MDR［19］。TTD對中國倉鼠細胞系的MDR具逆轉作用，可完全逆轉阿霉素耐藥株的人乳腺癌細胞及VCR耐藥株人口腔上皮癌KBv200細胞對阿霉素或長春新堿的抗藥性，且對有明顯的選擇性［20］。漢防己甲素對細胞周期有明顯的作用，能消除DNA損傷誘導的G2期關卡，明顯提高化療、放療的效果［21］。川芎嗪能顯著增加阿霉素耐受性K562對阿霉素的敏感性。在非細胞毒性劑量下能使對阿霉素和VCR的IC50降低，使細胞內阿霉素的濃度升高，但對細胞表面的P-gp卻沒有影響［22］。

2姜黃素、天花粉蛋白與內酯類Cur是從姜科植物姜黃中提取的一種酚性色素，具有抗氧化、抗突變、抗促癌等作用。目前對其抗癌作用的研究主要集中在腫瘤化學預防方面，美國國立腫瘤研究所已將其列為第3代癌化學預防藥。姜黃素誘導CA46細胞凋亡，使CA46細胞c-myc、bcl-2突變型、p53蛋白和mRNA表達水平顯著下降，而Fas蛋白和Mrna表達水平上升［23］。研究姜黃素～μ與長春新堿合用對KB和KBv200細胞均有增敏作用［24］。天花粉蛋白對胃癌MDR細胞也有細胞毒和誘導凋亡作用［25］。MDR腫瘤對番荔枝總內酯、番荔枝內酯單體如Bullata-cin、Atemoyacin和AatemoyacinB十分敏感，Bullatacin不僅對ADM的細胞株NADH氧化酶具有同非耐藥HL-60細胞同樣抑制作用，番荔枝內酯主要作用是抑制線粒體NADH氧化還原酶，抑制線粒體呼吸鏈傳遞，使細胞產生能量迅速減少，從而影響P-gp功能。因此，番荔枝內酯有望成為逆轉腫瘤MDR的藥物［26］。

3蒽醌類化合物大黃酸.大黃素、馬藺子素。大黃酸.大黃素與阿霉素、柔紅霉素等抗癌藥同屬蒽醌類化合物，有親脂性，需通過主動運輸進入細胞內。對阿霉素、柔紅霉素耐藥的細胞在理論上講對大黃酸.大黃素也應耐藥。但胡凱文等［27］的實驗結果恰好相反，對阿霉素、柔紅霉素耐藥的3個瘤株、、對大黃酸.大黃素仍然敏感。大黃酸.大黃素對所選耐藥細胞及其對應敏感細胞的殺傷活性幾乎是一樣的，說明大黃酸.大黃素殺傷腫瘤細胞的機制與阿霉素、柔紅霉素可能不同，可能存在重要的理論和臨床應用價值。

馬藺子素是乏氧細胞放射增敏劑，且其具有逆轉MDR作用。耐順鉑A549細胞對ANKA不耐受，ANKA無毒或低毒濃度明顯增加對順鉑的敏感性，無劑量依賴。ANKA可降低耐藥細胞谷胱苷肽水平及GST-π蛋白表達，干預MRP合成，對TopoⅡ型酶有顯著抑制作用［28］。

4雙芐基異喹啉生物堿輪環藤堿、海島輪環藤堿、海島輪環藤酚堿、千金藤素和小檗胺，均為雙芐基異喹啉生物堿，其化學結構與某些P-gp的光親和標記物的結構類似，均有膜調節作用，故其逆轉MDR的機制很可能與其干擾膜的功能，直接與P-gp結合有關。BBI類藥物CYC、Insr、Insn能顯著逆轉阿霉素在及VCR在KBv200細胞內的耐藥，且具有劑量依賴性，它們能通過增加耐藥細胞內的ADM積累而調節MDR，且CYC、Insr優于VRP的逆轉作用，Insn類似VRP的逆轉作用［29］。漢防己堿和去甲粉防己堿也是雙芐基異喹啉生物堿。TET和FAN均可使P-gp表達陽性的細胞系HCT-15中若丹明123的蓄積量增加2～倍，但對P-gp表達陰性的細胞SKOV3不起作用，可提高對由P-gp介導的MDR藥物的細胞毒性［30］。TET能顯著逆轉MDR細胞的凋亡抗性，蝙蝠葛堿也為雙芐基異喹啉生物堿，千金藤素和小檗堿也有逆轉MDR的作用，且毒性較小［31］。

6展望

腫瘤MDR的機制是多因素、多水平、多方面的，是機體和腫瘤細胞及腫瘤生長微環境在機體不同的生理病理狀態下共同作用的結果。一方面通過近年來分子生物學發展起來的基因芯片技術、比較基因組雜交技術及蛋白組學和功能基因組學在耐藥與非耐藥細胞株中進行大規模高通量的比較分析，從中尋找到腫瘤MDR基因是大有希望的。另一方面，充分發揮我國中醫藥治療腫瘤的優勢，立足于辨證論治，從中藥尤其是中藥復方中篩選MDR逆轉劑，在內可改善、糾正機體病理狀態下異常的功能基因及蛋白組學，在外可改善腫瘤生物特性，逆轉耐藥，增強抗病能力。走中西醫結合道路，根據患者具體情況、腫瘤病理學及生物學特性、轉移傾向性，合理地、有計劃地制定綜合治療方案，在提高腫瘤治愈率、延長生存期、提高患者生存質量方面，相信會開辟一條異于西醫學的新路，促進腫瘤診治水平的提高。

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