菌落總數與大腸菌群數測定詳解演示文稿本文檔共37頁；當前第1頁；編輯于星期六\16點46分優選菌落總數與大腸菌群數測定本文檔共37頁；當前第2頁；編輯于星期六\16點46分菌落總數測定掌握菌落總數測定方法實驗原理 不同稀釋度的樣品，營養瓊脂培養基，36℃，48h（水產品30℃，72h），菌落數本文檔共37頁；當前第3頁；編輯于星期六\16點46分菌落總數測定器材與試劑：樣品，無菌生理鹽水，平板計數瓊脂培養基，1ml吸管，培養皿本文檔共37頁；當前第4頁；編輯于星期六\16點46分菌落總數測定本文檔共37頁；當前第5頁；編輯于星期六\16點46分傾注培養本文檔共37頁；當前第6頁；編輯于星期六\16點46分培養結果本文檔共37頁；當前第7頁；編輯于星期六\16點46分菌落總數測定實驗步驟

5.菌落計數：肉眼觀察，可用放大鏡，可標記必要時分區計數，菌落成片者作廢計算方法某稀釋度的菌落數：兩平板菌落數取平均值選擇菌落數在30-300之間的稀釋度（1）僅有一個稀釋度在此范圍：菌落數×稀釋倍數本文檔共37頁；當前第8頁；編輯于星期六\16點46分菌落總數測定計算方法：（2）有兩個稀釋度在30-300之間菌落數之比>2，選較小值菌落數之比<2，取平均值（3）所有稀釋度均>300

取稀釋倍數最大者（4）所有稀釋度均<30

取稀釋倍數最小者（5）沒有任何稀釋度在30-300之間選最接近該范圍者結果單位：CFU/ml（g）本文檔共37頁；當前第9頁；編輯于星期六\16點46分菌落總數測定注意事項：

1.無菌操作

2.標記

3.何時更換吸管

4.吸吹混勻

5.瓊脂培養基保溫

6.安全常識本文檔共37頁；當前第10頁；編輯于星期六\16點46分大腸菌群數測定實驗目的實驗原理

36℃，48h，產氣（小倒管）三步法：初發酵、復發酵器材與試劑樣品、無菌生理鹽水、LST肉湯，BGLB肉湯

1ml吸管、10ml吸管、試管、小倒管本文檔共37頁；當前第11頁；編輯于星期六\16點46分初發酵器材與試劑樣品、225ml無菌生理鹽水、9ml無菌生理鹽水、雙料LST肉湯，單料LST肉湯，10ml吸管、1ml吸管、吸球本文檔共37頁；當前第12頁；編輯于星期六\16點46分大腸菌群數測定實驗步驟：

1.初發酵

本文檔共37頁；當前第13頁；編輯于星期六\16點46分本文檔共37頁；當前第14頁；編輯于星期六\16點46分本文檔共37頁；當前第15頁；編輯于星期六\16點46分吸取樣品方法本文檔共37頁；當前第16頁；編輯于星期六\16點46分加注樣品本文檔共37頁；當前第17頁；編輯于星期六\16點46分初發酵結果右邊為陽性結果，小倒管內有氣體產生。本文檔共37頁；當前第18頁；編輯于星期六\16點46分實驗步驟

3.復發酵（1）選取產氣試管（2）接種至10mlBGLB肉湯中（3）培養：36℃，48h

（4）觀察指標：若產氣則報告大腸菌群陽性。本文檔共37頁；當前第19頁；編輯于星期六\16點46分大腸菌群數測定實驗步驟

2.分離培養（1）制備伊紅美藍平板：

45℃，無菌，傾注，15ml

（2）選產酸產氣的發酵管（3）接種至伊紅美藍平板分區劃線法（4）培養：36℃，48h本文檔共37頁；當前第20頁；編輯于星期六\16點46分分離培養器材與試劑初發酵結果（4只發酵管）、酒精燈、接種環、伊紅美蘭平板培養基本文檔共37頁；當前第21頁；編輯于星期六\16點46分分區劃線法第一區劃線滅菌接種環第二區劃線滅菌接種環第三區劃線滅菌接種環本文檔共37頁；當前第22頁；編輯于星期六\16點46分分區劃線法操作要點

1.劃下一個區前必須滅菌接種環

2.劃線時接種環同平板呈30-40°角

3.每次劃線應該壓到上一個區域的2-3條線

4.用接種環的“面”而不是“弧”在平板上滑動本文檔共37頁；當前第23頁；編輯于星期六\16點46分大腸菌群數測定實驗步驟

2.分離培養：

（5）菌落特征：深紫黑色、有金屬光澤紫黑色、無或略有金屬光澤淡紫紅色、中心顏色深（6）革蘭染色、鏡檢：選特征菌落本文檔共37頁；當前第24頁；編輯于星期六\16點46分革蘭染色法器材與試劑結晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、酸性復紅、生理鹽水、酒精燈、載玻片、濾紙本文檔共37頁；當前第25頁；編輯于星期六\16點46分革蘭染色法涂片：接種環，挑取菌落，生理鹽水一滴，涂勻熱固定：通過火焰若干次初染：結晶紫一滴，1min，水洗媒染：盧戈碘液一滴，1min，水洗脫色：95%乙醇，30s或至無色為止復染：復紅一滴，30s本文檔共37頁；當前第26頁；編輯于星期六\16點46分涂片本文檔共37頁；當前第27頁；編輯于星期六\16點46分熱固定本文檔共37頁；當前第28頁；編輯于星期六\16點46分初染本文檔共37頁；當前第29頁；編輯于星期六\16點46分媒染本文檔共37頁；當前第30頁；編輯于星期六\16點46分脫色本文檔共37頁；當前第31頁；編輯于星期六\16點46分復染本文檔共37頁；當前第32頁；編輯于星期六\16點46分革蘭氏染色陰性革蘭氏染色陽性革蘭染色法本文檔共37頁；當前第33頁；編輯于星期六\16點46分復發酵器材與試劑培養24小時后的伊紅美蘭平板、酒精燈、接種環、復發酵管本文檔共37頁；當前第34頁；編輯于星期六\16點46分大腸菌群數測定實驗步驟

3.復發酵（1）選取鑒定為無芽孢G-桿菌的菌落1-3個（2）接種至10ml乳糖蛋白胨培養液（