1課題DNA的粗提取與鑒定染色體成分蛋白質RNA(少量)DNA提取DNA的基本思路：利用DNA與RNA、蛋白質和脂質等在物理和化學性質方面的差異，提取DNA，去除其他成分。2DNA的粗提取與鑒定1．原理、方法和目的基本原理方法目的DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低溶于NaCl溶液中并稀釋①NaCl溶液為2mol/L時，DNA溶解，而部分蛋白質發生鹽析生成沉淀，通過過濾可除去部分蛋白質及不溶于NaCl溶液的雜質②當NaCl溶液稀釋至0.14mol/L時，DNA析出，過濾可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白質和其他雜質DNA不被蛋白酶所水解加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白質（酶的專一性）DNA不溶于酒精溶液加入冷卻酒精(95%)DNA析出，除去溶于酒精的蛋白質DNA可被二苯胺染成藍色加入二苯胺，并沸水浴鑒定DNA高溫DNA耐高溫DNA和蛋白質對高溫耐受性不同：蛋白質、DNA熱穩定性不同。大多數蛋白質不能忍受60～80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會變性。DNA對洗滌劑耐受性洗滌劑能夠瓦解細胞膜，但對DNA沒有影響。加入洗滌劑31）不同濃度NaCl中DNA溶解度不同。

2）DNA與其他細胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，細胞中某些蛋白質則溶于酒精。3）DNA和蛋白質對酶耐受性不同：酶的專一性——蛋白酶水解蛋白質。但是對DNA沒有影響。4）DNA和蛋白質對高溫耐受性不同：蛋白質、DNA熱穩定性不同。大多數蛋白質不能忍受60～80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會變性。5）DNA和蛋白質對洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細胞膜，但對DNA沒有影響。提取DNA的原理包括DNA的

兩個方面溶解性和耐受性1.DNA的粗提取實驗原理42.實驗材料

①動物

雞血細胞液的優點提醒：人和哺乳動物成熟的紅細胞中不含細胞核，也沒有DNA，不適于作為DNA提取的材料。雞紅細胞、白細胞中都有較大細胞核，含大量的DNA,經濟又易取

②植物：新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。（用洗滌劑處理）

洗滌劑的作用：洗滌劑可以與細胞膜中的蛋白質結合，使之溶解，進而瓦解細胞膜。563、方法與過程

1).制雞血細胞液0.1g/mL檸檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心或靜置沉淀。離心或靜置后去掉上清液（血漿中無DNA，全血中除掉血漿后就是濃縮的血細胞液，DNA的相對含量提高了）血漿血細胞7答：蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進入血細胞內，使血細胞脹裂，再加上攪拌的機械作用，就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA1、動物細胞動物細胞的破碎較易，例如，在雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水，同時用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂？8為了純化提取的DNA需要將濾液作進一步處理討論：上述濾液中只有DNA嗎？還可能含有哪些成分？答：否，可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質9DNA的溶解性DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點，選擇適當的鹽濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質沉淀，或者相反①根據DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線圖，思考在什么濃度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何變化的？在NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時，DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低；在0.14mol/L時，DNA溶解度最小；當NaCl溶液濃度繼續增加時，DNA的溶解度又逐漸增大。②如何通過控制NaCl溶液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出？當氯化鈉的物質的量濃度為2mol／L時，DNA的溶解度最大，濃度為0．14mol／L時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出用高濃度的鹽溶液溶解DNA，過濾后能除去在高鹽中不能溶解的雜質（如蛋白質會鹽析）；再加水稀釋至低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質。（此時DNA中仍混有少量蛋白質等雜質，而且DNA凝集程度不是很高，不利于搜集，應進一步提純處理）1011DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些物質則可以溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質進一步分離預冷的酒精，可以促進DNA的凝集12（四）DNA的析出與鑒定與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液(體積分數95％)，靜置2－3min，溶液中會出現白色絲狀物

——粗提取DNA用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水1、DNA的析出1314DNA的鑒定DNA遇二苯胺（沸水浴）會變藍，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。152.DNA的鑒定⑴向兩支試管中分別加入2mol/LNaCl

溶液5ml⑵其中一支試管中加入DNA絲狀物⑶各加入二苯胺試劑4ml⑷混勻后，置于沸水浴中加熱5min⑸待冷卻后，比較兩只試管中溶液的顏色變化觀察現象：溶解絲狀物的溶液變為藍色16

鑒定不變藍——對照組溶液逐漸變藍絲狀物(DNA)實驗組圖示結果加入物質比較均加入：①4mL二苯胺試劑②2mol/LNaCl溶液5mL鑒定時藍色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關。自變量你能采用其他方法對DNA進行鑒定嗎？洋蔥的鱗片葉表皮細胞取少許絲狀物，置玻片中央，加1滴甲基綠溶液，絲狀物變成綠色。鑒定所用的試劑是二苯胺或甲基綠。用二苯胺須加熱。用甲基綠不用水浴加熱。17方法步驟

加入物質

目的

1.制備雞血細胞液

檸檬酸鈉溶液

①

2.提取雞血細胞細胞核物質

20m1蒸餾水

②幻燈片18

3.溶解細胞核內的DNA

2m1／L的NaCI溶液40mL

③幻燈片18

4.析出含DNA的黏稠物

蒸餾水

④

5.濾取含DNA的黏稠物

⑤

6.將DNA的黏稠物再溶解

2mol／L的NaCl溶液20mL

⑥

7.過濾含DNA的NaCl溶液

⑦

8.提取含有雜質較少的DNA

冷卻的95％的酒精50mL

⑧幻燈片18

A:(1)向試管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4

mL二苯胺試劑

9.DNA的鑒定

B:(1)向試管中加入0.015mol／L

的NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺試劑

⑨

181920

注意事項

①制備雞血細胞液時，要在取雞血的同時加入檸檬酸鈉，靜置后上層是血清，下層為所需要的血細胞。

②整個實驗中加入“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精”

兩次加蒸餾水的目的不同，一是漲破細胞，二是稀釋溶液。

酒精最好用95%的冷酒精;

③加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時,動作要輕緩且朝一個方向。保證DNA分子的完整性。使用時注意玻璃棒不要碰到燒杯底。

④鑒定DNA時需沸水浴加熱。

⑤二苯胺試劑要現配現用,否則會影響鑒定的效果.二苯胺是一種有毒性的試劑,使用時注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位.

⑥盛放雞血細胞的容器最好是塑料容器（雞血細胞破碎后釋放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取過程中DNA的損失）

21DNA的直徑約為20×10-10m，實驗中出現的絲狀物的粗細是否表示1個DNA分子直徑的大小？答：DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個DNA聚在一起形成的。22下圖為“DNA粗提取和鑒定”實驗的相關操作。這些操作目的正確的是 （ ） A.①是洗滌血細胞，去除血細胞表面的雜質

B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的雜質

C.③是溶解DNA，去除不溶于2mol/LNaCl溶液的雜質

D.④是稀釋NaCl溶液，去除不溶于低濃度NaCl溶液的雜質

①是釋放核物質②是提純DNA，去除溶于酒精的雜質，④稀釋NaCl溶液，析出DNA。C23小結:生物體內有機物與化學試劑的特定顏色反應試劑名稱鑒定物質顏色反應溫度條件還原性糖如葡萄糖脂肪蛋白質DNA淀粉

磚紅色沉淀藍色橘黃色紅色紫色藍紫色加熱加熱斐林試劑班氏試劑蘇丹III蘇丹IV雙縮脲試劑二苯胺試劑碘液24植物細胞需要先用洗滌劑（洗發香波、沐浴液、洗潔精等）溶解細胞膜。洗滌劑可以瓦解細胞膜的原因是：洗滌液中含有十二烷基硫酸鈉和堿，它們可使細胞膜破裂，蛋白質變性，使蛋白質與DNA分離開來。利于DNA的釋放。動物細胞膜是不用試劑（洗滌劑）破壞的，因為動物細胞膜外面沒有細胞壁的保護，放在清水中自然的就會吸水而脹破，釋放出其中的DNA等物質。4、植物：新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。

1.如果用棉花植株作為實驗材料做《DNA的粗提取與鑒定》實驗，請你說出可能用到的二種化學試劑名稱，并說出這種試劑在該實驗中的用途。（4分）25

氯化鈉溶液：不同濃度的NaCl溶液，能使DNA溶解或析出，從而起到提取DNA的作用；

95%乙醇：DNA不溶于酒精，可以用于提取出含雜質較少的DNA；二苯胺：作為鑒定DNA的試劑；洗滌劑：能溶解細胞膜，有利于細胞內DNA的釋放（答出每種試劑的名稱和用途得2分）。262：下列圖示中能反映DNA溶解度與NaCl溶液濃度(mol/L)之間的關系的是（）C0.14DNA溶解度0.140.140.14DNA溶解度DNA溶解度DNA溶解度ABCDNaCl濃度NaCl濃度NaCl濃度NaCl濃度274.江蘇有一道涼菜——白斬雞，雞肉嫩而不韌、味美鮮香。其加工過程中添加了從木瓜中提取的酶制成的“嫩肉粉。”下列有關嫩肉粉的敘述中，正確的是(

)A．“嫩肉粉”可能是通過催化細胞間的纖維素水解而實現“嫩肉”的B．與高溫蒸煮相比，“嫩肉粉”是通過降低反應活化能而實現“嫩肉”的C．“嫩肉粉”應在蒸煮雞肉時加入，才能實現“嫩肉”D．“嫩肉粉”是一種化工產品，不利于人體健康，實際應用中能少則少、能無則無B282、現象解釋：298、與析出DNA粘稠物有關的敘述，不正確的是（多選）A操作時緩慢滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度B操作時用玻棒輕緩攪拌以保證DNA分子的完整C加蒸餾水可以同時降低DNA和蛋白質的溶解度D當絲狀粘稠物不再增加時，NaCl溶液的濃度可以認為是0.14mol/LE.改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出9、下列與DNA粗提取有關描述正確的是（）A、DNA能夠溶解在一定濃度的NaCl溶液中B、DNA能夠溶解在質量分數95%冷酒精中C、DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最高D、DNA只能溶解在2mol/L的NaCl溶液中A306.在“DNA粗提取與鑒定”實驗中，將含有一定雜質的DNA絲狀物分別放入體積為2mL的四種溶液中，經攪拌后過濾，獲得4種濾液，含DNA較少的是A．濾液EB．濾液FC．濾液GD．濾液H1蒸餾水中攪拌后過濾濾液E22mol／L的NaCl溶液攪拌后過濾濾液F3O.14mol／L的NaCl溶液中攪拌后過濾濾液G4冷卻的95％的酒精溶液中攪拌后過濾濾液HCD7、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的辦法是A加蒸餾水B加礦泉水C加清水D加生理鹽水318、與析出DNA粘稠物有關的敘述，不正確的是（多選）A操作時緩慢滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度B操作時用玻棒輕緩攪拌以保證DNA分子的完整C加蒸餾水可以同時降低DNA和蛋白質的溶解度D當絲狀粘稠物不再增加時，NaCl溶液的濃度可以認為是0.14mol/LE.改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出9、下列與DNA粗提取有關描述正確的是（）A、DNA能夠溶解在一定濃度的NaCl溶液中B、DNA能夠溶解在質量分數95%冷酒精中C、DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最高D、DNA只能溶解在2mol/L的NaCl溶液中A10.下列操作中，對DNA的提取量影響較小的是A.使雞血細胞在蒸餾水中充分破裂，放出DNA等核物質B.攪拌時，要用玻璃棒沿一個方向輕緩攪動C.在析出DNA黏稠物時，要緩緩加蒸餾水，直至溶液中黏稠物不再增多D.在用酒精沉淀DNA時，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻32解析：在B所述的操作中，可以保證DNA分子的完整性，但不影響提取量。除了A、C、D及在DNA的溶解和再溶解時，要充分攪拌影響DNA的提取量外，使用塑料器皿也可以減少DNA在操作中的損失。因為塑料制品的性質相對比較溫和,所以比金屬等其他的制品好一些.對DNA的損傷也就小一些．因為DNA容易與玻璃制品粘連

答案：B

3311.（多選）下表是關于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、操作及其作用的表述。正確的是（）試劑操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸餾水與雞血細胞混合保持細胞形狀C蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后DNA的NaCl中產生特定的顏色反應AC3412.下列關于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是()A、氯化鈉的濃度越低，對DNA的溶解度越大B、人血也可代替雞血進行實驗C、檸檬酸鈉的主要作用是加速血細胞破裂D、DNA不能溶于酒精尤其是冷酒精D防止凝血13.蛙的紅細胞、雞的紅細胞都有細胞核和各種細胞器，哺乳動物成熟的紅細胞沒有細胞核和各種細胞器，它們的呼吸方式是什么?蛙的紅細胞、雞的紅細胞都是正常的細胞,進行的是有氧呼吸.哺乳動物成熟的紅細胞是進行無氧呼吸的。3516.實驗中NaCl的物質的量濃度為2mol／L和0.14mol／L對DNA有何影響?15.在DNA的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是()。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細胞破裂、增大DNA溶解量D.使血細胞破裂、提取含雜質較少的DNAB答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出17.DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成()A.磚紅色B.橘黃色C.紫色D.藍色D

18.DNA在NaCl溶液中的溶解度有兩重性，隨著NaCl溶液濃度的變化而變化。(1)請在下列濃度的NaCl溶液中，選出能使DNA析出最徹底的一種和溶解度最高的一種__________。

A．0.14mol/L

B．2mol/LC．0.15mol/L D．0.3mol/L(2)DNA不溶于酒精，但細胞中的某些物質卻可以溶于酒精溶液，利用這一原理可以__________，可以推測溶于酒精中的可能有_______________

。

36A、B去除雜質某些鹽類、蛋白質、糖類或其他大分子物質3719．(2011·江蘇卷，19)在利用雞血進行“DNA的粗提取與鑒定”

的實驗中，相關敘述正確的是(

)

A．用蒸餾水將NaCl溶液濃度調至0.14mol/L，濾去析出物

B．調節NaCl溶液濃度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分雜質

C．將絲狀物溶解在2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑即呈藍色

D．用菜花替代雞血作為實驗材料，其實驗操作步驟相同解析用蒸餾水將NaCl溶液濃度調至0.14mol/L時，濾取析出物；將絲狀物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺試劑，需沸水浴加熱幾分鐘，才呈藍色；用菜花替代雞血為實驗材料，需要對材料的細胞壁進行處理。調節NaCl溶液濃度改變不同物質在其中的溶解度，加入木瓜蛋白酶分解蛋白質都可以去除部分雜質，故B正確。B

38關于DNA粗提取的實驗材料的選擇，也經過了多次實驗結果的比較，最終選擇雞血做實驗材料的原因是什么？請回答下列問題：（1）雞血中紅細胞

，家雞屬于鳥類，新陳代謝旺盛，因而血液中

細胞數目較多，可以提供豐富的

（2）實驗前由老師制備雞血細胞液供同學們做實驗材料，而不用雞全血，主要原因是（3）生活在牧區的人們，采集羊、牛和馬血比較方便，若他們按實驗要求完成實驗步驟后，結果是

，這是因為

，

但若改用動物肝臟做實驗材料，實驗可以順利進行，這是因為

。（4）若選用動物肝臟做實驗材料，在提取之前，最好增加

程序，使組織細胞更易分離。含有完整的、成形的細胞核紅DNA量，所以一般采用雞血

雞的全血包括血漿和血細胞，血漿中無DNA，全血中除掉血漿后就是濃縮的血細胞液，DNA的相對含量提高了。在實驗中很難提取到DNA哺乳動物成熟的紅細胞中無細胞核，反靠白細胞和淋巴細胞中的少量DNA，在實驗中很難提取到肝細胞中含有細胞核，并且肝組織容易被破壞，有利于DNA的提取若使肝組織易分離，將肝細胞剪碎、研磨是一種簡便易行的方法。39提取細胞核物質：溶解核內DNA：在濾液中加2mol/L的NaCl溶液并攪拌，使染色質中DNA

與蛋白質分離，DNA充分溶解，過濾(除雜質)析出DNA：DNA黏稠物再溶解：在燒杯中用2