雙光束紫外分光光度計(jì)的使用小組組長(zhǎng)：小組成員：實(shí)訓(xùn)時(shí)間：第17周-第19周目錄儀器介紹儀器的基本原理儀器的基本組成部件儀器的主要特點(diǎn)儀器的操作步驟以及注意事項(xiàng)利用紫外分光光度法測(cè)定水中苯酚的含量數(shù)據(jù)的處理儀器的介紹紫外可見分光光度計(jì)是一種歷史悠久，覆蓋面廣，使用很多的分析儀器。在有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、藥品分析、食品檢驗(yàn)、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)、生命科學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域的科研、生產(chǎn)工作中都得到了極其廣泛的應(yīng)用。我們現(xiàn)在介紹的這一部?jī)x器是由北京普析通用儀器有限責(zé)任公司，它具有出色的技術(shù)指標(biāo)和穩(wěn)定可靠的工作特征，友好直觀的顯示界面，流暢的人機(jī)對(duì)話操作，成功實(shí)現(xiàn)了超高精度和可靠性測(cè)量的嚴(yán)格要求，能極大地滿足最專業(yè)用戶分析工作需要。

雙光束分光光度計(jì)的基本原理從光源中發(fā)出的光經(jīng)過單色器后被一個(gè)旋轉(zhuǎn)的反射鏡（即切光器）分為強(qiáng)度相同的兩束光，分別通過參比溶液和樣品溶液。利用另一個(gè)與前一個(gè)切光器同步的切光器，使兩束光在不同時(shí)間交替的照在同一個(gè)檢測(cè)器上，通過一個(gè)同步信號(hào)發(fā)生器對(duì)來自兩個(gè)光束的信號(hào)加以比較，并將兩個(gè)信號(hào)的比值經(jīng)過對(duì)后轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的吸光度值。如下圖所示：儀器的基本組成部件紫外分光光度計(jì)都是由光源、單色器、樣品吸收池、檢測(cè)器和信號(hào)顯示系統(tǒng)五大部件組成光源單色器樣品吸收池檢測(cè)器信號(hào)顯示系統(tǒng)光源光源的作用是供給符合要求的入射光。分光光度計(jì)對(duì)光源的要求是：在使用波長(zhǎng)范圍內(nèi)提供連續(xù)的光譜，光強(qiáng)應(yīng)足夠大，有良好的穩(wěn)定性，使用壽命長(zhǎng)。光源一般分為可見光光源和紫外光光源。可見光光源常用鎢絲燈，并且需要采用穩(wěn)壓電源供電或者是12V的直流電供電。紫外光光源此類多為氣體放電光源，應(yīng)用最多的是氫燈及同位素氘燈。單色器單色器的作用是把光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解成單色光，并能準(zhǔn)確方便地“取出”所需要的某一波長(zhǎng)的光，它是分光光度計(jì)的心臟部分。單色器主要是由狹縫、色散元件和透鏡系統(tǒng)組成。其中最為關(guān)鍵的是色散元件。它是由棱鏡和反射光柵或兩者的組合。吸收池吸收池又叫比色皿，是用于盛放待測(cè)溶液和決定透光液層厚度的器件。根據(jù)光學(xué)透光面的材質(zhì)，吸收池有玻璃吸收池和石英吸收池兩種。前者用于可見光光區(qū)測(cè)定，紫外光區(qū)則用石英吸收池。在使用吸收池的時(shí)候必須注意以下幾點(diǎn)：拿取吸收池時(shí)，不可接觸光學(xué)面；不可將光學(xué)面與硬物或贓物接觸；不能再吸收池中長(zhǎng)時(shí)間盛放含有腐蝕玻璃的物質(zhì)；吸收池使用之后應(yīng)立即清洗干凈；不得在火焰或電爐上面進(jìn)行加熱或烘烤吸收池。檢測(cè)器檢測(cè)器又稱接收器，其作用是對(duì)透過吸收池的光做出響應(yīng)，并把它轉(zhuǎn)變成電信號(hào)輸出，其輸出電信號(hào)大小與透過光的強(qiáng)度成正比。作為檢測(cè)器，對(duì)光電轉(zhuǎn)化器的要求是：光電轉(zhuǎn)換有恒定的函數(shù)關(guān)系，響應(yīng)靈敏度要高、速度要快，噪聲低、穩(wěn)定性高，產(chǎn)生的電信號(hào)易于檢測(cè)放大等。信號(hào)顯示器由檢測(cè)器產(chǎn)生的電信號(hào)，經(jīng)放大等處理后，用一定方式顯示出來，以便于計(jì)算和記錄。信號(hào)顯示器分為兩類：以檢流計(jì)或微安表為指示儀表；數(shù)字顯示和自動(dòng)記錄型裝置。數(shù)據(jù)顯示裝置方便、準(zhǔn)確，避免了人為讀數(shù)錯(cuò)誤，而且還可以連續(xù)數(shù)據(jù)處理裝置，能自動(dòng)繪制工作曲線，計(jì)算分析結(jié)果并打印報(bào)告，實(shí)現(xiàn)分析自動(dòng)化儀器的主要特點(diǎn)優(yōu)良的光學(xué)系統(tǒng)，先進(jìn)的電子學(xué)系統(tǒng)，保證了0.015%T的低雜散光。采用進(jìn)口全息光柵，進(jìn)一步降低儀器的雜散光。，使儀器分析更加準(zhǔn)確。雙光束動(dòng)態(tài)反饋比例記錄測(cè)光系統(tǒng)保證了基線穩(wěn)定性。光柵、氘燈、光電倍增管等關(guān)鍵器件均用進(jìn)口件，保證優(yōu)良性能和長(zhǎng)壽命。獨(dú)特的插座式鎢燈和氘燈，換燈時(shí)免去光學(xué)調(diào)試。有豐富的定量分析軟件和光譜掃描及處理軟件。有蠕動(dòng)進(jìn)樣器、超微量池架、恒溫池架、光學(xué)積分球、鏡面反射、光纖附件和比色皿系列等大量用戶可選專用附件，使儀器的應(yīng)用范圍大大擴(kuò)展?；赪INDOWS環(huán)境設(shè)計(jì)的UVWin中文操作軟件,提供了豐富的儀器控制和操作功能，充分利用了現(xiàn)代先進(jìn)的計(jì)算機(jī)技術(shù)，提高工作效率。儀器的操作步驟一、開機(jī)打開穩(wěn)壓電源，等5-10秒，穩(wěn)壓電源穩(wěn)定后依次打開打印機(jī)、計(jì)算機(jī)，等待計(jì)算機(jī)正常進(jìn)入到桌面后，再打開儀器主機(jī)電源。二、儀器初始化打開儀器主機(jī)電源后，確定樣品池內(nèi)沒有擋光物（干燥袋或比色皿等）。雙擊桌面的“紫外軟件”圖標(biāo)，（或點(diǎn)擊“開始”菜單，選擇“程序”，找到“Uvwin5紫外軟件”，選擇“Uvwin5紫外軟件”）；等待儀器進(jìn)行初始化，每一項(xiàng)檢查“正確”后進(jìn)行測(cè)量。

三、測(cè)量

1.正確放入比色皿：TU-1901儀器是雙光束分光光度計(jì)，要在兩個(gè)樣品池內(nèi)都放入空白溶液（或參比溶液）進(jìn)行空白校正。然后只取出外側(cè)的比色皿，放入測(cè)量的樣品進(jìn)行讀數(shù)。(備注：樣品池內(nèi)側(cè)的參比溶液在測(cè)量中不能取出，除非空白溶液改變或測(cè)量波長(zhǎng)改變才拿出重新進(jìn)行空白校正。)2.選擇測(cè)量功能：Uvwin5紫外軟件提供了豐富的測(cè)量功能，根據(jù)需要在“工作室”內(nèi)選擇所需要的測(cè)量方式。

附：測(cè)量方式的簡(jiǎn)介光度測(cè)量：可以做單個(gè)波長(zhǎng)或多個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度（或透過率）測(cè)量。光譜掃描：主要測(cè)量樣品的圖譜做定性分析，即尋找測(cè)量樣品的最大吸收峰。定量測(cè)定：主要通過測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)樣品自動(dòng)建立工作曲線，來測(cè)量樣品的濃度。時(shí)間掃描：主要測(cè)量樣品在一定波長(zhǎng)下隨時(shí)間的變化曲線。也稱動(dòng)力學(xué)測(cè)量。3.設(shè)置參數(shù)選擇好測(cè)量方式后，直接按F4，（或點(diǎn)擊“測(cè)量”，在下拉菜單中選擇“參數(shù)設(shè)置”）進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置界面。主要設(shè)置測(cè)量波長(zhǎng)。設(shè)置完成后一定單擊“確定”，完成設(shè)置。4.空白校正正確放入空白溶液后，點(diǎn)擊“校零”（在光譜掃描功能下是“基線”）鍵進(jìn)行空白校正。5.讀數(shù)空白校正完成后，正確放入樣品，點(diǎn)擊“開始”鍵（或按F9）進(jìn)行測(cè)量。四、完成測(cè)量完成后根據(jù)需要保存或打印測(cè)量數(shù)據(jù)。退出紫外程序后如果不保存數(shù)據(jù)將清除。五、關(guān)機(jī)一定要取出樣品池內(nèi)的所有比色皿，關(guān)閉Uvwin5紫外軟件。退出紫外操作系統(tǒng)后，依次關(guān)掉主機(jī)、計(jì)算機(jī)、打印機(jī)電源。最后關(guān)閉穩(wěn)壓電源。注意事項(xiàng)：本儀器位精密電子儀器，切忌帶電插拔電源線及連接電纜，誤操作有可能損壞儀器及計(jì)算機(jī)。儀器電壓與實(shí)驗(yàn)室電壓相匹配（本次電源電壓為220V，50HZ交流電），最好配置交流穩(wěn)壓器功率不小于500VA，電源盒應(yīng)該有地線并保證儀器良好接地。所用的比色皿必須配對(duì)要清洗干凈，否則會(huì)給測(cè)量帶來較大的誤差。TU-1901雙光速紫外可見分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室常用精密儀器，為提高儀器工作質(zhì)量，及延長(zhǎng)儀器的使用壽命，應(yīng)按住那個(gè)在合適的工作場(chǎng)所，注意以下幾點(diǎn)：避開高溫高濕，在室溫15—35度、濕度45—80%的條件下使用。如果室溫在30度以上，請(qǐng)?jiān)贊穸葹?0%以下使用。儀器應(yīng)置于穩(wěn)固的工作臺(tái)上，不應(yīng)該有強(qiáng)震動(dòng)源。室內(nèi)無強(qiáng)電磁干擾源及有毒有害氣體。紫外分光光度法測(cè)定水中苯酚的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)紫外分光光度法的基本原理及定量分析方法。

2.掌握紫外-可見分光光譜儀的基本結(jié)構(gòu)和一般操作。二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

稱取0.1000g分析純苯酚，用蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中定容，移取5.00mL于另一100mL容量瓶中，用蒸餾水定容，置于冰箱中保存，此溶液含苯酚50ug/mL。

2.最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定移取苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00mL于25mL容量瓶中，定容，搖勻，取適量倒入石英比色皿中，以蒸餾水為參比溶液，在波長(zhǎng)200~400nm范圍類進(jìn)行掃描，得到吸收曲線，由吸收曲線確定最大吸收波長(zhǎng)。3.標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品的測(cè)定在6個(gè)25mL容量瓶中，分別加入0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL的苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水定容。在λmax處測(cè)定各種溶液的吸光度值，同時(shí)測(cè)定含苯酚水樣（調(diào)整至合適濃度且溶液澄清）的吸光度值，由儀