培養液中酵母菌種群數量的變化當前第1頁\共有27頁\編于星期三\22點探究：培養液中酵母菌種群數量的變化目的要求1、學習利用血球計數板進行微生物計數的方法2、實驗探究培養液中酵母菌種群數量的變化3、注意樣方法的應用4、體會影響種群數量變化的因素當前第2頁\共有27頁\編于星期三\22點1、酵母菌的繁殖方式主要是:2、酵母菌的呼吸方式是:兼性厭氧(可進行有氧呼吸和無氧呼吸)回顧思考:出芽生殖3、酵母菌的培養條件要注意那些問題?比如要用適宜的溫度培養,調節好PH值,溶氧量的控制等。當前第3頁\共有27頁\編于星期三\22點一、血球計數板當前第4頁\共有27頁\編于星期三\22點1、血球計數板的結構

血球計數板是一種專門用于計算較大單細胞微生物數量的儀器，由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四條下凹的槽，構成三個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面刻有一個方格網。當前第5頁\共有27頁\編于星期三\22點大方格中方格小方格當前第6頁\共有27頁\編于星期三\22點

方格網上刻有9個大方格，其中只有中間的一個大方格為計數室，供微生物計數用。

大方格的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，即1mm×1mm×0.1mm，其容積為0.1mm3；大方格的長和寬各為2mm，深度為0.1mm，即2mm×2mm×0.1mm，其容積為0.4mm3當前第7頁\共有27頁\編于星期三\22點計數室通常也有兩種規格16×25型：即大方格內分為16中格，每一中格又分為25小格25×16型：即大方格內分為25中格，每一中格又分為16小格。

不管計數室是哪一種構造，其每一大方格都是由16×25=25×16=400個小方格組成。

當前第8頁\共有27頁\編于星期三\22點2、計數16×25型：

一般取四角的四個中方格（100個小方格）計數25×16型：一般計數四個角和中央的五個中方格（80個小方格）的細胞數。

當前第9頁\共有27頁\編于星期三\22點3、計算

以1mm×1mm×0.1mm型為例計數室容積為0.1mm3，則每個小方格的容積為1/4000mm3

。100個小方格細胞總數/100×400×10000×稀釋倍數

酵母細胞個數／1mL=80個小方格細胞總數/80×400×10000×稀釋倍數

當前第10頁\共有27頁\編于星期三\22點例1通常用血球計數板對培養液中酵母菌進行計數，若計數室為1mm×1mm×0.1mm方格，由400個小方格組成。若多次重復計數后，算得每個小方格中平均有5個酵母菌，則10mL該培養液中酵母菌總數有

個。2×108當前第11頁\共有27頁\編于星期三\22點例2檢測員將1mL水樣稀釋10倍后，用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍藻的數量；將蓋玻片放在計數室上，用吸管吸取少許培養液使其自行滲入計數室，并用濾紙吸去多余液體。已知每個計數室由25×16＝400個小格組成，容納液體的總體積為0．1mm3。現觀察到圖中該計數室所示a、b、c、d、e5個中格80個小格內共有藍藻n個，則上述水樣中約有藍藻

個／mL。5n×105當前第12頁\共有27頁\編于星期三\22點4、血球計數板的使用方法步驟③計數：稍待片刻（約5min），待酵母菌細胞全部沉降到計數室底部后，將計數板放在載物臺的中央，先在低倍鏡下找到計數室所在位置后，再轉換高倍鏡觀察、計數并記錄。①鏡檢計數室：在加樣前，先對計數板的計數室進行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數。②加樣品：將清潔干燥的血球計數板的計數室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養液自行緩緩滲入，一次性充滿計數室，防止產生氣泡，充入細胞懸液的量以不超過計數室臺面與蓋玻片之間的矩形邊緣為宜。多余培養液可用濾紙吸去。當前第13頁\共有27頁\編于星期三\22點5、血球計數板的使用注意事項①從試管中吸出培養液進行計數之前，要將試管輕輕震蕩幾下，這樣使酵母菌分布均勻，防止酵母凝聚沉淀，提高計數的代表性和準確性，求得的培養液中的酵母菌數量誤差小。②如果一個小方格內酵母菌過多，難以數清，應當對培養液進行稀釋以便于酵母菌的計數。具體方法是：搖勻試管，取1mL酵母菌培養液，加入成倍的無菌水稀釋，稀釋n倍后，再用血球計數板計數，所得數值乘以稀釋倍數。以每小方格內含有4～5個酵母細胞為宜。特別是在培養后期的樣液需要稀釋后計數。當前第14頁\共有27頁\編于星期三\22點③對于壓在方格界線上的酵母菌應當計數同側相鄰兩邊上的菌體數，一般可采取“數上線不數下線，數左線不數右線”的原則處理，另兩邊不計數。④對每個樣品可計數三次，再取其平均值。⑤計數時應不時調節焦距，才能觀察到不同深度的菌體。

⑥血球計數板使用后，用自來水沖洗，切勿用硬物洗刷，以免損壞網格。

當前第15頁\共有27頁\編于星期三\22點1、研究過程測定定期取樣測細胞數目2、測定方法測重量濕重干重（一）研究方法二、微生物的種群數量變化在恒定容積液體培養基中培養當前第16頁\共有27頁\編于星期三\22點細菌數目的對數時間01234細菌的生長曲線（二）種群數量變化規律1：調整期2：對數期3：穩定期4：衰亡期當前第17頁\共有27頁\編于星期三\22點細菌數目的對數時間01234細菌的生長速率時間01234細菌生長曲線細菌生長速率曲線該怎樣畫呢？當前第18頁\共有27頁\編于星期三\22點目的：使微生物的生長較長時間的維持在穩定期。優點：縮短了培養周期,提高設備利用率,便于自動化管理。連續培養當前第19頁\共有27頁\編于星期三\22點例2（08江蘇卷）為研究酵母菌種群密度的動態變化，某同學按下表所列條件進行了A、B、C和D共4組實驗，用1000mL錐形瓶作為培養器皿，棉塞封口，在25℃下靜置培養，其他實驗條件均相同，定時用血球計數板計數。根據實驗結果繪出的酵母菌種群密度變化曲線圖如下，請分析回答以下問題。1）圖中曲線①、②和③分別是_____組、______組和______組的結果。D

BA2）B組和A組的實驗結果不同的原因是B組____________。培養液較多，與空氣接觸面積較小，故供氧較少

3）D組和B組的實驗結果不同的原因是D組____________。葡萄糖濃度較低，故營養物供應較少

4）在整個實驗過程中，直接從靜置的培養瓶中取培養原液計數的做法是錯誤的，正確的方法是

和

。搖勻培養液后再取樣培養后期的樣液稀釋后再計數5）實驗結束后，用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計數板的做法是錯誤的，正確的方法是

浸泡和沖洗

當前第20頁\共有27頁\編于星期三\22點細菌細胞數目的測定待測樣品等量的已知含量的紅細胞混勻涂抹紅細胞細菌測定：紅細胞數目細菌數目計算單位體積內的細菌數目當前第21頁\共有27頁\編于星期三\22點細菌重量的測定取樣：取一定體積的培養液離心分離、反復洗滌稱濕重烘干稱干重當前第22頁\共有27頁\編于星期三\22點

1、調整期采用對數期的菌體作為菌種、增加接種量、代謝活躍；體積增大；分裂遲緩。適應新環境1）主要特征：2）原因：3）人工控制（縮短調整期）：當前第23頁\共有27頁\編于星期三\22點個體：代謝旺盛；分裂最快；個體形態和生理特征穩定。群體：繁殖＞死亡1）主要特征：2）應用：作生產菌種，科研材料。2、對數期當前第24頁\共有27頁\編于星期三\22點3、穩定期個體：積累有害代謝產物；有些出現芽孢。群體：活菌數量最多；繁殖＝死亡1）主要特征：2）原因：生存條件相對惡化：營養物質消耗；有害代謝產物積累；PH改變種內斗爭最激烈。當前第25頁\共有27頁\編于星期三\22點個體：細胞形態多樣群體：活菌數急劇下降；繁殖＜死亡1）主要特征：2）原因：生存環境極度惡化（營養物質消耗、有害代謝