課題2土壤中分解尿素細菌分離與計數學習目標：利用選擇培養基分離細菌，利用相關技術處理生產生活中關于微生物計數。重點與難點：對土樣選取和選擇培養基配制、對分解尿素細菌計數自主預習課題背景尿素是一個主要氮肥，農作物_________（能，不能）直接吸收利用，而是首先經過土壤中細菌將尿素分解為，這是因為細菌能合成。2、科學家能從熱泉中把耐熱細菌篩選出來是因為這么也適適用于試驗室中微生物篩選，原理是。點評：生物適應一定環境，環境對生物具備選擇作用。所以經過配制選擇培養基、控制培養條件等選擇目標微生物。〖思索1〗在該培養基配方中，為微生物生長提供碳源是，提供氮源是，瓊脂作用是。〖思索2〗該培養基對微生物（具備，不具備）選擇作用。假如具備，其選擇機制是。3、在統計菌落數目時，慣用來統計樣品中活菌數目標方法是。除此之外，也是測定微生物數量慣用方法。【補充】顯微鏡直接計數是測定微生物方法。公式：觀察到紅細胞平均數∶觀察到細菌平均數＝紅細胞含量∶細菌含量4、采取稀釋涂布平板法統計菌落數目時，培養基表面生長一個菌落，起源于。經過統計，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了確保結果準確，通常選擇菌落數在平板進行計數。〖思索3〗從平板上菌落數推測出每克樣品中菌落數計算方法是。〖思索4〗利用稀釋涂布平板法成功統計菌落數目標關鍵是。〖思索5〗第位同學結果靠近真實值。你認為這兩位同學試驗需要改進操作是。5、統計菌落數比活菌實際數目。這是因為當兩個或多個細胞在一起時，平板上觀察到只是菌落。所以，統計結果通慣用來表示。6、設置對照主要目標是。7、對照試驗是指除了條件外，其余條件都試驗。滿足該條件稱為，未滿足該條件稱為組。〖思索6〗請設計本試驗對照試驗組：。二、試驗設計1、試驗設計內容包含、、和等。2、依照圖示2－7填寫以下試驗流程：3、土壤微生物主要分布在距地表cm近性土壤中，約為細菌。4、分離不一樣微生物采取不一樣稀釋度，其原因是，其目標是確保取得平板。細菌稀釋度為，放線菌稀釋度為，真菌稀釋度為。5、培養不一樣微生物往往需要不一樣培養溫度。細菌通常在℃培養1～2d，放線菌通常在℃培養5～7d，霉菌通常在℃溫度下培養3～4d。6、在菌落計數時，每隔h統計一次菌落數目。選取時統計作為結果，以預防因而造成遺漏菌落數目。點評：菌種中有些菌體增殖快，有些菌體增值慢，所以培養時間要充分，使得每個菌體都能形成肉眼可觀察到菌落。7、菌落特征包含等方面。〖思索7〗土壤微生物種類最多、數量最大原因8、試驗過程1）取土樣用小鐵鏟和盛土樣信封在使用前都要。2）應在旁稱取土壤g。將稱好土樣倒入盛有mL無菌水中，塞好棉塞。3）在稀釋土壤溶液過程中，每一步都要在旁進行。4）試驗時要對作好標識。注明等。5）為了提升效率，在操作時愈加有條不紊，應該。〖思索8〗在研究未知微生物時務必規范操作，以防被感染，試驗后一定要洗手。三．結果分析與評價1、對分離菌種作深入判定，還需要借助方法。2、在細菌分解尿素化學反應中，細菌合成將尿素分解成了。氨會使培養基堿性，PH。所以，我們能夠經過檢測培養基改變來判斷該化學反應是否發生。3、在以為唯一氮源培養基中加入指示劑。培養某種細菌后，假如PH升高，指示劑將變，說明該細菌能夠。〖思索9〗測定飲水中大腸桿菌數量方法是將一定體積水用細菌過濾器過濾后，將濾膜放到培養基上培養，大腸桿菌菌落展現，經過記述得出水樣中大腸桿菌數量。你認為在該試驗中最少應取個水樣。（三）課堂總結、點評試驗方案試驗方案土壤中尿素分解菌分離與計數分離篩選微生物原理有利于目標菌株生長抑制或阻止其余微生物生長人為條件微生物計數方法與原理稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數對照設置與重復設置試驗設計試驗操作結果與分析參考答案：一、基礎知識1．不能氨和CO2脲酶2．熱泉高溫條件淘汰了絕大多數微生物原理是：人為提供有利于目標菌株生長條件（包含營養、溫度、PH等），同時抑制或阻止其余微生物生長。〖思索1〗葡萄糖尿素凝固劑〖思索2〗具備只有能夠以尿素作為氮源微生物才能在該培養基上生長3．稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數4．樣品稀釋液中一個活菌平板上菌落數30～300〖思索3〗（平均菌落數÷涂布稀釋液體積）×稀釋倍數〖思索4〗恰當稀釋度〖思索5〗二第一位同學需設置重復試驗組；第二位同學統計三個菌落數相差太大，說明操作有誤，需重新試驗5．低一個菌落數6．排除試驗組中非測試原因對試驗結果影響，提升試驗結果可信度7．被測試相同對照組試驗〖思索6〗方案1：其余同學用A同學土樣進行試驗。方案2：A同學以不接種培養基作為空白對照。二．試驗設計1．試驗方案、材料用具、實施步驟和時間安排等。2．依照圖示2－7填寫以下試驗流程：菌落計數菌落計數配制土壤溶液系列稀釋涂布平板與培養3．3～8cm近中70％～80％4．不一樣微生物在土壤中含量不一樣，菌落數在30～300之間、適于計數104、105、106，103、104、105，102、103、104。5．30～3725～2825～286．24菌落數目穩定培養時間不足7．形狀、大小、隆起程度、顏色〖思索7〗土壤中營養物質含量豐富，環境條件適宜等。8．試驗過程1）滅菌。2）火焰10g。90mL錐形瓶3）火焰4）培養皿培養基類型、培養時間、稀釋度、培養物5）事先規劃時間。〖思索8〗致病微生物三．結果分析與評價1．生物化學2．脲酶氨增強升高pH3．尿素酚紅紅分解尿素〖思索9〗伊紅美藍黑三四、自測1、（·全國1高考）以下是與微生物培養關于問題，請回答：某細菌固體培養基組成成份是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸餾水，其中凝固劑是，碳源是，氮源是。已知只有能合成脲酶細菌才能在該培養基上生長，故該培養基屬于培養基。按照化學成份分類，該培養基屬于＿培養基。從同化作用類型上看，用該培養基培養細菌屬于。2．某小組同學為了調查湖水中細菌污染情況而進行了試驗。試驗包含制備培養基、滅菌、接種及培養、菌落觀察計數。請回答與此試驗相關問題。（1）培養基中含有蛋白胨、淀粉分別為細菌培養提供了氮源和。除此之外，培養基還必須含有基本成份是和。（2）對培養基進行滅菌，應該采取方法是。（3）為了盡快觀察到細菌培養試驗結果，應將接種了湖水樣品平板置于中培養，培養溫度設定在37℃。要使該試驗所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接種作為對照進行試驗。（4）培養20小時后，觀察到平板上有形態和顏色不一樣菌落，這說明湖水樣品中有種細菌。通常說來，菌落總數越多，湖水遭受細菌污染程度越。（5）假如提升培養基中NaCl濃度，能夠用于篩選耐細菌，這種培養基（按功效分）被稱為。3.下列圖是生物興趣小組為研究“某品牌酸奶中乳酸菌種類及其耐藥情況”而制訂流程圖。請分析回答：（1）與酵母菌相比，乳酸菌在結構上主要區分是。（2）本研究使用細菌培養基中尤其加入了一定量碳酸鈣，乳酸菌在（生理過程）中產生乳酸能與不溶性碳酸鈣生成可溶性乳酸鈣，從而在菌落周圍形成溶鈣圈。從物理形態分析，本研究使用培養基屬于（類型）。分離方法可用。（3）在利用高壓蒸汽滅菌鍋對培養基滅菌時，鍋內水加熱煮沸后，必須，以確保鍋內氣壓上升，達成121℃。滅菌后培養基應適當冷卻后，在（4）請完善“檢測乳酸菌對青霉素、四環素耐藥性”試驗操作步驟：步驟1：分別取、四環素、加入三組無菌培養皿中，再加入滅菌并冷卻到50℃步驟2：向三組培養基中分別接種待檢測乳酸菌菌種。步驟3：將接種后三組培養基和一個都置于適宜溫度等條件下培養若干天，觀察比較培養基中菌落生長情況。4.Ⅰ.白僵菌高孢粉是國家林業局推廣高效生物殺蟲劑之一，應用于多個林木和農作物害蟲防治。白僵菌分生孢子在寄主表皮、氣孔或消化道上，遇適宜條件開始萌發，生出芽管。同時產生脂肪酶、蛋白酶、幾丁質酶等溶解昆蟲表皮，經過芽管入侵蟲體，在蟲體內生長繁殖，消耗寄主體內養分，產生各種毒素，形成大量菌絲和孢子，充滿蟲體全身。請依照上述材料回答下面問題。(1)從自然菌樣中篩選較理想生產用菌種通常步驟是：采集菌樣→富集培養→→性能測定。白僵菌菌樣應從中采集。(2)分離白僵菌菌種培養基屬于培養基。在配制白僵菌培養基時常加入蔗糖、硫酸銨、硝酸鉀等成份，蔗糖屬于(營養物質)。Ⅱ.自然界中微生物往往是混雜生長。人們在研究微生物時通常要將它們分離提純，然后進行數量測定。下面是對大腸桿菌進行數量測定試驗，請回答關于問題。步驟以下：(1)制備稀釋倍數為102、103、104、105、106系列稀釋液。(2)用“稀釋涂布平板法”接種樣品。(3)適宜溫度下培養。①為測定大腸桿菌數，在對應稀釋倍數為106培養基中，得到以下幾個統計結果，正確可信是A．一個平板，統計菌落數是23B．兩個平板，統計菌落數是22和26，取平均值24C．三個平板，統計菌落數分別為21、5和52，取平均值26D．四個平板，統計菌落數分別是21、30、24和25，取平均值25②一同學在對應稀釋倍數為106培養基中，測得平板上菌落數平均值為23.4，那么每毫升樣品中菌落數是(涂布平板時所用稀釋液體積為0.2mL)。③用這種方法測定密度，實際活菌數量要比測得數量。④某同學在測定大腸桿菌密度時發覺，在培養基上還有其余雜菌菌落，能否必定該大腸桿菌品系被污染了？。5.[高考生物——選修1：生物技術實踐]（15分）為了調查某河流水質情況，某研究小組測定了該河流水樣中細菌含量，并進行了細菌分離等工作。回答以下問題：（1）該小組采取稀釋涂布平板法檢測水樣中細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后空白平板先行培養了一段時間，這么做目標是__________________________________________；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經適當培養后，3個平板上菌落數分別為39、38和37,據此可得出每升水樣中活菌數為___________。（2）該小組采取平板劃線法分離水樣中細菌，操作時，接種環經過___________滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次劃線末端開始劃線，這么做目標是___________。（3）示意圖A和B中，________表示是用稀釋涂布平板法接種培養后得到結果。（4）該小組將得到菌株接種到液體培養基中并混勻，一部分進行靜置培養，另一部分進行振蕩培養，結果發覺：振蕩培養細菌比靜置培養細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養能提升培養液中________含量，同時可使菌體與培養液充分接觸，提升________利用率。參考答案：1、瓊脂葡萄糖尿素選擇合成異養型2、（1）碳源無機鹽水（2）高壓蒸汽滅菌（3）恒溫培養箱無菌水（4）多高（5）鹽（或NaCl）選擇性培養基3.（1）細胞內沒有核膜包被細胞核（或“沒有核膜”）（2）無氧呼吸固體培養基平板劃線或稀釋涂布平板法（3）將鍋內冷空氣徹底排除酒精燈火焰（4）步驟1：等量青霉素、無菌水步驟3：未接種培養基4．(1)純種分離感病昆蟲(2)選擇碳源①D②1.17×108③多④不能5、（1）檢測培養基平板滅菌是否合格 3.8×107（2）灼燒 將聚集菌體逐步稀釋方便取得單個菌落（3）B（4）溶解氧 營養物質1、以下能選擇出分解尿素細菌培養基是()A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、瓊脂、水B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、瓊脂、水C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、瓊脂、水D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水；2、某同學在稀釋倍數為106培養基中測得平板上菌落數平均值為234，那么每克樣品中菌落數是(涂布平板時所用稀釋液體積為0.1mL)()A．2.34×108B．2.34×109C．234D．23.43、在做分離分解尿素細菌試驗時，A同學從對應106培養基上篩選出大約150個菌落，而其余同學只選擇出大約50個菌落。A同學結果產生原因可能有()①因為土樣不一樣②因為培養基污染③因為操作失誤④沒有設置對照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④4、關于土壤取樣敘述錯誤是()A．土壤取樣，應選取肥沃、濕潤土壤B．先鏟去表層土3cm左右，再取樣C．取樣用小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌D．應在火焰旁稱取土壤5、以下關于從土壤中分離細菌操作步驟中，正確是()①土壤取樣②稱取10g土壤取出加入盛有90mL無菌水錐形瓶中③吸收0.1mL進行平板涂布④依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度A．①→②→③→④B．①