第五章非切片法的制作第一節整體制片法第二節涂片法*第三節分離法第四節鋪片法第五節滴片法*第六節壓片法自學染色：甲基綠、碘液、1%美蘭第一節整體制片法二、半永久和永久性制片一、臨時制片第五章1.甘油封片法5%甘油標本蒸發2-3天

載片

怕壓、易碎標本：2.甘油膠封片法

避免蒸發或流動：最適合于柔軟易碎材料。材料固定、水洗5%甘油2h10%甘油1h

甘油膠封片石蠟或漆封邊

玻璃絲

（直徑0.2-0.5mm

）第一節整體制片法第五章3.甘油或甘油膠-樹膠雙封片法材料要觀察的面朝向大蓋片

蓋玻片載玻片蓋玻片的小片朝下封于載片上

第五章第一節整體制片法甘油或甘油膠封片中性樹膠封片4.聚乙烯醇封片法

新鮮和固定的標本

小而透明的標本用木素粉紅或酸性品紅染色

乳酸和石炭酸等量混合劑配4%、5%、10%

甲殼動物、單殖吸蟲、寄生線蟲、棘頭蟲及動物中粘孢子

單殖吸蟲棘頭蟲第五章第一節整體制片法寄生線蟲魚體表粘孢子蟲棘頭蟲

30%Alc→40%Alc→50%Alc→60%Alc→70%Alc

→80%Alc→95%

Alc→100%Alc→100%Alc→純酒精/二甲苯2：1→1：1→1：2→純二甲苯（1）原生動物(或小型浮游生物)整體封片法材料特點：在液體培養基中培養或制備成的懸液棄培養液各級酒精脫水、二甲苯透明封片固定液離心離心中性樹膠棄上清液第一節整體制片法第五章5.樹膠封片法

離心機的轉速紐蟲肝片吸蟲肝片吸蟲華枝睪吸蟲材料特點：身體扁平如葉片狀，固定時易卷縮用薄荷冰/水合氯醛于7%生理鹽水麻醉(2)吸蟲整體封片第五章第一節整體制片法70%Alc蟲體70%Alc固定2~12h硼砂洋紅液染蟲體3~10h70%Alc沖洗常規脫水、透明、封片濾紙載片第五章第一節整體制片法(3)瓊脂定位，藪枝蟲(或水螅體、卵胚)整體封片水螅材料特點：易收縮、需要定位薄荷冰麻醉10%甲醛固定稀釋的蘇木精/硼砂洋紅染色酸酒精分色用瓊脂定位于載片上常規脫水、透明、封片第一節藪枝蟲第五章第一節整體制片法聚縮蟲第二節涂片法

將一些不需切片的動植物的組織細胞或體液組織（如動物的血液、精液、骨髓等）用機械的方法使其均勻地攤在載片上，再進行固定、染色、觀察。對玻片要求嚴格洗液12h~24h流水沖至中性95%Alc第五章重鉻酸鉀20g，蒸餾水40mL，加熱溶解，稍冷，加濃硫酸350mL

一、人血液涂片BloodSmear2.涂片方法：1.取血：第二節涂片法第五章

注意：滴血后馬上涂片推片速度、角度大小與血膜厚薄有關一張載片只能涂1次用來推片的載片邊緣只能用1次①血滴于一端1/3處30-40°用力均勻、勻速血涂片自然晾干②③④⑤（1）Wright染色法:（2）Giemsa染色法瑞氏粉含曙紅和亞甲藍吉氏粉含曙紅和天青對酸堿敏感！天青加熱會消失！第二節涂片法第五章3.染色瑞士粉0.1g，甲醇50mL，充分溶解。將染色液滴加到血膜上，染1~3min，再滴加等量蒸流水染2~8min，蒸餾水沖洗，干燥后封片吉士粉0.38g，甘油12.5mL，甲醇37.5mL。甲醇和甘油60℃，配制成吉姆薩原液。使用時0.3mL加蒸餾水10mL。血液涂片用甲醇固定5~10min，染液染15~30min，重蒸水或PBS洗示血涂片不同部位的染色效果人血涂片染色結果12345嗜中性白細胞

小淋巴細胞

嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞單核細胞蟾蜍血鳥血魚血抗凝劑第二節涂片法第五章二、對蝦血淋巴涂片1、血淋巴的采集采血部位的選擇：心臟或血竇一次性大量采血或做某些理化性質分析時從心臟取血。要保持蝦的活性從血竇取血。據對蝦體長選7~9號注射頭Wright-Giemsa雙染色4%甲醛溶液固定1min50%甲醇溶液固定1min第二節涂片法第五章二、對蝦血淋巴涂片

注意：血竇采血的部位應一致血竇采血，采血量不能過大大量采血時，在第1次抽血后停1min，再抽1次。中國對蝦血涂片，Giemsa染色第二節第二節涂片法第五章三、貝類血淋巴涂片（補充）1、血淋巴的采集：閉殼肌注射器中加抗凝劑或固定液Baker’甲醛鈣;0.05mol/LTris-HCl緩沖液;EM（電鏡）(含2%多聚甲醛，2.5%戊二醛，2%NaCl,2mmol/L氯化鈣，用0.2mol/L二甲砷酸鈉緩沖液配制，pH7.4)，按1：1抽取血淋巴;Alsever’s液3：1抽取血淋巴。第二節Wright-Giemsa染色酶染色密度梯度分離流式細胞儀分類血細胞第二節涂片法第五章第二節涂片法第五章四、刺參體腔液（體腔細胞）涂片（補充）體腔液的采集：從身體腹面或右側用注射器抽取體腔液注射器（25號針頭）中吸入等體積抗凝劑或固定液EM固定液；檸檬酸鈉：3.8mg／mL肝素鈉：0.2-0.6mg／mL草酸鈉：1.0-1.5mg／mL刺參體腔細胞：小淋巴細胞、吞噬細胞、桑葚細胞和結晶細胞等第三節分離法（自學）借藥物的作用，使組織軟化、組織各組成部分之間的某些結合物質溶解，或用機械的方法，將組織的各個組成部分分離，并使其攤開于玻片上，制成臨時或永久性封片。

如：肌肉纖維或神經纖維分離第五章Lumbo-sacralcordTerminalthreadAtechniqueyouknowfromusinganeedletoseparateouttheconnective-tissuefilumterminalefromthenervouscauda

equinaofdorsal&ventralrootsOntheMICROSCOPESLIDE,withaneedlepointonecanteaseapartindividualnerveormusclefibersfromtheirbundlesinnerveormuscle(Filumterminale)第四節鋪片法（自學）Spread如：皮下結締組織制片法

第五章活體染色和鋪片C.T.鋪片，VerhoeffVanGieson,ToluidineBlue

第五節滴片法以滴片法制作魚類或貝類等的染色體標本。第五章×PHA秋水仙素第五節滴片法第五章PHA刺激48~72小時原理：

外周血小淋巴細胞，通常都處在G1期（或G0期），一般情況下不進行分裂。若在培養液中加入植物血球凝集素（PHA），小淋巴細胞受到刺激可轉化為淋巴母細胞，進入有絲分裂。短期培養后，經秋水仙素處理，低滲和固定，即可得到大量的有絲分裂細胞。注射PHA（植物細胞凝集素）或酵母液注射秋水仙素低滲固定滴片第五節滴片法第五章染色體制片材料的選擇：

分裂程度高

細胞易于分散

含較少的間質和其它嗜堿性物質染色體標本制備程序：一、魚類染色體標本的制備第五節滴片法第五章胚胎(卵裂期或原腸期)，上皮細胞，鰓細胞，腎（頭腎)細胞

1、材料選擇：注射部位殺死魚前8~10h或16~18h,

PHA(8~10μg/g魚體重)或酵母液(0.2~0.5ml/100g魚體重)

殺死魚前4~5h，秋水仙素(3~5μg/g魚體重)取頭腎,制備細胞懸液

0.075mol/LKCl，低滲

加固定液靜置20~30min，重復2-3次

冷滴片Giemsa染色第五節滴片法第五章第五節滴片法第五章二、貝類染色體的制作材料選擇：卵胚、幼體（囊胚期~擔輪幼蟲期）、鰓、生殖細胞（4~8細胞期卵胚）4細胞出現后10~25min，每隔5min處理一批（0.03~0.04%秋水仙素，30min）低滲：25%海水，35℃，30min熱滴片固定：1：1醋酸甲醇，1：3醋酸甲醇染色皺紋盤鮑7%MgSO4或MgCl2麻醉后取鰓活體解剖取鰓50%海水配制的0.04%秋水仙素，30min低滲:25%海水，30min固定：carnoy氏液將鰓放入50%冰醋酸解離，細胞濃度（50~150）104個/ml熱滴片Giemsa染色三、對蝦染色體制片第五節滴片法第五章材料選擇:胚胎和幼體；幼蝦；成蝦時期選精巢、中腸、觸角腺或鰓

原腸期至肢芽期胚胎無節幼體0.02%秋水仙素（海水配)雄蝦注射秋水仙素（1.5μg/g蝦體重),4-6h后取精巢低滲0.3%檸檬酸鈉50%海水低滲20min,0.075mol/LKCl10-20min0.075mol/LKCl固定滴片50%醋酸解離材料：主要選擇分裂旺盛期的組織如：棘皮動物的胚胎、幼蟲，成體的鰓、性腺等，海參采用后期幼蟲、耳狀幼蟲、成體呼吸樹組織等四、棘皮動物染色體標本的制備（補充）第五節滴片法第五章5.固定液及固定時間

總結：影響染色體