精子常規分析與形態學染色

河南省人口和計劃生育科學技術研究院孕前優生健康檢查臨床檢驗操作技術培訓

2021/5/91精液常規檢驗采集：采集前必須禁欲2~7天，采集后立即送檢，存放時間不要超過1小時，運送時溫度與體溫相近。外觀和氣味：正常呈灰白或乳白色，厚稠膠凍狀，液化后呈乳白色半透明狀。精子數量少，精液透明且稀薄；精液中有較多紅細胞，可呈紅褐色；黃色精液見于精液中有較多膿細胞，或服用藥物。量：正常>=2mL，下限是1.5mL，小于1mL，視為異常，見于精囊腺和前列腺病變。2021/5/92液化：室溫正常5~10分鐘液化，20~40分鐘可完全液化，1小時仍不液化應視為異常，一般與缺乏蛋白水解酶有關。粘稠度：精液粘稠度異常可影響精子的活力和穿透力。用吸管吸入精液，滴落精液觀察，粘稠度增加時，精液懸滴可形成>2cm的拉絲。PH值：正常精液PH呈弱堿性，>=7.2（滴PH試紙<30秒）。精液的PH過低，可影響其對陰道酸性環境的調節作用，影響精子活力。亦可能與精囊發育不良有關。2021/5/93精子濃度的參考值下限為：15X106/mL精子總數的參考值下限為：39X106/mL精子密度過低或無精見于：1、睪丸生精功能異常2、輸精管、射精管、精囊存在缺陷3、精索靜脈曲張4、生殖道炎癥5、流行性腮腺炎并發睪丸炎6、絕育手術后7、放射性照射，有害化學物質污染及藥物作用等。2021/5/94精子存活率：活精子數量在精子總數量中所占的比例。伊紅-苯胺黑染色：50uL精液與等體積的染液混勻，等待30秒；采用拉薄技術制成涂片，空氣中干燥，高倍鏡觀察，活精子頭部成白色或淡粉紅色，死精子頭部呈紅色或暗粉紅色。正常參考值：（參考下限是58%）

>=70%（射精后1h）

>=40~50%（射精后3h）

>=20~30%（射精后6h）2021/5/95精子活力：正常精子的活動力，精子向前運動的能力。計數200個精子的分級情況。WHO把精子的活動力分為4級。(5版分3級)d：不動PR：前向運動c：非前向運動NP：非前向運動b：慢速或呆滯的前向運動IM：不活動a：快速向前運動2021/5/96正常為：a級>25%或a+b>50%（5版）的參考值下限是前向運動精子（PR）：32%精子總活力（PR+NP）：40%臨床意義：活力下降、弱精子癥：見于液化不良、粘稠度增高、精液凝集，精子結構異常，內分泌功能異常，精索靜脈曲張等。2021/5/97精子細胞形態學檢查1、正常精子形態：正常在精液中占15%(5版)參考下限為：4%2、畸形精子：頭部形狀、大小異常；體部異常；尾部異常。臨床意義：精子形態異常與生殖系統的感染、外傷、雄激素變化、化學藥物中毒及遺傳因素有關。2021/5/983、生精細胞、精原、初級精母、次級精母、精子細胞。正常時少量，當曲精管的生精能力受到損害時，精液中可出現較多的病理性幼稚細胞。4、其他成分紅細胞（極少）：血精癥、睪丸瘤、前列腺瘤白細胞（<=1X106/mL）：生殖道炎癥癌細胞：輸精管惡性腫瘤2021/5/99人精子形態模式圖頭部：輪廓規則，頂體清楚，頂體帽至少覆蓋頭部表面的1/3。中段：細長，不超過頭寬1/3，輪廓直而規則。尾部：細長，彎曲不卷曲。2021/5/910

正常形態精子的概念把“具備潛在受精能力精子”（亞群）的外觀作為形態正常的標準。人為設定臨界標準，規定“臨界形態精子都是異常”。2021/5/911操作前準備一側有磨砂載玻片蓋玻片（24mmX50mm）10uL移液器及吸頭紗布或紙巾記號筆巴氏染液或Diff染液2021/5/912精液涂片的制備每份新鮮的精液標本應制備兩張或更多的涂片，以防染色發生問題或載玻片破碎。每次取樣前要充分混勻精液。對于未稀釋的精液，采用拉薄技術；對于已洗滌的精液，采用移液管法。涂片前準備：1.用紗布或紙巾擦干凈載玻片的兩面2.用記號筆在載玻片的磨砂處標記上編號、日期。2021/5/913涂片的方法充分混勻待涂片精液標本，根據精子濃度，用移液器去5~10uL的精液滴在載玻片的一端，立即用第二張載玻片的非磨砂端以45°角（角度越小，涂片越薄）沿第一張載玻片的表面移動并接觸精液滴，然后沿載玻片的長軸緩慢拖回拉片（約一秒；速度越快，涂片越厚），制成一張涂片。2021/5/914對于高粘稠或低密度或充滿碎屑精液：稀釋精漿或離心去精漿。方法：取0.2~0.5mL精液，加10mL生理鹽水，800g離心10分鐘，除去大部分上清液，輕輕拍打試管，使精子團重新混懸于剩余的上清液中。必要時可加生理鹽水重復洗滌一次。洗滌后的精子濃度在20-50X106/ml為好。洗滌的目的是減少背景雜質，并減少背景著色。2021/5/915如圖：取5~10uL懸浮液于清潔載玻片上，用滴管使精液在載玻片上展開。然后在400倍光鏡下掃視一下確保精液涂片均勻，400倍下每個視野20-50個精子，并且沒有精子成團或重疊。2021/5/916注意：1.精液標本完全液化，充分混勻；2.快速取樣，使精子沒有時間從混懸液中沉降下來；3.重復取樣前，再次混勻精液標本；4.精液滴在載玻片上，立即涂片，不要放置數秒后再涂片。2021/5/917染色步驟1.精子懸液涂片制備完成后，水平放置，空氣中自然干燥；2.加A液覆蓋組織片室溫反應15秒，將玻片直立吸水紙上除去多余染液；3.加B液覆蓋組織片室溫反應10秒，將玻片直立吸水紙上除去多余染液；4.加C液覆蓋組織片室溫反應15秒，將玻片直立吸水紙上除去多余染液；5.流水中浸洗10~15次以除去多余染液；6.將玻片垂直豎立以去除水分，待完全干燥；7.油鏡下觀察精子形態。2021/5/918結果觀察1.精子頂體區染淡紫色，頂體后區染深紫色，精子體尾區染成淡紅色。2.世界衛生組織（WHO）精子缺陷類型分類如下：2021/5/9192021/5/9201

正常精子形態2021/5/9212小頭梨形頭頂體區>70%頂體后區空泡>2過多殘留胞漿中段粗、彎曲插入雙尾彎曲2021/5/9223圓形頭錐形頭不定形頭大頭針狀頂體區>70%頂體區<40%頂體后區空泡>2中段粗不規則插入2021/5/9234扁平底不規則頭頂體區<40%中段粗不規則插入彎曲2021/5/9245頂體區>70%頂體后區空泡中段彎曲粗、不規則插入尾環狀卷曲、彎曲雙尾2021/5/925精子形態分析2021/5/9266-12021/5/9276-22021/5/9287-12021/5/9297-22021/5/9308-12021/5/9