微生物棉簽擦拭取樣方法及檢驗方法驗證方案文件編號：VP-0}起草人 審核人 批準人 ：

日期 日期 日期 …1、概述微生物進展嚴格把握。GMP對清潔效果進展評價，設備外表微生物限度檢查應符合要求，擦拭取樣優點是能對最難清潔部位直接取樣，通過考察有代表性的最難清潔部位的外表微生物限度評價設備的清潔狀況。對棉簽擦拭取樣方法和檢驗方法的可行性進展驗證，確保清潔方法的有效性，降低藥品穿插污染和微生物污染的風險。2、驗證依據：3、驗證目的通過對清洗消毒后微生物取樣方法的回收率試驗，評價取樣方法的有效性、代表性和科學性，并為證明清洗方法有效性供給根本依據。-4、范圍5、驗證小組成員及職責表1 驗證小組成員及職責人 員人 員姓名職位職責：吳濤QC組 長彭雪梅QA負責驗證過程的監控和檢查，保證驗證方案的實施成 員1、負責驗證方案及報告的起草譚裴 QC2、負責檢驗操作，數據的收集、記錄的填寫李樹冰李樹冰QC“幫助驗證方案及報告的起草，負責對驗證數據的復核。6、驗證風險評估及范圍分析。風險定性標準如下：嚴峻性〔S〕：危害可能產生后果的程度。嚴峻程度分為十個等級，如下：權重

致的后果

對產品造成的后果;極高 可能會導致藥監部門撤消藥品10生產許可證或撤銷GMP證書9 格外高 導致檢測結果不準確或不行靠。`很高 可能會產生不符合GMP的關鍵缺8陷，或者導致上市藥品召回7 高可能會產生不符合重要缺陷可能會產生不符合重要缺陷GMP、SOP的可能導致檢測結果產生重大偏差，對產品質量有較大影響一般缺陷GMP、SOP的品質量有確定影響中等65 低…43

可能會產生不符合GMP、SOP的可能導致檢測結果產生偏差，但在一般缺陷 可承受范圍、21 無

】可能性〔P〕：影響檢測結果的大事發生的可能性頻率或概率，建立以下等級：發生的可能性權重 確認標準 效率等級@10很高 幾乎是不行避開的。 9 1/3·8高 時有發生，且為主要因素。 1/87 (61/805 中等 時有發生，但不是主要因素。 1/400\41/20233 低 相像的狀況很少發生。 1/150002 很低 完全一樣的狀況很少發生。

—1/1500001

也未發生過。

≤1/1500000可檢測性〔D〕：檢測到特別狀況存在的力氣的程度，定義如下：**權重可檢測性等級確認標準10幾乎不行能沒有的把握方法能找出特別狀況。9很微小現行把握方法找出特別狀況的可能性很微小。8—現行把握方法找出特別狀況的可能性微小。微小7很小現行把握方法找出特別狀況的可能性很小。6小現行把握方法找出特別狀況的可能性小。。】中等現行把握方法找出特別狀況的可能性中等。54中上現行把握方法找出特別狀況的可能性中等偏上。~3高現行把握方法找出特別狀況的可能性高。2很高現行把握方法找出特別狀況的可能性很高。1幾乎確定1幾乎確定現行把握方法幾乎確定能找出特別狀況。)等級低風險上限(不包括)等級低風險上限(不包括)高風險下限(包括)嚴峻性略微：對產品質量的影響：可能導致檢測結果產生偏差，但在可承受范圍。(分值：3分)低：對產品質量對影響：可能會導致檢測(分值：5(低風險上限(不包括)高風險下限(包括)等級可能性低：很少幾次與相像的狀況發生。(分值：3間或發生的失敗。(分值：5分)分)分)，可檢測性高：現行把握方法找出特別狀況的可能性高。(分值：3中等：現行把握方法找出特別狀況的可能性中等。(分值：5分)RPN3×3×3=275×5×5=125風險等級判定標準〔〔判定公式〔測量范圍1-10〕RPN風險等級是否須實行措施是否可承受1≤RPN＜27低是否-RPN=S×P×D中否27≤RPN＜125提高可檢測性及或降125≤RPN≤1000高否1≤RPN＜27，但嚴峻性S×P10×29×2險進展后續把握。風險識別料機人比照培育基、檢查用料機人比照培育基、檢查用培育基、檢定菌培育箱，凈化工作臺棉簽驗證方案編寫人員緩沖液、消毒劑、純化水/衣服試驗人員樣品儲存環境試驗組菌種回收率不達標驗證方法不正確具、消毒劑的制備培育環境及觀看環境法干凈區環境〔供試品溶液檢查環境〕法環測環測序號序號工程潛在的失效模式果嚴潛在失效造成重緣由性S驗證方案編01寫人員編寫人員未依據《分析方法驗證驗證方法錯誤，不行靠。8人員培訓考評不到位。對驗證02試驗人員試驗人員未依據操作。培育箱，凈03化工作臺儀器沒有經過計期內。04電子天平，器儀器沒有經過計量、確認，或不期內。導致試驗結果消滅特別。8使用人員使用前未對使用的確認。2編寫驗證方案前的校準日期116設備使發生可能現有把握措施可檢測性 RPNPD嚴格依據《分析2方法驗證治理制116度》規定編寫驗證方案試驗人員培訓對試驗人員進展檢測前致試驗結果不82116牢靠。不到位。驗證方案培訓嚴格按導致檢測環境使用人員使用和培育環境不前未對使用的編寫驗證方案前設備使6設備進展校準2檢查所使用儀器112的計量導致驗證試驗日期進展檢的校準日期確認，失敗。查。未比照培育對耗材未比照培育對耗材比照培育基、檢基、檢查用培嚴格執比照培育查用培育基、檢比照培育基、檢度》”基、檢查用嚴發生定菌、進展期間可檢5號定菌查用培育基、檢潛在的失效模式定菌失效。。果6重性S2可能P1測性D12RPN理規程試驗人對效期進展檢行檢查認。查確認。使用前對棉簽滅入使用使用前棉簽被污染導致驗證失敗6棉簽未滅菌2112菌無誤緩沖液、消緩沖液、消毒劑、純化緩沖液、消毒劑、未嚴格依據標準要求制備緩6號純化水配制不正水工程確或過有效期或性狀明顯特別。潛在的失效模式。果嚴重性S沖液和消毒6潛在失效造成發生P對試驗人員進展2可檢D112劑；使用前未現有把握措施RPN緣由驗證方案培訓對緩沖1.未嚴格依據1無菌器具、衣服無菌器具、無菌衣服，超過有效期。對無菌器具、無菌手套/衣使用前對無菌器服滅菌、對有效期及包裝的完整性進展檢查。治理制菌手套/07導致驗證失敗。6服進展滅菌。21122.使用前未確無菌手套/衣包裝確認。2.使用手套/方可投08擦拭取樣操作不正確。導致驗證失敗。 8培訓不到位。1對試驗人員進展擦拭取樣培訓。18對試驗訓。驗證方法不1.驗證方案編寫驗證方法不1.驗證方案編寫不正確。1.驗證098檢測方案未經批準。開展確1審核182.驗證施。1010試驗人員計數錯誤。2結果觀看時實施復核制度。120對試驗果觀看117樣品存放環境當。2嚴格把握樣品存放環境溫濕度114每天定12培育箱培育環境培育環境及溫濕度和觀看環觀看環境境特別。培育計數結果證失敗。7培育箱溫濕度確。1.每天1.干凈區溫濕度、壓差特別。1.檢測環境溫不當。干凈區環境132.干凈區環境被污染。影響驗證結果。 72.未定期對潔和消毒。3.未定期監測的環境。2每日定期觀看培養箱溫濕度1142.對觀1.每天度、壓每天定期觀看潔取措施2 凈區溫濕度、壓1142.依據差區環境3.定期進展監正確2.未嚴格依據驗工作。導致驗證失敗。標標準范圍。導致驗證失敗。樣品儲存環導致樣品被污境不符合樣品規定的存放環境。染或失效。外表微生物擦拭取樣限度檢查方法驗證的不行承受風險匯總：RPNRPN編號工程/功能風險等級〔S×P×D〕2001試驗組菌種回收率不達標中〔10×2×1〕注：當1≤RPN＜27，但嚴峻性S×P10×29×2上風險進展后續把握。確認前培訓1個工作日完成驗證方案培訓。.組織實施確認15個工作日內完成驗證方案的實施工作。出具報告5個工作日出具報告。8、驗證前的預備主要驗證用儀器儀表確實認確認方法：校驗日期，確定是否在有效期內；可承受標準：經過校驗，校驗合格。設備檢定狀況確認結果表2 設備檢定確認表儀器名稱生化培育箱規格型號YXQ-LS-18SIAASHP-250檢定狀況霉菌培育箱生物安全柜BMJ-250DHG-9141ABHC-800Ⅱ-A2結論/日期/日期檢定部門確認方法：檢定部門GMP可承受標準：GMP試驗環境確認結果3項目結論/日期

風速 懸浮粒子 沉降菌復核人/日期

浮游菌 外表微生物驗證用菌種及培育基4菌種名稱菌種名稱編號來源購進日期大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉結論檢查人/日期復核人/日期5培育基確認培育基、緩沖液名稱培育基、緩沖液名稱干粉批號配制批號干粉來源胰酪大豆胨瓊脂培育基沙氏葡萄糖瓊脂培育基檢查人/日期復核人/日期.人員培訓培訓時間培訓人參與培訓人員培訓時間培訓人參與培訓人員溯源資料確認人/日期復核人/日期9、驗證工程和驗證方法試驗菌株外表微生物擦拭取樣方法及檢驗方法驗證所用的菌株為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、5種保藏技術進展保存，以保證試驗菌株的生物學特性。試驗菌懸液的制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌穎培育物至胰酪大豆胨瓊脂培育基中，接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌穎培育物至胰酪大豆胨瓊脂培育基中，30～35℃培育18～24h；接種白色念珠菌的穎培育物至沙氏葡糖糖瓊脂培育基中，于20～25℃培育48～72h，上述培育物用%無菌氯化鈉溶液制成每1mL含菌數50～100cfu1mL〔孢子數〕50～100cfu的菌〔孢子〕上述菌懸液制備后假設在室溫下放置，應在2小時之內使用。擦拭取樣法的驗證供試組制備擦拭取樣法的驗證供試組制備1mL移液管吸取檢定菌懸液1mL，均勻涂布于無菌擦片上，并于層流臺下吹干，取無菌棉簽1支，用無菌的%氯化鈉溶液浸濕，并將其靠在錐形瓶口上擠壓至無多余的浸潤劑滴落。握住棉簽柄，在取樣點處選擇約為25cm2以30°角與取樣外表接觸，縱向緩慢并充分擦拭，反轉棉簽，同法橫向擦拭見圖1〕，20mL的%無菌氯化鈉溶液中，充分振搖5min，做好標識，作為供試品溶液。每種菌平行制備兩個染菌不銹鋼載片。取全部供試品溶液，經薄膜法過濾后，用pH=氯化鈉-蛋白胨緩沖液50mL沖洗濾膜，將濾膜取出，菌面朝上分別貼于胰酪大豆胨瓊脂培育基平皿及沙氏葡糖糖瓊脂培育基平皿上，分30～35℃培育72h、20～25℃120h，記錄各平皿上菌落數。圖圖1擦拭示意圖反轉棉簽反轉棉簽菌液組制備菌液組制備吸取菌懸液吸取菌懸液1mL，參與%無菌氯化鈉溶液20mL中，全部經薄膜過濾法過濾，用氯化鈉-蛋白胨緩沖液50mL沖洗濾膜，將濾膜取出，菌面朝上分別貼于胰酪大豆胨瓊脂培育基平皿及沙氏葡糖糖瓊脂培育基平皿上，230～3572h、20～25℃培育120h，記錄各平皿上菌落數。陰性比照組制備20mL代替供試品溶液，其它操作同。回收率計算3次試驗測試值的平均值計。可承受標準回收率≥70%，RSD≦20%。擦拭取樣法驗證明驗結果〔見附件1〕。微生物限度檢驗方法學驗證陰性比照組制備20mL代替供試品溶液，其它操作同。回收率計算3次試驗測試值的平均值計。可承受標準回收率≥70%，RSD≦20%。擦拭取樣法驗證明驗結果〔見附件1〕。微生物限度檢驗方法學驗證供試組制備125cm以3〔見圖20mL的%無菌氯化鈉溶液中，充分振搖5min，做好標識，作為供試品溶液。平行制備兩個不銹鋼載片。1mLpH=氯化鈉-蛋白胨緩沖液50mL沖洗濾膜，養基平皿上，分別于30～35℃培育72h、20～25℃120h，記錄各平皿上菌落數。菌液組制備取pH=氯化鈉蛋白胨緩沖液100mL參與薄膜過濾器中，過濾。取緩沖液20mL，菌懸液1mLpH=氯化鈉-蛋白胨緩沖液50mL沖洗濾膜，將濾膜取出，平行制備2個平皿，分別于30～35℃培育72h、20～25℃120h，記錄各平皿上菌落數。陰性比照組制備取%無菌氯化鈉溶液20取%無菌氯化鈉溶液20mL，經薄膜過濾法過濾，將濾膜取出，菌面朝上分別貼于胰酪大豆胨瓊脂培育基平皿及沙氏葡糖糖瓊脂培育基平皿上，分別于30～35℃培育72h、20～25℃120h，回收率計算3次試驗測試值的平均值計。可承受標準回收率應≥70%，RSD≦20%回收率計算3次試驗測試值的平均值計。可承受標準回收率應≥70%，RSD≦20%微生物限度檢驗驗證明驗結果(見附件2〕偏差治理確認過程中應嚴格依據本方案執行，消滅個別工程不符合標準結果時，應按公司內部的狀況處理過程均應記錄備案。變更治理重制定確認方案。并依據公司內部的《變更把握治理規程》處理并填寫相應的記錄。再驗證假設設備清潔方法發生轉變時，需重驗證。附件清單13附件清單附件附件1《擦拭取樣法驗證明驗結果》附件2《微生物限度檢驗驗證明驗結果》供試品組供試品組1菌液組陰性比照〔%〕〔%〕擦拭取樣法驗證明驗結果擦拭取樣法驗證明驗結果驗證明驗細菌酵母菌霉菌驗證次數試驗組大腸埃希萄球菌〔10-6〕枯草芽孢白色念珠黑曲霉〔10-7〕平皿121