CHAP2醫藥微生物生物技術醫藥微生物生物技術第1頁第一節人體正常菌群與致病菌第二節微生物藥品主要類型第三節當代微生物藥品篩選方法第四節當代篩選模型醫藥微生物生物技術第2頁

我國:豆腐上霉菌治療瘡癤等疾病

歐洲、南美:發霉面包治療潰瘍、腸道感染

我國傳統藥典：東漢《神農本草經》到明朝《本草綱目》列舉民間藥用真菌，如靈芝、木耳、豬苓、馬勃、雷丸、冬蟲夏草

茯苓馬勃醫藥微生物生物技術第3頁民間傳說將靈芝稱為“仙草”，認為靈芝是采天地千年之正氣，集日月之精華，收藏龍臥虛之地靈，吸九天之星光，歷經千萬年才生成。《神農本草經》中說：“山川云雨，四時五行，陰陽晝夜之精，以生五色神芝。”醫藥微生物生物技術第4頁神農嘗百草醫藥微生物生物技術第5頁巴斯德：

微生物生物技術在醫藥中理論研究始于巴斯德，研究減毒或無毒疫苗，開創了人類戰勝傳染病新紀元，奠定了當代免疫學基礎。梅契尼科夫（Metchnikoff）：利用乳酸桿菌抑制人腸道腐生菌Fleming：1929年第一個發覺青霉素

微生物代謝產物作為藥品開發始于20世紀40年代，青霉素純化與工業化生產，開始了抗生素發酵工業

Waksman：1945年發覺鏈霉素（真正抗生素時代）醫藥微生物生物技術第6頁近年來發覺平菇、草菇、金針菇、蘑菇等均含有抗癌成份，對腫瘤有防治作用。從真菌中尋找抗癌藥品已為世界矚目。猴頭菇有抗癌、治胃潰瘍和十二指腸潰瘍作用。用猴頭菌制成猴菇菌片可用來治療消化道腫瘤。豬苓用于治療肺癌，能夠減緩癥狀。銀耳多糖、靈芝多糖等均為藥用真菌制成新藥。

醫藥微生物生物技術第7頁蘑菇、銀耳、木耳、靈芝...含有各種真菌多糖，能增加免疫作用醫藥微生物生物技術第8頁第一節人體正常菌群與致病菌在正常人體皮膚、粘膜及外界相通各種腔道（如口腔、鼻咽腔、腸道和泌尿道）等部位，長久借居著微生物群，普通對人體無害,與宿主之間相互依存、相互制約，形成一個能進行物質、能量等交流動態平衡微生態系統，常稱之為正常菌群包含細菌、真菌、螺旋體、支原體等。醫藥微生物生物技術第9頁

人體各部位常見正常菌群皮膚：表皮葡萄球菌、類白喉桿菌、綠膿桿菌、恥垢桿菌等口腔：鏈球菌（甲型或乙型）、乳酸桿菌、螺旋體、梭形桿菌、白色念球菌、（真菌）表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏球菌、類白喉桿菌等胃：正常普通無菌腸道：類桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、厭氧性鏈球菌、糞鏈球菌、葡萄球菌、白色念球菌、乳酸桿菌、變形桿菌、破傷風桿菌、產氣莢膜桿菌等醫藥微生物生物技術第10頁鼻咽腔：甲型鏈球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感桿菌、乙型鏈球菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌等眼結膜：皮表葡萄球菌、結膜干燥桿菌、類白喉桿菌等陰道：乳酸桿菌、白色念球菌、類白喉桿菌、大腸桿菌等尿道：表皮葡萄球菌、類白喉桿菌、恥垢桿菌等醫藥微生物生物技術第11頁1.內源性感染正常菌群生理作用：

生物拮抗作用（形成一層自然菌膜，一個非特異性保護膜,可促機體抵抗致病微生物侵襲及定植）

刺激免疫應答合成維生素（如核黃素、生物素、葉酸、吡哆醇及維生素K等，供人體吸收利用）醫藥微生物生物技術第12頁機會感染（內源性感染）：正常菌群與宿主平衡被打破，正常菌群中一部分微生物能引發宿主患病。醫藥微生物生物技術第13頁內源性感染原因1）正常菌群突破上皮屏障比如皮膚粘膜受傷（尤其是大面積燒傷）所造成金黃色葡萄球菌感染、闌尾穿孔或腸道手術后脆弱擬桿菌引發腹膜炎2）外源性生物體干擾宿主正常功效人工心臟瓣膜、人造關節以及導管使用有利于細菌聚集并形成生物膜，細菌生物膜對吞噬細胞吞噬作用及血清殺菌作用有抵抗性，宿主難于去除這些微生物醫藥微生物生物技術第14頁3）因為正常菌群借居部位改變，發生了定位轉移，也可引發疾病。比如大腸桿菌進入腹腔或泌尿道，可引發腹膜炎、泌尿道感染4）使用抗腫瘤藥品或放射治療所致免疫抑制腫瘤藥品或放射線殺滅快速生長細胞，包含免疫細胞醫藥微生物生物技術第15頁5）外源性病原體感染造成宿主免疫功效損害HIV病毒、流感病毒（破壞呼吸道上皮細胞，減弱上皮細胞毀滅細菌能力，抑制吞噬細胞作用，嚴重會引發肺炎或是心肺衰竭）6）不合理使用抗生素醫藥微生物生物技術第16頁2.外源性感染工作人員帶菌者、患者與環境貯源病原菌經過接觸或其源性傳輸引發感染.致病菌：能夠在含有完整特異性和非特異性防疫系統個體中引發疾病細菌。如霍亂弧菌、結核分枝桿菌、志賀菌醫藥微生物生物技術第17頁第二節微生物藥品主要類型微生物在代謝過程中，會產生各種多樣代謝產物。依據代謝產物與微生物生長繁殖關系，能夠分為：

初級代謝產物次級代謝產物轉化產物另外，微生物本身作為菌體、酶醫藥微生物生物技術第18頁1）初級代謝產物：指微生物經過代謝活動所產生、本身生長和繁殖所必需物質，如氨基酸、核苷酸等。2）次級代謝產物：指以初級代謝產物為原料、微生物生長到一定階段才產生化學結構十分復雜、對該微生物無顯著生理功效，或并非是微生物生長和繁殖所必需物質，如抗生素、激素、胞外多糖等。代謝障礙影響生命3）轉化產物微生物對外源物質（類固醇、烷烴、芳烴、雜環化合物）進行加工（特定位置引入羥基，還原雙鍵等）后產物醫藥微生物生物技術第19頁抗生素、毒素、激素色素細胞內或外環境中生長和繁殖非必需物質一定階段才合成氨基酸、核苷酸、多糖、維生素細胞內生長和繁殖必需物質不停地合成次級代謝產物初級代謝產物實例存在部位功能產生醫藥微生物生物技術第20頁一、微生物菌體醫藥概述1疫苗概念2第一代疫苗(傳統疫苗)3第二代疫苗（基因工程疫苗）4第三代疫苗(核酸疫苗)5疫苗舉例6免疫增強劑7微生物制劑8利用標識微生物細胞檢測腫瘤醫藥微生物生物技術第21頁

英國醫生Jenner在1796年首創

接種牛痘預防天花。

據記載，宋朝（1000s）就接種

“人痘”預防天花。

1870s,巴斯德和柯赫系統地用

弱毒疫菌接種,預防羊炭疽病，

雞霍亂，狂犬病等傳染病。

1978年世界衛生組織宣告，人

類毀滅了天花。醫藥微生物生物技術第22頁1796年首例接種牛痘預防天花返回醫藥微生物生物技術第23頁1疫苗概念

經典疫苗主要是滅活或減毒致病物質病原物經培養、純化后，或者被滅活，或者降低其毒性，但要保持其免疫能力使接收者取得免疫力，免受疾病侵染醫藥微生物生物技術第24頁2第一代疫苗(傳統疫苗)利用Pasteur建立減毒、弱化或者滅活病原體做疫苗技術，人們創造了許許多多人用傳染病疫苗。用病原體減毒或者弱化所得到疫苗稱為第一代疫苗。醫藥微生物生物技術第25頁第一代疫苗不足之處含有不安全性和對一些傳染病使用效果不理想。所謂不安全性是指疫苗生產過程中必須大量繁殖病原體，對工作人員是個嚴重威脅；而且在使用中偶見因減毒或者滅活不徹底而造成被免疫者感染情況。

醫藥微生物生物技術第26頁3第二代疫苗（基因工程疫苗）1）概念和特點是用基因工程方法或分子克隆技術，分離出病原保護性抗原基因，將其轉入原核或真核系統使表示出該病原保護性抗原，制成疫苗，或者將病原毒力相關基因刪除掉，使成為不帶毒力相關基因基因缺失苗特點：無毒、無感染能力含有較強免疫原性。

醫藥微生物生物技術第27頁2）亞單位疫苗（subunitvaccine）：用病原微生物有效抗原成份制成疫苗稱為亞單位疫苗.醫藥微生物生物技術第28頁外殼結合蛋白在膜外引發免疫反應抗原決定簇醫藥微生物生物技術第29頁亞單位疫苗（單純皰疹病毒疫苗）病毒粒子含有33種以上蛋白，二分之一為糖蛋白；基因組為雙鏈線狀DNA，152.5Kb；引發性病，腦炎，也是一個致癌病毒；滅活或減毒疫苗都有危險；

醫藥微生物生物技術第30頁制備亞單位疫苗關鍵：判定起主要作用抗原HSV-1gpD蛋白是抗原成份分離出HSV-1gpD基因完整gpD基因編碼蛋白是結合在哺乳動物細胞膜上膜結合蛋白，經過基因改造，去除了編碼跨膜結構域序列，將改造過基因轉移到中國倉鼠細胞中正確表示，最終將表示蛋白制成亞單位疫苗。醫藥微生物生物技術第31頁醫藥微生物生物技術第32頁3）肽疫苗（口蹄疫疫苗）概念：引發免疫反應病原微生物各部分并不都起相同作用，往往只有部分結構物質起決定作用，稱抗原決定簇，類似于抗原決定簇小肽疫苗稱肽疫苗。免疫反應：位于病毒衣殼外且可與抗體結合蛋白肽疫苗制備：合成口蹄疫病毒VP1不一樣結構域對不一樣結構域進行檢測醫藥微生物生物技術第33頁VP1蛋白C端三個肽段：141~160，151~160，200~213N端三個肽段：9~24，17~32，25~41分別連接到載體蛋白上注入小豚鼠試驗醫藥微生物生物技術第34頁141~160肽段含有抗原活性醫藥微生物生物技術第35頁利用小肽作為疫苗限制原因1）充當抗原決定簇肽段不能太長且要連續2）抗原決定簇氨基酸分布在不一樣區域3）肽段構象必須與完整病毒上抗原決定簇上構象一致4）單一肽段要有足夠強抗原性醫藥微生物生物技術第36頁當前正在正在研制或者已經上市基因工程疫苗還有：皰疹病毒疫苗、腮腺炎病毒疫苗、流行性出血熱病毒疫苗、風疹病毒疫苗、輪狀病毒疫苗等。

醫藥微生物生物技術第37頁4第三代疫苗(核酸疫苗)

所謂核酸疫苗是指含有編碼蛋白質基因序列質粒載體，經肌肉注射或者微彈轟擊等方法導入體內，經過宿主細胞表示抗原蛋白，誘導宿主產生對該抗原蛋白免疫應答，以到達預防和治療疾病目標。醫藥微生物生物技術第38頁Wolff等1993發覺將DNA直接注射入小鼠骨骼肌細胞后能夠引發特異免疫反應；將流感病毒核蛋白抗原基因克隆到表示載體，直接注入小鼠骨骼肌肉細胞；丙型肝炎病毒關鍵蛋白基因免疫動物；醫藥微生物生物技術第39頁DNA疫苗優越性1）DNA比蛋白質更穩定；2）DNA分離、純化比蛋白質要輕易多；3）任何DNA片段都能夠插入質粒中制成疫苗，同一個質粒能夠容納一個以上抗原基因；4）DNA疫苗對于一些當前難以用常規方法防治疾病含有主要意義；5）用于一些疑難病治療。醫藥微生物生物技術第40頁現已廣泛使用疫苗

活病毒疫苗

病毒亞單位疫苗脊髓灰質炎乙型肝炎流行性腮腺炎滅活細菌疫苗麻疹百日咳風疹傷寒黃熱病滅活細菌毒素（類毒素）

滅活病毒疫苗白喉流感破傷風醫藥微生物生物技術第41頁5疫苗舉例

病毒性疾病疫苗

細菌性疾病疫苗

醫藥微生物生物技術第42頁5.1病毒性疾病疫苗肝炎病毒疫苗艾滋病病毒疫苗其它病毒性疾病疫苗醫藥微生物生物技術第43頁補充：HepatitisBandHepatitisBVaccine醫藥微生物生物技術第44頁

什么是乙型肝炎？ 簡單地說，就是由乙型肝炎病毒（HBV）引發肝臟炎性損害。它是是當前世界上流傳最廣泛、危害最嚴重一個傳染病。醫藥微生物生物技術第45頁乙肝形勢不容樂觀！！全世界現有3.5億慢性乙肝病毒（HBV）攜帶者，占世界人口5％；其中，亞洲和非洲HBV攜帶率為8％～15％HBV攜帶者中50％～70％病毒復制活躍，為慢性乙肝醫藥微生物生物技術第46頁大部分乙型肝炎在急性期經治后能痊愈，很多病例病程遷延或轉為慢性，其中一部分可發展為肝炎后肝硬化變甚至肝癌；極少數病例病程發展迅猛，肝細胞出現大片壞死，成為重型肝炎；另有一些感染者則成為無癥狀病毒攜帶者。乙肝潛在危害醫藥微生物生物技術第47頁慢性乙肝病人肝硬化發生率為2％～20％，代償性肝硬化發展成失代償性肝硬化為20％～23％，發展成肝癌占6％～15％。

據調查推算，中國慢性乙肝病人中，約25％～40％最終將死于肝硬化或合并肝癌。HBV攜帶者最終死于相關肝病危險性，男性為50％，女性為15％。這與男性病毒不易被去除及吸煙、飲酒等相關。乙肝潛在危害醫藥微生物生物技術第48頁我國乙肝病情分布金字塔醫藥微生物生物技術第49頁兩方面問題

HBV——罪魁禍首Hepatitis離我們有多遠？傳輸路徑醫學判定——明明白白疫苗——防患于未然……醫藥微生物生物技術第50頁乙肝病毒HBV1970年Dane等在電鏡下判定了Dane顆粒，即HBV（theHepatitisBVirus）顆粒。醫藥微生物生物技術第51頁乙肝病毒HBVHBV是一個小型DNA病毒，基因組由單個環形DNA分子組成；球形顆粒，直徑42nm；包膜為脂質組成（含乙肝表面抗原HBsAg），內為20面體核蛋白殼（含乙肝關鍵抗原，HBcAg）。醫藥微生物生物技術第52頁aconceptualpicture

s=surfaceproteinsc=coreproteinD=ViralDNAp=DNAPolymerase乙肝病毒HBV醫藥微生物生物技術第53頁醫藥微生物生物技術第54頁通常，大多數成人免疫系統都能夠抵抗B型肝炎病毒，并毫無問題地“復原”。不過也有許多成人無法抵抗B型肝炎病毒，以及大多數受到傳染嬰兒和兒童因為嬰兒和兒童免疫系統還未健全，無法識別“敵人”,反而把“敵人”當成體內“自己人”,長久“和平共處”HBV進入人體醫藥微生物生物技術第55頁醫藥微生物生物技術第56頁HBV侵染肝細胞 當HBV進入人體后（假如不幸讓它繞過了人體免疫系統），它將首先攻擊肝細胞。

乙肝病毒不直接引發肝細胞病變，只是利用肝細胞攝取養料賴以生存，并在肝細胞內復制。醫藥微生物生物技術第57頁

FromwithinthecellnucleusthehepatitisBDNAcausesthelivercelltoproduce:(viamessengerRNA)surface(HBs)proteins,thecore(HBc)protein,DNApolymerase,theHBe、HBxprotein,possiblyotherasyetundetectedproteinsandenzymes.HBVreplication醫藥微生物生物技術第58頁醫藥微生物生物技術第59頁DNApolymerasecausesthelivercelltomakecopiesofhepatitisBDNA.Viatheaboveprocess,versionsofthehepatitisBvirusareconstructedbythelivercell.Thesecopiesofthevirusarereleasedfromthelivercellmembraneintothebloodstreamandfromtherecaninfectotherlivercellsandthusreplicateeffectively.

HBV侵染肝細胞醫藥微生物生物技術第60頁當前尚不是很清楚基本上是這么：乙型肝炎病人肝臟受損,并不是乙型肝炎病毒在肝細胞內繁殖直接結果，而是機體免疫反應造成。。乙型肝炎病毒感染人體后,可激發機體產生對乙型肝炎病毒各種細胞免疫反應和體液免疫反應,并激發本身免疫反應引發免疫調整功效紊亂。機體這些免疫反應,可去除已感染病毒肝細胞,又可引發肝細胞損傷,造成不一樣類型病理改變及臨床轉歸。乙型肝炎致病機理醫藥微生物生物技術第61頁乙肝傳輸路徑？B型肝炎病毒經過接觸被感染者血液或體液傳輸，和造成艾滋病人類免疫缺點病毒(HIV)路徑相同。然而，HBV比HIV感染性強50到100倍。

醫藥微生物生物技術第62頁乙肝病毒主要傳輸路徑：血源性傳輸；醫源性傳輸；胎源性傳輸是病毒傳染，而不是遺傳!生活親密接觸性傳輸乙肝病毒傳輸醫藥微生物生物技術第63頁醫藥微生物生物技術第64頁在世界范圍內，大多數傳染發生于從被感染母親到孩子，一家人中兒童和兒童接觸，以及重用未殺菌針和耳咽管。但年一項調查表明：伴隨社會發展、醫療技術條件改進、人們生活方式變遷，經過生活親密接觸傳輸已越來越成為乙肝主要傳輸方式。乙肝病毒傳輸醫藥微生物生物技術第65頁但乙肝不會經過水和食物以及通常接觸傳輸(不過不能適用剪刀，指甲鉗，牙刷等)所以對乙肝攜帶者歧視是因為人們對乙肝知識匱乏造成偏見造成。乙肝病毒傳輸醫藥微生物生物技術第66頁乙肝兩對半（乙肝三系）HBV－DNA定量檢測肝功效化驗 ……醫學化驗醫藥微生物生物技術第67頁醫學判定HepatitisBDNA&HepatitisBDNApolymerase.

血液中最先能被檢驗出來（感染一周內）；但其檢測比較復雜且昂貴所以普通檢測HBsAg、 HBsAb、HBeAg 、HBeAb、 HBcAb醫藥微生物生物技術第68頁乙肝三系醫藥微生物生物技術第69頁乙肝三系乙型肝表面抗原HBsAg就是過去人們經常說“澳抗”，指HBV外膜蛋白。

（“澳抗”是“澳大利亞抗原”簡稱，因為它最早是在澳大利亞發覺，所以稱為“澳抗”。）表面抗原在全部體液中都能檢出，但只有血、陰道分泌物、經血、精液顯出有傳染性；醫藥微生物生物技術第70頁我國漢族乙肝病毒表面抗原陽性率達15％左右，藏族高達26%，維吾爾族最低，約2%左右，總陽性率達10%左右。HBsAg陽性是HBV感染標志。（但當前有提出了反對意見，認為,很多時候乙肝病毒被去除后，乙肝病毒部分基因整合到了肝細胞基因內，組成了“合資企業”。HBsag作為“合資企業”一個產品連續出現在血液中。因為整合病毒基因常是缺損，往往只能復制出HBsag） （摘自年4月1日一塌糊涂） ～～～～@_@??乙肝三系醫藥微生物生物技術第71頁乙型肝炎表面抗體即抗-HBs，是由HBsAg誘導產生，為保護性抗體。在HBV感染恢復期或注射乙肝疫苗后出現，它出現標志對HBV感染產生特異性免疫乙肝三系醫藥微生物生物技術第72頁乙肝病毒e抗原/e抗體顧名思義，乙肝病毒e抗原中“e”是英文early(早期)意思，e抗原是乙肝病毒復制標志，它能夠判定傳染性大小乙肝病毒e抗原見于病毒感染早期，表示病毒復制活躍。感染后期或機體建立免疫反應則乙肝病毒e抗體陽性，病毒復制受抑制；或免疫壓力過大，乙肝病毒基因前c和c區基因變異，乙肝病毒e抗原免疫原性改變則常規ELISA試劑不能檢測出來，但機體產生無保護性抗體而測出乙肝病毒e抗體。乙肝三系醫藥微生物生物技術第73頁關鍵抗體(抗HBc)關鍵抗體是人體感染了乙肝病毒以后，最早出現一個抗體。不過，它對人體沒有保護作用。陽性時，假如加號多(醫學上說法是“滴度高”)，提醒病毒正在復制，傳染性也強。乙肝三系醫藥微生物生物技術第74頁“大三陽”和“小三陽”？“大三陽”表示“二對半”檢測結果為乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒E抗原、乙肝病毒關鍵抗體三項陽性，

即HBsAg（+）、HBeAg（+）、HBcAb（+）“小三陽”表示“二對半”檢測結果為乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒E抗體、乙肝病毒關鍵抗體三項陽性，

即HBsAg（+）、HBeAb（+）、HBcAb（+）醫藥微生物生物技術第75頁“大三陽”、“小三陽”區分僅限于HBeAg(+)/HBeAb(+)“大三陽”,表示機體內病毒復制活躍，見于急性病毒性肝炎、慢性病毒性肝炎和無癥狀乙肝病毒感染者,傳染性很強“小三陽”表示：非變異株時機體內病毒復制不活躍；變異株產生時病毒毒力增加（即機體免疫反應性下降）甚至誘導肝細胞癌變，見于急性乙型肝炎（后期，病毒復制受抑，病情趨于好較，近期可能痊愈）、慢性肝炎（或病毒復制降低或停頓，病情減輕或穩定；病毒變異，毒力增加，病情重復，進展較快，甚至發展為肝硬化和肝癌癥或重癥肝炎）。但傳染性較弱“大三陽”和“小三陽”？醫藥微生物生物技術第76頁這種方法借助了乙肝病毒抗原和抗體測定，并不能代表病毒本身，也無法知道病毒多少。乙肝三系檢驗缺點醫藥微生物生物技術第77頁（附表）乙肝兩對半結果模式及其意義乙肝兩對半結果模式及其意義編號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb頻度臨床意義1+-+-+常見急肝，慢性活動期，有傳染性2+--++常見恢復期，弱傳染性3---++常見恢復期，弱傳染性4+---+常見急肝，慢性sAg攜帶者5----+常見急性窗口期，既往感染過6-+-++常見康復期醫藥微生物生物技術第78頁編號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb頻度臨床意義7-+--+常見既往感染過，仍有免疫力8-+---常見康復期，主動被動免疫后9-----常見未感染過HBV10+----少見急性早期，慢性sAg攜帶者11+-+--少見早期感染，強傳染性12+--+-少見恢復期，慢性sAg攜帶者易陰轉（附表）乙肝兩對半結果模式及其意義醫藥微生物生物技術第79頁編號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb頻度臨床意義13+-+++少見急性感染，趨于恢復，慢性攜帶者14++---少見不一樣亞型HBV二次感染，亞臨床型HBV15+++-+少見不一樣HBsAg亞型感染，感染早期16++-++少見感染早期17++--+少見感染早期18--+--少見非經典性急性感染，提醒NANB型肝炎（附表）乙肝兩對半結果模式及其意義醫藥微生物生物技術第80頁編號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb頻度臨床意義19--+-+少見非經典性急性感染，提醒NANB肝炎20-++--少見非經典感染21-++-+少見非經典感染22--+++少見急性感染中期23---+-少見HBV感染恢復期24-+-+-少見HBV感染恢復期（附表）乙肝兩對半結果模式及其意義醫藥微生物生物技術第81頁乙肝病毒關鍵中基因組是由乙肝病毒脫氧核糖核酸分子（HBV－DNA）及脫氧核糖核酸聚合酶（簡稱DNA聚合酶，或DNA-P）組成。乙肝病毒DNA和DNA聚合酶主宰乙肝病毒復制，即無性繁殖。所以它們陽性就表示有乙肝病毒顆粒存在，而且復制活躍，傳染性強HBV－DNA定量檢測醫藥微生物生物技術第82頁近年，新研制成功熒光定量PCR出現為乙肝病毒檢測診療提供了新伎倆大量臨床標本測定結果證實，其特異性為100％，靈敏度可達.01fg(10--12mg),相當于2.5個乙肝病毒顆粒.HBV－DNA定量檢測醫藥微生物生物技術第83頁肝功效檢驗

肝功效檢驗種類很多，反應肝功效試驗已達700余種，新試驗還在不停地發展和建立。醫藥微生物生物技術第84頁主要包含四大類：反應肝細胞損傷試驗反應肝臟排泄功效試驗反應肝臟貯備功效試驗反應肝臟間質改變試驗

肝功效檢驗醫藥微生物生物技術第85頁遠離乙肝最安全有效方法就是注射乙肝疫苗，普通來說，凡沒有感染過乙肝病毒者都應該注射乙肝疫苗。乙肝疫苗有兩種類型：一個是血源性疫苗乙肝血源疫苗是采取乙肝表面抗原攜帶者血清或血漿作為原料，經過化學濃縮，提純其中表面抗原，而制成乙肝疫苗，這種疫苗已停頓使用。另一個是基因工程疫苗。現在我國均采取基因工程酵母菌來制造乙肝疫苗稱為基因工程乙肝疫苗。醫藥微生物生物技術第86頁大致是在6個月時段內注射（皮下）3次疫苗結束時作一次血液乙肝三系檢驗。因為只有注射疫苗后能產生足量抗體人，才有預防作用。約有90~95%人會所以而取得免疫能力乙肝疫苗醫藥微生物生物技術第87頁1981年Edman等人成功地克隆了乙肝表面抗原（HbsAg）基因并取得大量表面抗原；

1982年，乙肝疫苗首次在美國面市1986年美國FDA首先同意了Merk企業基因工程乙肝疫苗（酵母表示系統）上市。乙肝疫苗醫藥微生物生物技術第88頁當前用基因工程生產乙肝疫苗主要有兩種方法：一是美國和日本等國采取，將重組DNA導入酵母菌，由酵母菌產生乙肝抗原而制成疫苗二是以色列等國采取，將重組DNA導入倉鼠細胞，由倉鼠細胞生產疫苗。

醫藥微生物生物技術第89頁注射后產生保護性抗體不是永久性，普通只能維持3～5年

（這個時間眾說紛紜，WHO，世界衛生組織認為最少有15年）以后必須在醫生指導下再加強注射。最好是定時檢驗（1年）醫藥微生物生物技術第90頁甲型肝炎和丙型肝炎是兩種經由消化道傳染流行較廣病毒性肝炎。國外已經有甲型肝炎病毒滅活疫苗面市。我國使用減毒疫苗也取得了很好效果。

甲型肝與丙型肝炎醫藥微生物生物技術第91頁丙型肝炎病毒感染后，大部分人轉為慢性肝炎，其中部分病人可發展為肝硬化甚至肝癌。70年代：非甲非乙性肝炎，1989：更名為丙肝。當前尚無特效治療藥品或預防方法。丙型肝炎病毒當前已知最少存在6種不一樣基因病毒，各型之間異源性到達25%~30%，且存在著高突變率，尤其是包膜區多變性，給丙肝疫苗研究帶來了重重困難。一個病人可能帶有15－20種一個丙肝亞種變種，可能有150個不一樣亞種。這也是至今仍未見丙肝疫苗上市原因之一。醫藥微生物生物技術第92頁艾滋病病毒疫苗

艾滋病（AIDS）全稱是人類取得性免疫缺點綜合癥，是由人類免疫缺點病毒（HIV）感染引發。1980－1981年發覺，1983－1984年定性疫苗研究集中于基因工程苗。醫藥微生物生物技術第93頁其它病毒性疾病疫苗脊髓灰質炎疫苗

狂犬病疫苗

流感病毒疫苗醫藥微生物生物技術第94頁5.2細菌性疾病疫苗霍亂弧菌疫苗麻風桿菌疫苗

幽門螺旋桿菌疫苗

醫藥微生物生物技術第95頁霍亂弧菌疫苗（活體重組疫苗）應用基因工程方法：

非致病性微生物攜帶并表示某種特定病原物抗原決定簇基因，產生免疫原性；修飾或去掉致病微生物毒性基因，但仍保持抗原性醫藥微生物生物技術第96頁霍亂弧菌（Vibriocholerae）產生腸毒素:由745個氨基酸組成蛋白質,它包含五個B亞基和一個A亞基

A亞基：含有ADP糖基化活性能激活腺苷環化酶兩個功效域，A1肽和A2肽A1肽包含毒性區，含194個氨基酸

B亞基:無毒

醫藥微生物生物技術第97頁醫藥微生物生物技術第98頁麻風桿菌疫苗麻風是由麻風分枝干菌引發慢性傳染病，這是1873年由Hansen最早確定人類第一個致病菌，是一個毀容疾病，在世界范圍內曾是一個常見病，甚至《圣經》里也曾提到過麻風病。病變在皮膚和周圍神經。臨床表現為麻木性皮膚損害、神經粗大，嚴重者甚至肢端殘廢。但因為這種細菌依然未能在體外培養，因而嚴重地妨礙了對麻風病診療、免疫學和治療學方面研究，也嚴重妨礙了疫苗開發。醫藥微生物生物技術第99頁幽門螺旋桿菌疫苗幽門螺旋桿菌是慢性胃炎和消化道潰瘍主要病原體，慢性胃炎可發展為粘膜萎縮、異型增生，最終造成胃癌。當前在幽門螺桿菌疫苗研制方面已取得了進展，相信不遠未來幽門螺桿菌疫苗將成為預防和控制幽門螺桿菌感染有效伎倆。醫藥微生物生物技術第100頁醫藥微生物生物技術第101頁

微生物及其產物

卡介苗(BCG)、胞壁酰二肽(MDP)、短小棒狀桿菌、溶血性鏈球菌Su(OK-432)等微生物組分或其代謝產物可作為免疫佐劑而發揮治療作用。

免疫佐劑：本身不含有抗原性，但同抗原一起或預先注射到機體內能增強免疫原性或改變免疫反應類型。

植物多糖

各種植物多糖（如云芝多糖、香菇多糖等）可促進淋巴細胞增殖并產生細胞因子，可用于抗腫瘤和感染輔助治療。6.免疫增強劑醫藥微生物生物技術第102頁中草藥

各種中草藥（如人參、黃芪、枸杞、刺五加、淫羊藿等）可顯著增強機體免疫功效。

淫羊藿，補腎壯陽

醫藥微生物生物技術第103頁東北刺五加果能增加睡眠，對心悸、健忘、乏力等癥狀，刺五加作用與人參相同。刺五加有扶正固本、養血安神、滋補強壯之功效，主要藥效成份含水量各種糖甙、丁香甙、香豆精甙、多糖及果酸，是治療體虛、咳嗽、高血壓、神經衰弱等癥良藥。古代曾有“寧要五加一把，不要金玉滿車”之說，對刺五加給予極高評價。醫藥微生物生物技術第104頁細胞因子

因為細胞因子生物學效應多樣性和復雜性，使其臨床應用受到限制。

化學合成藥品

具代表性是左旋咪唑(levomisole)，對免疫功效低下者具顯著免疫增強作用。

醫藥微生物生物技術第105頁（1）濟南假單胞菌菌苗使巨噬細胞功效增強并產生特異性抗體，誘導機體產生干擾素（IFN）及腫瘤壞死因子（TNF），是一個免疫佐劑。免疫佐劑：本身不含有抗原性，但同抗原一起或預先注射到機體內能增強免疫原性或改變免疫反應類型。采取胸腔注射方式還可治療惡性胸腔積液。醫藥微生物生物技術第106頁（2）溶血性鏈球菌制劑（國外稱OK-432或Picibanil，國內稱沙培林或鏈球菌-722）非特異性免疫增強劑,它由溶血性鏈球菌經青霉素處理后凍干而成，為干菌制劑。

醫藥微生物生物技術第107頁非特異性免疫機體兩道防線：①皮膚和粘膜；②體液中殺菌物質（如溶菌酶破壞細胞壁）和吞噬細胞。非特異性免疫：機體兩道防線是生來就有天然防御功效，對各種病原生物都有一定程度防御作用，沒有特殊針對性，所以叫非特異性免疫。含有種特異性，如人對雞霍亂弧菌天然不感染，雞和蛙對炭疽菌不感染。醫藥微生物生物技術第108頁特異性免疫特異性免疫：又稱取得免疫，是經后天感染(病愈或無癥狀感染)或人工預防接種(菌苗、疫苗、類毒素、免疫球蛋白等)而使機體取得抵抗感染能力。普通是在微生物等抗原物質刺激后才形成(免疫球蛋白、免疫淋巴細胞)，并能與該抗原起特異性反應。醫藥微生物生物技術第109頁OK-432廣泛用于臨床：腹腔內注入OK-432后可快速使中性粒細胞進入腹腔，隨即腹水中巨噬細胞和T淋巴細胞顯著增加，從而殺傷腫瘤細胞及降低腹水產生。治療胃癌、肝癌、膽管癌、大腸癌、上腭癌、喉癌、舌癌、甲狀腺癌等醫藥微生物生物技術第110頁

惡性腹水治療免疫治療沙培林(OK-432)干擾素腫瘤壞死因子白介素-2(IL-2)短小棒狀桿菌醫藥微生物生物技術第111頁惡性腹水治療試驗沙培林(OK-432)

Torisu等用該制劑治療134例胃腸源性惡性腹水(10KE，1次/周腹腔注射，療程6周)，結果有76例腹水完全消退，8例腹水顯著降低，腹圍減小10cm以上，總有效率達62.7%(84/134)，且患者生存期(平均10.2個月)也較50例對照組(平均3.1個月)顯著延長，其中對腹水細胞學檢驗呈陽性患者更有效。提醒OK-432可能是治療惡性腹水有效制劑。醫藥微生物生物技術第112頁OK-432注射治療淋巴管瘤兩次沙培林注射治療后，腫瘤完全消失沙培林注射治療，抽出暗血性淋巴液頸部囊性淋巴管瘤醫藥微生物生物技術第113頁進行5次沙培林注射治療后，腫瘤顯著消退，取得顯效位于頸部、口底合并舌體巨大海綿狀和混合性淋巴管瘤醫藥微生物生物技術第114頁（3）短小棒狀桿菌

為短小棒狀桿菌（Corynbacterium

parvum）死菌懸液，也是一個強非特異性免疫增強劑,主要經過激活巨噬細胞，使其吞噬活性加強，還可激活NK細胞，增加干擾素產生，協同化療藥品如環磷酰胺抗癌作用。不過在一定條件下抑制細胞免疫應答反應，降低小鼠對第二次腫瘤攻擊抵抗力。

臨床試用于惡性黑色素瘤、乳腺癌及肺小細胞型未分化癌。腹腔注射對癌性腹水也有治療作用。

不良反應和注意：寒戰發燒。轉氨酶升高、血壓波動等。

醫藥微生物生物技術第115頁電鏡照片吞噬細胞正在攻擊細菌醫藥微生物生物技術第116頁惡性腹水治療試驗短小棒狀桿菌

腹腔內注入短小棒狀桿菌可引發纖維性腹膜炎，而包裹腫瘤細胞，降低滲出。有些人曾用其治療乳腺和卵巢癌所致惡性腹水病人，4例中有3例腹水顯著減退。醫藥微生物生物技術第117頁（4）卡介苗卡介苗（BacillusCalmette-Guérin,BCG）是用于結核病疫苗，由減毒活牛分枝桿菌制備；牛分枝桿菌在特殊人工培養基上，經多年傳代，喪失對人類致病能力，但仍保持有足夠高免疫原性，成為可在一定程度上預防結核疫苗。

醫藥微生物生物技術第118頁歷史

卡介苗疫苗創造是來自牛痘經驗。1882年德國柯霍（RobertKoch）首次發覺結核桿菌，在第一次世界大戰期間法國細菌學家卡邁特（Calmette）與他助手介嵐（Guerin）研發了“卡介苗（BCG）”，1919年移交給巴黎巴斯德研究所，1921年首次使用于人體上。人們為了紀念兩位法國科學家卡氏和介氏，故將這種疫苗稱之為卡介苗。

醫藥微生物生物技術第119頁接種卡介苗已被列為國家計劃免疫疫苗之一，卡介苗接種主要對象是新生兒，普通新生兒出生后馬上接種，所以常被稱為“出生第一針”。作用：(1)作為疫苗：預防結核病。不完善一面：即接種卡介苗后并不能確保今后一