一般毒性實驗第1頁/共35頁(二)一般毒性試驗第一節：急性毒性試驗急性毒性參數危險性評估慢性毒性試驗毒作用機制

試驗目的第2頁/共35頁(二)一般毒性試驗第一節：急性毒性試驗經口急性毒性試驗：LD50經呼吸道靜式吸入式急性毒性試驗：LC50經皮膚急性毒性試驗：LD50第3頁/共35頁(二)一般毒性試驗最常用的方法是測定LD50

這又是為什么呢？化學品LD50，mg/kg乙醇10000氯化鈉4000硫酸亞鐵1500硫酸嗎啡900苯巴比妥鈉150印防己毒素（苦味素）5硫酸士的寧（番木鱉堿）2尼古丁1筒箭毒堿0.5密膽堿0.2河豚毒素

0.1二噁英0.001肉毒桿菌毒素0.00001一些常見化學物的急性LD50第4頁/共35頁(二)一般毒性試驗死亡率（%）劑量（mg）010203040506070809010001020304050607080901008單位20格64單位20格20格8單位單位/20格決定了敏感性第5頁/共35頁(二)一般毒性試驗死亡率（%）劑量010203040506070809010001020304050607080901008單位64單位8單位LD50死亡率隨劑量變化最敏感的是中段，由此不難理解將半數致死量作為判定化學物毒性指標的原因。第6頁/共35頁(二)一般毒性試驗

LD50orLC50經典急性毒性試驗

曲線擬合法

Bliss法插值法

累積法、改良寇氏法、霍恩法第7頁/共35頁(二)一般毒性試驗LD50的測定方法優點缺點霍恩法使用動物數少；計算簡便95%可信限范圍大，精確度不夠改良寇氏法計算簡便，準確率高確定最低和最高劑量組序貫法節省動物化學物引起動物快速死亡Bliss法設計要求不太嚴格最精確計算復雜第8頁/共35頁(二)一般毒性試驗

死亡率呈正態分布。最小劑量組的死亡率<20%，最大劑量組的死亡率>80%。劑量按等比級數分組；改良寇氏法適用條件各組動物數應相等；第9頁/共35頁(二)一般毒性試驗觀察時間毒性反應觀察染毒途徑與方式劑量與分組選擇實驗動物某化學物LD50的測定第10頁/共35頁(二)一般毒性試驗種屬和品系：年齡和體重：數量和性別：嚙齒類常用小鼠或大鼠。非嚙齒類常用狗或猴。變異不應超過該批平均體重的20％。小鼠：18～22克。大鼠：180-220克。小動物每組10只。雌雄各半。選擇試驗動物第11頁/共35頁(二)一般毒性試驗最大耐受量試驗。最大耐受劑量，WHO規定經口5g/kg。不死亡，不做。死亡，繼續做。設定1mg/kg為最低劑量組，4、16、64、128mg/kg預實驗。無相關資料有相關資料了解結構和性質相似化學物的毒性資料，確定預期毒性中值。以此與其毒性中值作為待測化學物的中間劑量組，并在該劑量的上下各設2個劑量組為預試驗劑量。劑量與分組第12頁/共35頁(二)一般毒性試驗灌胃、喂食、吞咽膠囊靜式吸入、動式吸入經皮膚染毒經注射染毒定性試驗、定量試驗注射量的規定

經口染毒呼吸道染毒染毒方式第13頁/共35頁(二)一般毒性試驗中毒癥狀死亡情況病理變化

毒性作用觀察第14頁/共35頁(二)一般毒性試驗器官或系統觀察項目中毒后常見的表現皮膚和被毛眼睛植物神經系統呼吸系統泌尿生殖系統CNS和神經肌肉系統

顏色張力眼瞼眼球角膜瞳孔大小腺體分泌鼻呼吸表現陰戶乳腺陰莖行為運動狀態

對刺激反應性

腦脊髓反射肌肉張力皮膚充血紫紺被毛蓬松污穢眼球突出，充血，角膜混濁，血性分泌物散大或縮小流涎流淚鼻孔溢液鼻翼扇動徐緩過速困難衰竭腫脹分泌物增多會陰部污穢脫出體位異常叫聲異常活動異常呆臥少動痙攣抽搐震顫強直麻痹運動失調易興奮感覺遲鈍或過敏反應低下或過高減弱或消失松馳或緊張第15頁/共35頁(二)一般毒性試驗一般為14天觀察時間C57Kunming第16頁/共35頁(二)一般毒性試驗

急性毒性分級急性分級大鼠經口LD50(mg/kg)6只大鼠吸入4h，死亡2-4只濃度(ppm)兔經皮LD50(mg/kg體重)

對人可能致死的估計量g/kg體重g/60kg體重劇毒<1<10<5<0.050.1高毒11050.053中等毒50100440.530低毒50010003505250微毒5000

10000

2180

>15>1000外源化合物的急性毒性分級(WHO，2003)第17頁/共35頁(二)一般毒性試驗第二節：局部毒性試驗皮膚刺激試驗急性眼刺激試驗第18頁/共35頁(二)一般毒性試驗2.1.急性眼刺激試驗觀察時間：7天，可延長至21天觀察指標：結膜、角膜、虹膜染毒方式：一側眼結膜囊內劑量：一次劑量實驗動物：家兔第19頁/共35頁(二)一般毒性試驗2.1.急性眼刺激試驗第20頁/共35頁(二)一般毒性試驗2.2.皮膚刺激試驗觀察時間：不超過14天觀察指標：紅斑、水腫染毒方式：涂抹于動物皮膚上劑量：一次或多次劑量實驗動物：家兔、豚鼠第21頁/共35頁(二)一般毒性試驗2.2.皮膚刺激試驗第22頁/共35頁(二)一般毒性試驗第三節：亞慢性和慢性毒性試驗亞慢性毒性：實驗動物或人連續較長期（約相當于生命周期的1/10）接觸外源化學物所產生的中毒效應。概念第23頁/共35頁(二)一般毒性試驗第三節：亞慢性和慢性毒性試驗慢性毒性：實驗動物或人長期接觸外源化學物所引起的中毒效應。長期對嚙齒類動物至少12個月，也可終身染毒。概念第24頁/共35頁(二)一般毒性試驗A毒性效應譜、毒作用特點、靶器官B毒作用機制、毒作用可逆性C劑量-反應關系D毒效應差異，確定安全系數，結果外推至人亞慢性和慢性毒性試驗主要目的第25頁/共35頁(二)一般毒性試驗

（一）實驗動物選擇

亞慢性毒性試驗

年齡：大鼠50~100g狗4~6月

數量：小動物≥20大動物≤8

性別：雌雄各半

慢性毒性試驗年齡：大鼠50~70g

狗<4月

小鼠初斷乳數量：小動物≥40大動物≥8性別：雌雄各半研究方法第26頁/共35頁(二)一般毒性試驗染毒期限3－6個月預期壽命6個月－1年6個月－1年食品毒理學環境毒理學致癌試驗工業毒理學（二）染毒期限第27頁/共35頁(二)一般毒性試驗經口:鼠常用灌胃、喂飼法。犬用膠囊法。經呼吸道：持續4h。注射染毒：腹腔注射。（三）實驗動物染毒方式第28頁/共35頁(二)一般毒性試驗（四）劑量選擇和分組亞慢性毒性的劑量選擇陰性對照組低劑量組中劑量組高劑量組

急性毒性的閾劑量

1/20~1/5LD50

組距：2~4倍慢性毒性的劑量選擇陰性對照組低劑量組中劑量組高劑量組

亞慢性閾劑量或其1/5~1/21/10LD50

組距：2~10倍第29頁/共35頁(二)一般毒性試驗一般觀察：外觀體征、行為活動、體重、攝食眼部檢查血生化指標尿常規檢查體溫、心電圖檢查病理檢查：大體解剖、組織病理學特