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熒光定量PCR方法：探針法VS染料法？PCRqPCR常常見的分子生物學實驗技術。熒光定量PCR熒光為基礎對核酸進行定量分析，其應用非常廣泛，可以用于檢測基因的表達量(RNA的豐度)，驗證表達譜芯片或轉錄組測序的數據，確定病原體的載量，對片段的拷貝數(CNV)進行分析，對基因進行分型等等。大部分研究者主要的應用是對基因的表達量進行測定，其原理為通過監控反應體系中熒光強度的變化，記錄檢測熒光達到閾值時的循環數(Ct值)。從理論上板量和Ct值密切相關，因此我們通過判讀Ct值從而對樣本進行定PCR時，從技術和產品來說，我們往往會有許多選擇，尤其至關重要。熒光定量PCR從方法上來說可以染料法相對較低，因此會有很多國內研究者會選擇使用染料法進行后續實驗。在染料法熒PCR實驗中，染料能夠與雙鏈結合，從而發光，而在游離狀態下，SYBR量呈比列，且會隨擴增產物的增加而增加。但是染料法檢測的是體系中的所有雙鏈DNA性擴增或者引物二聚體的出現，會極大的影響真實結果的準確ROX為內部熒光參考標準，用來校正背景，但是即便法與探針法相比。另外染料法無法在同一個反應中檢測多個目的片段，對于復雜序列，如果難以擴增的話，也會受到脫靶效應(如引物二聚體)的影響。在這種情況下，就需要在實驗前期進行熔解曲線分析，判斷二、TaqMan探針法TaqMan探針法PCR擴增時，在加入一對擴增引物的同時再加入一個特異性的 (FAM或Hex等)和一個熒光淬滅基團，當探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收，PCR儀檢測不到熒光信號；當PCR擴增時(在延伸階段)，熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步，這也就是探針法定因此我們可以看到，在選擇熒光定量實驗時，探針法在特異性和準確性方面遠遠優于廉價的染料法，但在實際使用時，TaqMan探針高昂的價格常常

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