紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)紅細(xì)胞膜成分

人的紅細(xì)胞胞膜由蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類及無機(jī)離子等組成。脂質(zhì)占50%、蛋白質(zhì)占40%、糖類占8%。磷脂分子比較特殊，它主要有一個(gè)圓球狀的頭部（親水端）和兩個(gè)細(xì)長的尾部（疏水端）。而細(xì)胞膜是由磷脂雙分子層為基本支架，其間鑲嵌著多種膜蛋白。紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)紅細(xì)胞膜的特點(diǎn)：1.膜的不對稱性

2.膜的流動(dòng)性紅細(xì)胞膜缺陷檢驗(yàn)方法紅細(xì)胞膜蛋白電泳分析紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)酸化甘油溶血試驗(yàn)高滲冷溶血試驗(yàn)紅細(xì)胞膜蛋白電泳分析

方法：紅細(xì)胞膜蛋白的十二烷基硫酸鈉聚丙酰胺凝膠電泳原理：SDS與紅細(xì)胞膜蛋白結(jié)合成SDS多肽復(fù)合物，并進(jìn)行SDS電泳，根據(jù)各種膜蛋白相對分子質(zhì)量的不同，得到電泳圖譜，求出各膜蛋白組分百分率應(yīng)用評價(jià)：操作復(fù)雜，但可直接反應(yīng)紅細(xì)胞膜蛋白缺陷，有助于溶貧病因查找，是紅細(xì)胞膜缺陷性疾病診斷的主要依據(jù)紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理：

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)是檢測紅細(xì)胞對不同濃度低滲鹽溶液抵抗力的一個(gè)半定量試驗(yàn)。根據(jù)不同NaCl濃度的低滲鹽溶液中紅細(xì)胞溶血的情況間接反映紅細(xì)胞表面積與容積的比值，反映對低滲鹽溶液的抵抗性。比值愈小，紅細(xì)胞抵抗力愈小，易于破裂，滲透脆性增高；反之抵抗力增大，不易破裂，滲透脆性減低。紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)結(jié)果示意圖紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)結(jié)果示意圖紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)參考范圍：簡易半定量法開始溶血：3.8~4.6g/LNaCl溶液。完全溶血：2.8~3.2g/LNaCl溶液。

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)臨床意義：1.增高

主要見遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥和部分自身免疫性溶血性貧血、遺傳性口型紅細(xì)胞增多癥等。2.減低

主要見于珠蛋白生成障礙性貧血、血紅蛋白C、D、E病，低色素性貧血，阻塞性黃疸，脾切除術(shù)后（紅細(xì)胞胞膜面積增大）、肝炎、肝硬化、肝癌等。某些中藥（如當(dāng)歸）、磁場、紫外線亦可降低紅細(xì)胞滲透脆性。球形紅細(xì)胞橢圓形紅細(xì)胞紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)應(yīng)用評價(jià)1.本試驗(yàn)簡便實(shí)用，但應(yīng)嚴(yán)格控制影響試驗(yàn)因素；本試驗(yàn)敏感性較差，需結(jié)合其他試驗(yàn)項(xiàng)目檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析。2.本試驗(yàn)對溶血性貧血的病因診斷有參考價(jià)值，滲透脆性增高、減低和正常，分別提示溶血可能是由于紅細(xì)胞的膜、血紅蛋白和酶的異常所引起。3.對紅細(xì)胞變形性輕型病例的診斷，采用敏感性更高的紅細(xì)胞滲透脆性孵育試驗(yàn)更有價(jià)值。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)原理：將患者血液置于37℃孵育24小時(shí)，使紅細(xì)胞代謝繼續(xù)進(jìn)行。由于能源葡萄糖的消耗，儲(chǔ)備的ATP減少，紅細(xì)胞膜對陽離子的主動(dòng)傳遞受阻，造成鈉離子在紅細(xì)胞內(nèi)聚集，細(xì)胞膨脹，孵育滲透脆性增加。有細(xì)胞膜缺陷及某些酶缺陷的紅細(xì)胞內(nèi)能源容易耗盡，使孵育脆性明顯增加臨床意義：多用于輕型遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、遺傳性非球形紅細(xì)胞溶血性貧血的診斷與鑒別診斷自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理：紅細(xì)胞在37℃孵育48小時(shí)，其間由于膜異常引起Na+內(nèi)流傾向明顯增加，鈉泵作用增加，ATP消耗過多，或糖酵解途徑酶缺乏所引起的ATP生成不足等原因，導(dǎo)致ATP儲(chǔ)備量減少，鈉泵功能減弱，Na+和水在細(xì)胞內(nèi)蓄積，紅細(xì)胞膨脹，破解溶血，稱為自身溶血試驗(yàn)（autohemolysistest）。在孵育時(shí)，加入葡萄糖或ATP作為糾正物，觀察溶血能否有一定的糾正，稱為糾正試驗(yàn)（correctingtest）。自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)參考范圍：紅細(xì)胞在無菌條件下孵育48小時(shí)，不加糾正物的溶血率一般<4.0%,加葡萄糖的溶血率<0.6%，加ATP的溶血率<0.8%.自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)

臨床意義：1.遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥自身溶血率增加，能被葡萄糖或ATP糾正。2.G6PD缺乏癥等戊糖旁路代謝缺陷的患者自身溶血率增加，能被葡萄糖糾正。3.PK缺乏癥時(shí)，不能利用葡萄糖產(chǎn)生ATP，其自身溶血率明顯增加，不能被葡萄糖糾正，但能被ATP糾正。4.獲得性自身溶血性貧血或自身免疫性溶血性貧血時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果常各有不同，對診斷的意義不大。自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)

應(yīng)用評價(jià)：本試驗(yàn)不夠敏感和特異，僅對遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥有較大的診斷價(jià)值。若結(jié)合其他試驗(yàn)，對多種原因?qū)е碌娜苎载氀蔫b別診斷有參考價(jià)值。酸化甘油溶血試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理：酸化甘油溶血試驗(yàn)（acidifiedglycerinhemolysistest,AGLT）的原理是：當(dāng)甘油存在于氯化鈉磷酸緩沖液的低滲溶液時(shí)，可阻止低滲溶液中的水快速進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，減慢溶血過程。但甘油與膜脂質(zhì)又有親和性，可使膜脂質(zhì)減少，促進(jìn)紅細(xì)胞溶血。檢測時(shí)，吸光度隨溶血的增加而下降。當(dāng)紅細(xì)胞膜蛋白與膜脂質(zhì)有缺陷時(shí)，它們在Ph6.85的甘油緩沖液中較正常紅細(xì)胞溶解速度快，導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液的吸光度下降至起始吸光度一半時(shí)所需的時(shí)間（AGLT50）明顯縮短。酸化甘油溶血試驗(yàn)參考范圍：AGLT50>290s。臨床意義：1.縮短遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥AGLT50可明顯縮短（25~150s），自身免疫性溶血性貧血、腎衰竭、妊娠等AGLT50也可縮短。2.HbH紅細(xì)胞溶解明顯減少，與缺鐵性貧血不同，可作為初篩試驗(yàn)。應(yīng)用評價(jià)：本試驗(yàn)對遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥診斷的敏感性和特異性較高，也是進(jìn)行家系調(diào)查的較理想方法。本試驗(yàn)操作簡單，但應(yīng)準(zhǔn)確配制所用試劑盒，嚴(yán)格控制試驗(yàn)溫度，以保證結(jié)果的可靠性。高滲冷溶血試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理：在高滲狀態(tài)下，溫度驟然變化影響紅細(xì)胞膜脂質(zhì)的流動(dòng)性，并可能累及膜磷脂和膜骨架蛋白結(jié)合位點(diǎn)，紅細(xì)胞容易破裂而發(fā)生溶血。當(dāng)膜蛋白缺陷導(dǎo)致膜表面積與體積比值降低，溶血率明顯增加；反之，溶血率降。本試驗(yàn)即測定紅細(xì)胞在不同濃度高滲緩沖液中，從37℃水浴立即置于0℃水浴一定時(shí)間的最大溶血率。參考范圍：

9mmol/L或12mmol/L蔗糖：最大溶血率66.5%~74.1%。

7mmol/L蔗糖：最大溶血率0.1%~16.9%。高滲冷溶血試驗(yàn)臨床意義：增加遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥明顯增加。降低珠蛋白生成障礙性貧血和異常血紅蛋白病明顯降低。正常自身免疫性溶血性貧血基本正常。應(yīng)用評價(jià)：本試驗(yàn)簡便、易行，無需特殊試劑和儀器，是遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥的篩檢試驗(yàn)之一。紅細(xì)胞膜缺陷檢驗(yàn)方法紅細(xì)胞膜蛋白電泳分析紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)酸化甘油溶血試驗(yàn)高滲冷溶血試驗(yàn)病例女，36歲，因“中期妊娠、重度貧血”入院。既往史：無特殊。查體：貧血面容，心肺查體未見明顯異常，無頭暈、眼花，無胸悶、氣促，無心悸，無惡心、嘔吐，無皮膚瘀點(diǎn)、瘀斑，無咳嗽、咳痰，無腹痛、腹脹，無陰道流血、流水，無血尿、黑便等不適。檢驗(yàn)檢查結(jié)果：網(wǎng)織紅細(xì)胞比率:3.18%，未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞:0.09%，平均網(wǎng)織RBC體積:157.4fLRBC(1012/L)Hb(g/L)Hct(%)MCV(fL)MCH(pg)2016-01-131.086312.8118.558.32016-02-231.265816.0124.6462016-02-290.965414.0145.756實(shí)驗(yàn)室檢查抗核小體抗體：陰性，抗SS-A抗體:陽性(+)，抗SS-B抗體:陰性，抗Sc1-70抗體:陰性，抗Sm抗體:陰性，抗著絲點(diǎn)B蛋白抗體:陰性，抗Jo-1抗體:陰性，抗nRNP/Sm抗體:陰性，抗核糖核蛋白抗體:陰性，抗組蛋白抗體:陰性，抗雙鏈DNA抗體:陰性，抗核抗體定量:141.17U/mL。白蛋白:33.7g/L，總膽紅素:33.7umol/L，直接膽紅素:6.5umo