2/2不能錯過的膠乳標記干貨！01膠乳微球的凝集問：保存在瓶子里的膠乳微球發生凝集沉淀現象該如何處理？通常情況下膠乳微球在2-8℃保存是可以很好的處于懸浮狀態，但如果長時間靜置的情況下仍會由于重力的作用而發生沉淀現象，在使用前用旋渦振蕩以及水浴超聲的方式將微球進行重懸。問：微球在偶聯過程中發生凝集該如何處理？微球在偶聯過程中發生凝集主要分為以下幾種情況：1.當加入EDC后發生凝集：建議降低微球在反應體系中的濃度，同時EDC需緩慢加入，并在加入之后將微球充分混勻；2.當加入抗體后發生凝集：建議嘗試使用水浴超聲的方式看是否可以使微球重懸，如這種凝集現象是可逆的則繼續進行實驗；如不能使微球重懸則考慮提高抗體的濃度再實驗，或嘗試使用其他偶聯緩沖體系。02膠乳微球的偶聯效率問：在偶聯反應之后，發現抗體與微球的偶聯效率低，可能的原因有哪些？可能的原因有以下幾種情況：1.EDC的活性不高，建議檢查EDC是否已經潮解失效，同時EDC和NHS都需現配現用；2.抗體的量不足，建議提高偶聯時抗體的濃度；3.反應緩沖液不適合，建議調整緩沖液的pH值或更換其他緩沖液；4.反應過程中帶入了含有氨基基團的其他蛋白，并與目的抗體發生競爭，建議嚴格檢查所使用的試劑避免微球的非特異性吸附。問：在微球偶聯抗體之后，發現其非特異性吸附較高，可能的原因有哪些？可能的原因有以下幾種情況：1.微球表面基團含量不高，建議使用表面基團更高的微球；2.微球在偶聯過程中發生凝集，聚集的微球容易導致非特異性吸附，建議在偶聯時使用水浴超聲的方式使微球保持懸浮狀態；3.微球沒有封閉完全，建議延長微球封閉的時間或更換其他封閉效果好的封閉劑。03其他相關問題問：單克隆抗體和多克隆抗體在與膠乳微球結合過程中有什么區別？由于單克隆抗體與多克隆抗體具有不同的等電點，在與微球結合的過程中表現是不一樣的。多克隆抗體在其等電點時的偶聯效果較好，這是因為在該pH值條件下抗體的結構處于最佳狀態，同時在微球表面所占據的面積也最小。單克隆抗體要比多克隆抗體具有更好的特異性，但是其與微球的結合力要相對弱一些，同時單克隆抗體通常情況下并不能有效的形成免疫復合物，單克隆抗體的疏水性隨著抗體的成熟度的不同而有所不同。另外，某些單克隆抗體的等電點比較低，在這種低pH條件下膠乳微球會變的不太穩定而容易引起聚集，因此如果想在相同條件下獲得很好的偶聯效果需要調整相應的緩沖液以及pH值等。問：膠乳微球偶聯抗體之后在2-8℃保存一個多月后發生失活，可能的原因是什么？可能由以下幾個方面引起的：1.保存緩沖液中封閉劑的濃度：當封閉劑的濃度過高時會與抗體發生競爭現象；2.抗體的偶聯效率：在偶聯時使用更高濃度的抗體會提高其偶聯效率，使封閉劑不容易與微球發生反應；3.使用PBS緩沖液保存，其他緩沖液可能會對溶液的穩定性產生影響。另外需要注意的是隨著保存時間的推移溶液中的蛋白會變的更容易吸附到微球的表面，這種抗體活性的喪失可能就是這個原因引起的，因為隨著更多蛋白被吸附分子間變的更加的緊密，導致抗體的構象發生改變從而失活，如果確實是這樣的話，那么在偶聯時應該提高