細(xì)胞病理學(xué)(cytopathology)exfoliativecytology）和細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)(fine-needleaspiration。基本檢驗(yàn)技術(shù)一、標(biāo)本采集1、原則：①正確地選擇采集部位：這是細(xì)胞學(xué)診斷的基礎(chǔ)和關(guān)鍵。故要求準(zhǔn)確地選擇采集部位，應(yīng)在病變區(qū)直接采集細(xì)胞。②標(biāo)本須新鮮：盡快制片，防止細(xì)胞腐敗或自溶。③避免干擾物混入，如粘液、血液等。④采集方法應(yīng)簡(jiǎn)便易行，操作應(yīng)輕柔，減輕病人痛苦，避免引起嚴(yán)重并發(fā)癥和腫瘤擴(kuò)散。2、采集方法：①直接采集法，②自然分泌液采集法，③灌洗法，④摩擦法，⑤針穿抽吸法鏡在病灶處直接刷取細(xì)胞制片。（一）自然脫落細(xì)胞標(biāo)本脫落自上皮表面，包括：①咳出：如痰液。②排泄或?qū)颍喝缒蛞骸＂蹟D壓：如乳頭分泌物等。【主要特點(diǎn)】：①易從病變器官獲取標(biāo)本。②標(biāo)本內(nèi)常含大量各種不同來(lái)源、不同類(lèi)型的細(xì)胞，亦可含有炎性細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、微生物和外源性污染物。③細(xì)胞成分保存較差。④能進(jìn)行多次標(biāo)本采集。（二）非自然脫落細(xì)胞指通過(guò)物理刮擦作用取得的細(xì)胞，采集方法包括：①刷取：如氣管、子宮頸。②刮取：如乳頭、皮膚、子宮頸。③灌洗：用生理鹽水溶液沖洗所得液體，如支氣管。①能直接從病變器官表面采樣，如子宮頸和支氣管。②使用纖維鏡能直接從不能采用與脫落細(xì)胞相同的標(biāo)準(zhǔn)。（三）細(xì)針穿刺細(xì)胞標(biāo)本觸摸的病變部位定位。①通過(guò)觸摸或?qū)бǎ蓮捏w內(nèi)任何實(shí)體器官采集標(biāo)本。②方法簡(jiǎn)捷、費(fèi)用性病變、大量壞死物、囊性變或出血性病變等，可導(dǎo)致標(biāo)本采集不足。二、涂片制作潔光滑無(wú)油漬，先用硫酸洗滌液浸泡沖洗，再用75％乙醇浸泡。④涂片須牢固防止脫落。含有蛋白質(zhì)的標(biāo)本可直接涂片3~5（生理鹽水或運(yùn)送培養(yǎng)基）進(jìn)行濃縮處理后再涂片，適用于細(xì)胞少的標(biāo)本。（如牛血清清蛋白（如多聚賴(lài)氨酸增強(qiáng)細(xì)胞和載玻片之間黏附力，最大限度的保存標(biāo)本中所有細(xì)胞。1小滴標(biāo)本放在玻片偏右側(cè)端，把玻片上的檢液用推片作30°夾角輕輕向左推。②涂抹法：適用于稍稠的標(biāo)2張玻片之間，分別移動(dòng)22三、標(biāo)本固定固定的目的是要保持細(xì)胞的自然形態(tài)，以防細(xì)菌導(dǎo)致腐敗和細(xì)胞自溶。固定液容易著色。因此，固定愈及時(shí)，標(biāo)本愈新鮮，細(xì)胞結(jié)構(gòu)愈清晰，染色效果愈佳。細(xì)胞學(xué)檢查常用固定液有下面3種：又稱(chēng)卡諾②乙醇乙醚固定液：優(yōu)③95涂片后標(biāo)本尚未干燥即行固定的方法稱(chēng)帶濕固定。食管拉網(wǎng)、痰液及陰道分泌物涂片等常用。適于巴氏染色或HE②四、標(biāo)本濃縮技術(shù)（一、傳統(tǒng)技術(shù)1、離心法和細(xì)胞離心法：①離心法適用于大量液體標(biāo)本，如漿液性積液、尿液或生理鹽水2、濾膜過(guò)濾法：適用于大量液體、少量細(xì)胞的標(biāo)本，是用各種孔徑的濾膜，通過(guò)施加一定的細(xì)胞。3、細(xì)胞塊法：適用于大多數(shù)懸液標(biāo)本，是將標(biāo)本中細(xì)胞聚集成團(tuán)，形成與傳統(tǒng)組織塊類(lèi)似的細(xì)胞塊，可制作細(xì)胞塊切片，用于特殊染色。制備方法有血漿凝血酶法和瓊脂法等。（二液基細(xì)胞學(xué)（LBC）是一種半自動(dòng)或全自動(dòng)標(biāo)本處理新技術(shù)，是將刷取或灌洗蛋白和炎性滲出物，制成分布均勻的薄片。本質(zhì)是濾膜過(guò)濾法實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化。五、染色方法許多用于組織切片的染色方法也適用于細(xì)胞病理學(xué)涂片巴氏染色法適用于濕固定涂片。蘇木素和伊紅染色法染色法）SchiffZie-hl-NeelsenGram染色和Grocott等。適用上皮細(xì)胞染色或陰道涂片中觀察此方法的缺點(diǎn)是染色程序較復(fù)雜。②蘇木素-伊紅染色法（hemotoxylin-eosin，H-E）染色特點(diǎn)：透明度好，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)對(duì)比鮮明，染色效果穩(wěn)定。細(xì)胞質(zhì)染成淡玖瑰紅色，細(xì)胞核染成紫藍(lán)色適用于痰液涂片。③瑞氏-吉姆薩染色法（Wright-Giemsastaining）此方法多用于胸腹水、前列腺、針吸細(xì)胞學(xué)及血液、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查操作簡(jiǎn)便。六、細(xì)胞病理學(xué)診斷【鏡檢原則】：確客觀的診斷。②閱片時(shí)：責(zé)任心要強(qiáng)：要求認(rèn)真、耐心、細(xì)致，嚴(yán)格按規(guī)定程序觀察涂片進(jìn)行診斷。鏡仔細(xì)觀察，作出準(zhǔn)確診斷。涂片內(nèi)每一個(gè)視野，最后仔細(xì)觀察蓋片邊緣，防止漏檢。有效的標(biāo)記：對(duì)具有診斷意義的異常細(xì)胞，應(yīng)該用標(biāo)記筆在其左右上下方作出標(biāo)記，或用圓圈標(biāo)記，這樣有利于進(jìn)行復(fù)查、教學(xué)和研究。標(biāo)記的方法應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)統(tǒng)一。【報(bào)告方式】：直接法directmetho胞學(xué)檢查，直接提出疾病的診斷，如“肺支氣管鱗狀細(xì)胞癌分級(jí)法：用分級(jí)形式來(lái)表示細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞改變，可以真實(shí)客觀地反映細(xì)胞學(xué)所見(jiàn)。改良巴氏5級(jí)分類(lèi)法Ⅰ級(jí)：涂片內(nèi)未見(jiàn)到異常細(xì)胞（基本正常Ⅱ級(jí)：涂片內(nèi)可見(jiàn)異常細(xì)胞，但皆為良性。Ⅱa級(jí)：見(jiàn)輕度核異質(zhì)細(xì)胞和變形細(xì)胞等。Ⅱb級(jí)：見(jiàn)中到重度核異質(zhì)細(xì)胞，屬于癌前期病變，需要定期復(fù)查。Ⅲ級(jí)：見(jiàn)可疑癌（惡性）Ⅳ級(jí)：見(jiàn)癌細(xì)胞，但是不夠典型或數(shù)量極少，需要進(jìn)一步證實(shí)。Ⅴ級(jí)：見(jiàn)癌細(xì)胞，其形態(tài)典型而且數(shù)量較多，如有可能區(qū)分出其組織學(xué)類(lèi)型。【質(zhì)量保證】1、標(biāo)本采集：只有采集到合格的標(biāo)本，作出的診斷才是可靠的。各種標(biāo)本中應(yīng)該出現(xiàn)有效如塵細(xì)胞，才是真正的深部痰。2HE染色，必須帶濕固定，使細(xì)胞評(píng)價(jià)細(xì)胞學(xué)診斷準(zhǔn)確性和可靠性有助于比較各種不同檢驗(yàn)技術(shù)的性能【形態(tài)學(xué)判斷的基本原則】才能做出最終結(jié)論。（一）細(xì)胞數(shù)量和類(lèi)型此，足夠量的標(biāo)本是提高結(jié)果解釋可靠性的重要因素。（二）結(jié)構(gòu)特征在細(xì)胞學(xué)涂片中常常缺乏細(xì)胞結(jié)構(gòu)特征，而采集大量細(xì)胞時(shí)能顯示組織學(xué)特征。觀呈“蜂窩狀性，呈特殊的外觀，如乳頭狀、玫瑰花樣或桑椹樣結(jié)構(gòu)。合胞體樣細(xì)胞的邊界改變和極性紊亂，應(yīng)考慮腫瘤可能。典型的惡性上皮細(xì)胞的極性差，細(xì)2個(gè)主要特征。惡性基質(zhì)細(xì)胞（肉瘤）與良性基質(zhì)細(xì)胞類(lèi)似，但細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)多異常。（三）細(xì)胞核特征 判斷良性與惡性細(xì)胞的關(guān)鍵①若核DNA含量增加會(huì)產(chǎn)生核染色致密，即染色過(guò)深，邊界不規(guī)則，呈溝狀、切跡狀、皺縮狀。③核大小、形態(tài)和染色異常又稱(chēng)并常用核質(zhì)比（N/C）來(lái)表達(dá)細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的相對(duì)比例，分化差的細(xì)胞常具大核，而細(xì)胞質(zhì)的量無(wú)變化，故核質(zhì)比增大。變性染色質(zhì)常呈致密濃縮狀物質(zhì)，稱(chēng)為核固縮（karyopyknosis色質(zhì)溶解。（四）細(xì)胞質(zhì)特征細(xì)胞質(zhì)由Golgi體、核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體或代謝物等組成，是影響細(xì)胞染色性重要因素細(xì)胞溶解cytolysis。（五）涂片背景和人為因素1胞腫瘤素質(zhì)（tumordiathesis。21）內(nèi)源性：如蔬菜和肉類(lèi)纖維、膽固醇結(jié)晶等（2）外源性：如染液沉淀物、滑石粉顆粒等。稱(chēng)為交叉污染。（六）顯微鏡篩檢原則1、觀察全片獲取基本信息先用10210403、明確2個(gè)問(wèn)題：①細(xì)胞群體與器官來(lái)源有何關(guān)系？②如細(xì)胞群體異常，則是非特異性異常抑或明確異常？正常細(xì)胞形態(tài)學(xué)（括細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核）的特點(diǎn)，將細(xì)胞分為上皮源性細(xì)胞和非上皮源性細(xì)胞。一、上皮細(xì)胞4鱗狀上皮、分泌性腺上皮、纖毛上皮和間皮細(xì)胞。（一）鱗狀上皮細(xì)胞：亞型：外陰內(nèi)層和子宮頸陰道口。細(xì)胞學(xué)：在細(xì)胞學(xué)涂片上，鱗狀上皮細(xì)胞形態(tài)完整。多數(shù)鱗狀上皮細(xì)胞呈扁平邊界清晰，大小與來(lái)源有關(guān)，鱗狀上皮由多層上皮組成，通常分為410μ核漿比為1（0.1。②副底層細(xì)胞：直徑約為10-1μm，由2-3層圓形細(xì)胞組成，核漿比為11～2。③中層細(xì)胞：直徑約為15-4μ，由數(shù)層多邊形細(xì)胞組成，核漿比為1（～3。④表層細(xì)胞：最大，直徑約為40-6μ，由各種多邊形細(xì)胞組成，核漿比為1:（～5基底層、副底層、中層的細(xì)胞核呈球圓形或卵圓形，染色質(zhì)顆粒疏松，直徑約8μm。縮。（二）分泌性腺上皮細(xì)胞面導(dǎo)管相連形成腺體，或單個(gè)散在分布，如呼吸道纖毛上皮中的杯狀細(xì)胞。10-20μm，寬約10μm，具有極性。（三）纖毛上皮細(xì)胞或黏液相關(guān)物質(zhì)的分泌細(xì)胞同時(shí)出現(xiàn)，如杯狀細(xì)胞。液并排出。細(xì)胞學(xué)：在細(xì)胞學(xué)涂片上，纖毛細(xì)胞很容易識(shí)別，通常呈柱狀，罕見(jiàn)立方形，一側(cè)扁平，常固定在細(xì)胞的致密層（終板）胞就是纖毛細(xì)胞。纖毛細(xì)胞的長(zhǎng)度和寬度不定，在呼吸道中，纖毛細(xì)胞長(zhǎng)約20-25μm，寬約10μ8μm在惡性腫瘤細(xì)胞學(xué)涂片中罕見(jiàn)纖毛細(xì)胞。（四）間皮細(xì)胞間皮。間皮調(diào)節(jié)體腔內(nèi)的液體的量和組液，間皮層增厚。本，間皮細(xì)胞常成片或成團(tuán)排列。二、非上皮細(xì)胞（小題為主）（一）內(nèi)皮細(xì)胞和特殊組織細(xì)胞腺和生殖器官等，由各種特殊類(lèi)型的細(xì)胞組成。（二）支持系統(tǒng)支持系統(tǒng)具有支持、傳遞和防御等功能，如肌肉、神經(jīng)和骨髓等。其中。防御系統(tǒng)（免疫具有很大意義。TB胞2.巨噬細(xì)胞或組織細(xì)胞：巨噬細(xì)胞具有吞噬外來(lái)物質(zhì)的能力，如細(xì)菌、真菌、原蟲(chóng)和異物等。起源于骨髓單核細(xì)胞，并在各個(gè)組織器官中分化成熟。而組織細(xì)胞源自巨噬細(xì)胞LanghansTouton（三）血細(xì)胞（如月經(jīng)周期）和病理性的（創(chuàng)傷）細(xì)胞損傷形態(tài)學(xué)光學(xué)顯微鏡下，細(xì)胞損傷引起細(xì)胞病理學(xué)變化有3）死亡（壞死或凋亡2）短暫或永久性形態(tài)學(xué)變化細(xì)胞。一、細(xì)胞死亡壞死，兩者既有區(qū)別又有聯(lián)系。（一DNA185（二）稱(chēng)為核均化然后細(xì)胞膜破壞，細(xì)胞完整性喪失，最后形成細(xì)胞碎片、核碎片或核絲，被核染液染成藍(lán)色。常與周?chē)M織的炎癥有關(guān)。二、修復(fù)和再生鄰近上皮更新，結(jié)締組織由成纖維細(xì)胞再生。并可見(jiàn)異常有絲分裂，易與癌細(xì)胞混淆。易于結(jié)締組織惡性腫瘤或肉瘤混淆。三、良性上皮異常（一核仁，易誤認(rèn)為小型惡性細(xì)胞。（二（三）增生和萎縮1在細(xì)胞學(xué)涂片上，除非增生細(xì)胞發(fā)生明顯不典型改變，否則很難識(shí)別。2、萎縮：正常發(fā)育的器官、組織、細(xì)胞發(fā)生物質(zhì)代謝障礙而引起的體積減小。在細(xì)胞學(xué)涂片上，很難判斷萎縮上皮細(xì)胞。四、非腫瘤性疾病細(xì)胞學(xué)變化（小題為主）（一）炎癥性疾病:分為急性、亞急性和慢性。1、急性炎癥：在細(xì)胞學(xué)涂片上，可見(jiàn)中性粒細(xì)胞增多以及壞死物質(zhì)，伴少量淋巴細(xì)胞等。或發(fā)展為慢性炎癥。2、亞急性炎癥：較少見(jiàn)，可見(jiàn)于寄生蟲(chóng)感染。在細(xì)胞學(xué)涂片上，可見(jiàn)少量壞死組織、嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等非特異性變化。34、肉芽腫性炎癥：是一種特異性炎癥的形式，由上皮樣細(xì)胞（類(lèi)似上皮細(xì)胞的巨噬細(xì)胞）組成，伴有多核巨細(xì)胞。常見(jiàn)于結(jié)核桿菌或霉菌感染等。（二）特殊感染性物質(zhì)的識(shí)別五、細(xì)胞損傷的其他變化（一較少見(jiàn)，多發(fā)生于炎癥過(guò)程，可見(jiàn)于癌組織周?chē)＜?xì)胞核輕度至中度（二（如支氣管上皮或腺上皮（三）、細(xì)胞內(nèi)脂肪儲(chǔ)存時(shí)，可見(jiàn)細(xì)細(xì)胞質(zhì)空泡。腫瘤細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)腫瘤是機(jī)體內(nèi)形成的新生組織，可以是良性的，也可以是惡性的。一、良性腫瘤（一）定義和分類(lèi)織或器官。良性腫瘤常表現(xiàn)為上皮細(xì)胞增生，伴有結(jié)締組織和毛細(xì)血管增生。（二）細(xì)胞學(xué)特征12.間質(zhì)源性良性腫瘤細(xì)胞：如脂肪瘤、平滑肌瘤和纖維瘤，通過(guò)細(xì)針吸取法獲取標(biāo)本3很難作出正確診斷。二、惡性腫瘤（一）定義和分類(lèi)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)道或血道。1癌：2種類(lèi)型細(xì)胞的稱(chēng)為腺鱗癌或黏液表皮樣癌。2肉瘤：良性細(xì)胞與惡性細(xì)胞的形態(tài)學(xué)區(qū)別二、細(xì)胞學(xué)特征（小題多）的起源和類(lèi)型。12、細(xì)胞形態(tài)：惡性細(xì)胞形態(tài)異常不常見(jiàn)，特別是進(jìn)展期腫瘤，多數(shù)與正常細(xì)胞形態(tài)類(lèi)似。組織或上皮組織。在診斷前，必須考慮細(xì)胞核特征。3、細(xì)胞黏附性：黏附性差是癌細(xì)胞主要形態(tài)學(xué)特征之一。在細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)涂片上，癌細(xì)4、細(xì)胞核：核異常是癌細(xì)胞主要形態(tài)學(xué)特征之一。大小：與已知大小的細(xì)胞進(jìn)行比較，如紅細(xì)胞（約7μm）或良性細(xì)胞核等。正常細(xì)胞G2（1%-2%）的核體積大。大多數(shù)惡性細(xì)胞有核增N/C為核大小不一，與染色體數(shù)量或腫瘤干細(xì)胞有關(guān)。N/C增大，應(yīng)高度懷疑為癌細(xì)胞。核染色：采用恰當(dāng)?shù)娜玖希ㄈ缣K木素）。（Barr小體實(shí)質(zhì)是失活的女性X22個(gè)以上Barr小體稱(chēng)為X核膜：多數(shù)癌細(xì)胞核膜增厚