標準解讀

《GB/T 34777-2017 中國倉鼠卵巢(CHO)細胞表達產品殘留DNA檢測 熒光定量PCR法》是一項國家標準，旨在規范使用熒光定量PCR技術檢測由中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系生產的生物制品中可能存在的宿主細胞DNA殘留量的方法。該標準適用于采用CHO細胞作為宿主細胞生產重組蛋白、抗體等生物制品過程中產生的最終產品或中間產物中的殘留DNA含量測定。

標準詳細描述了實驗所需材料與設備，包括但不限于：樣品處理所需的試劑耗材；用于提取DNA的試劑盒；熒光定量PCR儀及其配套軟件；以及特異性針對CHO細胞基因組DNA設計的引物和探針等。此外，還提供了具體的實驗步驟，如樣本前處理、DNA提取純化、熒光定量PCR反應體系建立及循環條件設定等內容，并強調了每一步操作中需要注意的關鍵點以確保結果準確性。

對于質量控制方面，《GB/T 34777-2017》規定了陽性對照品、陰性對照品以及內參的選擇要求，同時給出了最低檢出限、線性范圍、精密度和特異性等方面的性能指標。通過這些措施保證了不同實驗室間檢測結果的一致性和可靠性。

最后，標準還介紹了數據處理方法，如何根據Ct值計算出樣品中CHO細胞DNA的具體濃度，并對可能出現的問題提供了解決方案。這為從事相關領域研究和技術人員提供了科學依據和技術指導，有助于提高我國在生物制藥行業內的產品質量控制水平。


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  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2017-11-01 頒布
  • 2018-05-01 實施
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GB/T 34777-2017中國倉鼠卵巢(CHO)細胞表達產品殘留DNA檢測熒光定量PCR法_第1頁
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文檔簡介

ICS07080

A40.

中華人民共和國國家標準

GB/T34777—2017

中國倉鼠卵巢CHO細胞表達產品

()

殘留DNA檢測熒光定量PCR法

DetectionofresidualDNAinbiologicalproductwhichexpressedfrom

ChinesehamsterovarCHOcell—

y()

Fluorescentquantitativepolymerasechainreactionassay

2017-11-01發布2018-05-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

中國倉鼠卵巢CHO細胞表達產品

()

殘留DNA檢測熒光定量PCR法

GB/T34777—2017

*

中國標準出版社出版發行

北京市朝陽區和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區三里河北街號

16(100045)

網址

:

服務熱線

:400-168-0010

年月第一版

201711

*

書號

:155066·1-58352

版權專有侵權必究

GB/T34777—2017

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國生化檢測標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標準起草單位信達生物制藥蘇州有限公司中國測試技術研究院生物研究所

:()、。

本標準主要起草人孫左宇周李華李雪峰黃曉剛袁志軍郭燕紅

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T34777—2017

中國倉鼠卵巢CHO細胞表達產品

()

殘留DNA檢測熒光定量PCR法

1范圍

本標準規定了檢測殘留宿主的熒光定量法

DNAPCR。

本標準適用于中國倉鼠卵巢細胞宿主細胞系表達的生物制品的殘留宿主的檢測

CHO()DNA。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

31

.

Ct值cyclethreshold

每個反應管內熒光信號達到設定閾值時所經歷的循環數

。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

中國倉鼠卵巢

CHO:(ChineseHamsterOvary)

5原理

以真核細胞基因組中具有高拷貝數的為目的基因設計特異性擴增該基因的引

16SrRNA,PCR

物包括正向引物和反向引物

,:ForwardPrimer(5'-CCAGGCATTGGTGGCAC-3'):ReversePrimer

(5'-AGACAGGGTTTCTCTGT-3')。

采用熒光定量法采集熒光繪制出的擴增曲線值與擴增體系中起

SYBRPCR(FQ-PCR),PCRCt,

始目的基因模板的對數值呈反比以起始模板對數值為縱坐標值為橫坐標制作標準曲線

,DNA,Ct,。

根據標準曲線方程計算樣品的殘留量從而達到定量檢測樣品殘留的含量目的

DNA,DNA。

6儀器設備

61熒光定量儀含有熒光染料檢測通道

.PCR:SYBR。

62紫外可見分

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