動物生理學實驗2023/2/42實驗一

白細胞的計數思考題注意事項方法步驟材料設備基本原理實驗目的【實驗目的】了解白細胞計數原理，學習其測定方法。2023/2/43【基本原理】白細胞簡介白細胞是血液中非常重要的一類細胞，通常被稱為免疫細胞，存在于血液、淋巴及血管、淋巴管以外的組織中。白細胞在人體中擔負許多重任，它具有吞噬異物并產生抗體的作用，機體傷病的損傷治愈能力，抗御病原體入侵的能力，對疾病的免疫抵抗力等。人身體有不適時，經常會通過白細胞數量的顯著變化而表現出來。因此到醫院看病很多情況下需要化驗血常規，血常規檢查中最多用途的就是白細胞計數和分類。正常值范圍：（單位為10個/L）新生兒為（15-20）×109個/L6個月到2歲為（11-12）×109個/L4到14歲為8×109個/L成人為（4.0-10.0）×109個/L臨床意義：增多：常見于急性細菌性感染、嚴重組織損傷、大出血、中毒和白血病等。減少：鎮痛藥、磺胺類藥的服用；病毒感染；免疫系統衰弱；放化療的影響。2023/2/44實驗原理用特制的微量吸管吸取一定量的血液，經稀釋后置于血細胞計數板的計數室內，在顯微鏡下計數一定體積的血細胞數，再將所得的結果換算成每mm2或1L血液內的血細胞數。在醫學臨床上已使用血細胞分析儀使血細胞計數工作自動化。血細胞計數板血細胞分析儀【方法步驟】2023/2/451、采血和稀釋用移液管吸取3.98mL的白細胞稀釋液至試管中備用；用酒精棉球消毒采血部位，干燥后，用消毒過的采血針刺破皮膚，使血液流出；第一滴血用干棉球拭去不要，當第二滴血積聚較多時，用微量毛細吸血管準確吸取血液20μL，擦凈管外粘附的血液，然后將血液輕輕吹入盛有稀釋液的試管底部，并用上清液清洗吸血管2~3次，輕輕搖動試管使血液與稀釋液充分混勻。2023/2/462、血細胞計數板的構造計數板為一長方形厚玻璃板，中間有四條平行槽溝，在中間的兩條槽溝之間，有一條橫槽溝，使其構成兩個長方形的平臺；平臺幣整個玻璃板的平面低0.1mm，當放上一塊蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間的距離為0.1mm；兩平臺中心部分各有一個計數室，劃分為9個大方格，每個大方格面積為1mm2，體積為0.1mm3，四角的大方格又分為16個中方格，用于白細胞計數。計數室只能用自來水和蒸餾水相繼沖洗，然后用絲絹輕輕拭凈，不能用酒精和乙醚洗滌。洗凈后在低倍鏡下熟悉計數室的構造。2023/2/47血細胞計數板的計數室放大圖【方法步驟】2023/2/483、計數方法將計數室上的蓋玻片放妥并置于顯微鏡上，用潔凈的玻璃棒蘸取少量已稀釋并混勻的血細胞懸液，在計數室和蓋玻片交界處一次性滴入計數室，使之灌滿，滴入計數室的血細胞懸液不得過多或過少；靜置2~3min待血細胞下沉；在低倍鏡下檢查白細胞分布是否均勻，之后計數計數室四角的4個大方格中所有的白細胞總數。注意：顯微鏡的載物臺應絕對平置，不能傾斜，以免血細胞一邊集中。光線不必過強。【方法步驟】2023/2/494、計算加20μL血液于0.38mL白細胞稀釋液中，血液被稀釋20倍。共計數4個大方格的白細胞總數，一個大方格的容積,0.1mm3，4個方格的總容積為0.4mm3；白細胞數/mm3=4個大方格的細胞總數÷0.4×20。1L=1×106mm3正常值范圍：

成人為（4.0~10.0）×109個/L【注意事項】2023/2/410采血部位消毒后，涂一層凡士林可以使血液成滴便于吸收。吸血時將吸管下端開口放入血液中部，盡量利用毛細管現象使血液自動進入吸管內。血液加入試管后，須充分搖勻，動作要輕，避免出現氣泡和破壞血細胞。細胞懸液滴入計數室的液量要適當。過多則混懸液溢出并流入兩側深槽內，使蓋玻片浮起，導致計數不準。滴入量過少則不能充滿計數室，反復充液可能造成計數室內有氣泡，影響計數室體積，此時應洗凈計數板，干燥后重做。計數室內細胞分布要均勻。如果發現各大格的白細胞數目相差8個以上，表示血細胞分布不均勻，應重做。所用吸管、試管、計數板等必須十分干凈，各種稀釋液嚴防混入雜質或有細菌生長。計數板等用過之后，必須立即洗滌干凈。【實驗報告書寫要求】2023/2/411題目實驗目的實驗原理材料設備方法步驟實