ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31792—2015

向日葵莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofDiaporthehelianthiMuntanola-Cvetkovic

MihaljcevicetPetrov

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T31792—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可中心中華人民共和國(guó)新疆出

:、、

入境檢驗(yàn)檢疫局

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人吳品珊杜洪忠蔡露敏張祥林嚴(yán)進(jìn)

:、、、、。

Ⅰ

GB/T31792—2015

向日葵莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了向日葵莖潰瘍病菌的檢疫鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于向日葵植株和種子中向日葵莖潰瘍病菌的檢疫和鑒定

。

2儀器和用具

21儀器

.

體視顯微鏡生物顯微鏡超凈工作臺(tái)光照培養(yǎng)箱電子天平高壓滅菌鍋冰箱

、、、、(1/1000g)、、、PCR

擴(kuò)增儀熒光擴(kuò)增儀電泳儀凝膠成像儀高速冷凍離心機(jī)恒溫水浴鍋

、PCR、、、、。

22用具

.

燒杯三角瓶量筒試管培養(yǎng)皿酒精燈鑷子剪刀解剖刀接種針載玻片蓋玻片塑料研杵

、、、、、、、、、、、、、

移液器移液器吸頭離心管液氮罐樣品篩目?

、、、、(10,1.7mm)。

3試劑和培養(yǎng)基

31試劑

.

葡萄糖鏈霉素乳酸瓊脂次氯酸鈉液氮

,,,,1.0%(NaClO),,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA,NaOH,

無(wú)水乙醇三氯甲烷異丙醇異

NaOAc,KCl,Tris,CTAB,TAE,(Ethanol),(Chloroform),(Isopropanol),

戊醇核酸染料蛋白酶Taq聚合酶通用引物

(Isoamylalcohol),SYBRGreenⅠ,K,DNA,dNTP,ITS5

和實(shí)時(shí)熒光特異性引物及探針

ITS4,PCRDH-F、DH-RDH-Pr。

32培養(yǎng)基

.

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基鏈霉素馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基具體配方參見(jiàn)附

(PDA),(SPDA)。

錄

A。

4檢疫鑒定方法

41癥狀檢查

.

采集田間疑似癥狀的莖桿病葉或葵盤剪取病健交界處的組織材料備用病害典型的癥狀是莖桿

、,。

和葉柄處有淡褐色潰瘍病斑詳見(jiàn)附錄病害癥狀描述

,A。

在種子中挑選干癟變色皺縮殘缺或霉變的種子同時(shí)挑選其中夾帶的向日葵殘?bào)w如葉柄莖

、、、,,、

桿花盤碎片等

、。

42分離培養(yǎng)

.

將有疑似癥狀的葉片葉柄莖桿花盤碎片等樣品在病健交界處剪取的小