微核的誘導和檢測一、實驗目的了解微核測試的原理和毒理遺傳學在實際生活與工作中的應用范圍及意義學習蠶豆根尖的微核測試技術二、實驗原理微核簡稱(MCN)，是真核生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生。在細胞間期微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外、大小應在主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產生的，但有些實驗也證明整條的染色體或多條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在細胞分裂末期被兩個子細胞核所排斥便形成了第三個核塊污染物：1?紫外線；紫外線的波長與DNA蛋白的最大吸收量波長相符合，染色體的蛋白質能夠吸收紫外線總的能量，從而處于激活狀態，從而引起一系列的DNA損傷。過量的紫外輻射可引起細胞內DNA堿基發生突變、DNA斷裂、DNA.DNA交聯、DNA.蛋白交聯以及染色體畸變等損傷。DNA損傷若不能及時修復，細胞將發生癌變或死亡，不同劑量紫外線對細胞DNA的損傷模式不同，可能引起的微核率也不一樣2.CuSo4；因為重金屬抑制和干擾了G1期觸發蛋白的合成，限制了由G1期進入S期。因此，微核的形成是S期DNA受到損傷的結果微核測試是一種比較理想的方法。且有研究顯示以植物進行微核測試與以動物進行的一致率可達99%以上。目前微核測試已經廣泛應用于輻射損傷、輻射防護、化學誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。利用蠶豆根尖作為實驗材料進行微核測試，可準確的顯示各種處理誘發畸變的效果，并可用于污染程度的監測。三實驗器具和藥品實驗器具：10W紫外燈、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、培養皿、濾紙實驗藥品：卡諾固定液（95%酒精:冰醋酸3:1）；70%乙醇；卡寶品紅染色劑；硫酸銅溶液（10?0mg/L）實驗材料：蠶豆根尖四實驗步驟：（一）（二）（三）染毒處理：1?取出5組根尖，用10W紫外燈距離分別，26cm照射，）分別照射0min,20min,25min,30min,35min（紫外線照射25min時能觀察各種畸變類型,且畸變率較高），制片觀察微核數。2.重金屬處理：取出若干個蠶豆根尖，分別用硫酸銅溶液濃度（0、0?1、0?2、0.5、1.0、5.0和10.0mg/L），每個濃度梯度下分別處理其根尖24小時。誘變處理后，用清水沖洗根表面的溶液；（四）固定：取0?5—1厘米的根尖，投人卡諾固定液（95%酒精:冰醋酸3:1）中，4°C條件下固定24h。用70%乙醇沖洗2次。（轉入70%乙醇中置4C冰箱中保存待用）（五）染色截取前端1一1?5毫米長的淡黃色部分（生長點），用另一塊載玻片與前者交叉成十字形壓片，將材料壓成薄層。揭片后，兩塊載玻片的中間部分都粘有相似的一薄層材料，將其中一塊載玻片上的薄層材料用少量蒸餾水沖到另一塊上，滴l一2卡寶品紅染色劑，用鑷子將生長點搗碎，染色10min,將染液吸凈后，再滴加蒸餾水，小心加上蓋玻片，注意防止大量氣泡產生，然后再覆蓋吸水紙，用大拇指輕壓，或用鉛筆的一頭敲壓，使染色區呈云霧狀。（六）鏡檢每個根尖觀察1000個左右細胞，觀察并統計微核數。五數據分析1.計算各測試樣品（包括對照組）微核千分率（MCN%。）X1000%.X1000%.某測試樣品（威對照1觀察到的細胞數六預期結果1.紫外線照射25min時能觀察各