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文檔簡介

XIAOLIFEIDAO縣人民醫院同源性

分析標準操作預案方案及程序［鍵入文檔副標題］李生曉夢［選取日期］縣人民醫院同源性分析標準操作預案方案及程序制定本方案是指當醫院發生各類突發意外事件或情況時,各科室能及時采取的行動措施，為了讓全體醫務人員不斷提高處置各種突發事件的水平和能力，熟悉和掌握應急處置的工作程序，建立統一指揮，職責明確、運轉有序、反響迅速、處置有力的運行體系，結合我院實際，特制定本方案。一、同源性分析的應用包括感染爆發的判斷，感染病原菌確實定及感染源的尋找。二、基本方法1、細菌的表型特征分型技術（如血清型、耐藥表型等）。2、基因分型技術（如、PFGE、Rep—PCR、AFLP等）。三、操作步驟（一）表型分型（血清型、耐藥表型）1、標本孵育：從患者感染部位采集標本，并接種于相應培養基（培養瓶）中孵育。2、別離菌種：別離病原菌（細菌或真菌），并鑒定細菌（真菌）種類。3、血清分型：如可能那么對同種細菌進行血清分型，如軍團菌等。4、藥敏試驗：根據細菌（真菌）種類選擇藥敏卡（紙片），進行藥敏試驗。5、結果分析：分析血清型和藥敏譜，如結果相同或藥敏相差不大那么提示有同源性。（二）基因分型（PFGE）1、菌栓制備：將細菌懸液與2%低熔點瓊脂糖凝膠混合,制備菌栓。2、細菌消化：分別用含溶菌酶和（或）蛋白酶K的裂解液對菌栓進行消化。3、洗滌菌栓：可用無菌水反復清洗或PMSF中和多余的蛋白酶Ko4、酶切：按照各種不同限制性內切酶的說明進行酶切。5、制膠：用PFG巨電泳凝膠模具制備：PF（逼級瓊脂糖凝膠。6、電泳：根據不同細菌酶切片段的大小選擇適當的脈沖參數，進行電泳。7、凝膠成像：膠塊染色后在凝膠成像儀下成像。8、結果分析：根據Tenover等制定的標準對凝膠圖像進行分析，判斷菌株之間的同源性。四、考前須知1、不同的分型方法，在分型能力、重復性、分辨能力、操作和本錢等方面都不盡相同，可根據情況進行選擇。2、表型分型方法的分辨能力普遍比基因分型方法低，但簡便、快速，適用于對感染爆發的初篩。3、基因分型方法需要特殊實驗器材

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