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文檔簡介
位點特異性重組第一頁,共三十三頁,2022年,8月28日Introduction保守性位點特異性重組(conservativesite-specificrecombination,CSSR)轉座重組(transpositionalrecombination)P319第二頁,共三十三頁,2022年,8月28日P320第三頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)P320第四頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)1.1重組位點Duringλintergration,recombinationalwaysoccursatexactlythesamenucleotidesequenceswithinthetworecombinationsites,oneonthephageDNAandtheotheronthebacterialDNA.P321第五頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)1.1重組位點①重組酶識別序列對稱分布②交換區(crossoverregion)重組位點重組位點①①①①②②P321第六頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)1.2重組結果①DNA片段的插入P321第七頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)1.2重組結果②DNA片段的缺失P321第八頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)1.2重組結果③DNA片段的倒位P321第九頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)1.2重組結果①DNA片段的插入②DNA片段的缺失③DNA片段的倒位第十頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)1.3重組酶絲氨酸重組酶酪氨酸重組酶P322第十一頁,共三十三頁,2022年,8月28日1.保守性位點特異性重組(CSSR)絲氨酸重組酶結構LiW,etal.Science.2005,309(5738):1210-1215.R2R1R3R4第十二頁,共三十三頁,2022年,8月28日絲氨酸重組酶功能①重組酶絲氨酸殘基的-OH攻擊交換區特定磷酸二酯鍵,重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連②另外一個斷裂DNA的-OH攻擊重組酶與DNA磷酸二酯鍵,重新形成DNA的磷酸二酯鍵,絲氨酸重組酶釋放DNAP322第十三頁,共三十三頁,2022年,8月28日絲氨酸重組酶特異位點重組功能①絲氨酸重組酶的4個亞基分別切斷2個DNA分子的4條鏈,并且重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連P322第十四頁,共三十三頁,2022年,8月28日絲氨酸重組酶特異位點重組功能②重組酶二聚體亞基旋轉進行DNA片段交換P322第十五頁,共三十三頁,2022年,8月28日絲氨酸重組酶特異位點重組功能②重組酶二聚體亞基旋轉進行DNA片段交換R2R1R3R4R2R3R1R4LiW,etal.Science.2005,309(5738):1210-1215.P322第十六頁,共三十三頁,2022年,8月28日絲氨酸重組酶特異位點重組功能③DNA鏈上-OH攻擊重組酶-DNA磷酸二酯鍵,重新形成DNA磷酸二酯,釋放重組酶,完成重組P322第十七頁,共三十三頁,2022年,8月28日絲氨酸重組酶特異位點重組功能①絲氨酸重組酶的4個亞基分別切斷2個DNA分子的4條鏈,并且重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連②重組酶二聚體亞基旋轉進行DNA片段交換③DNA鏈上-OH攻擊重組酶-DNA磷酸二酯鍵,重新形成DNA磷酸二酯,釋放重組酶,完成重組第十八頁,共三十三頁,2022年,8月28日總結重組位點重組結果絲氨酸重組酶第十九頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.轉座第二十頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.轉座2.1轉座因子(transposableelement)或轉座子(transposon)從DNA上的一個地方移位到另外一個地方的遺傳因子。P337第二十一頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.2轉座因子的類型
2.2.1DNA轉座子
2.2.2LTR(longterminalrepeat)反轉錄轉座子
2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反轉錄轉座子P339第二十二頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.2轉座因子的類型
2.2.1DNA轉座子
自主轉座子(autonomoustransposon)
非自主轉座子(nonautonomoustransposon)P340第二十三頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.2轉座因子的類型
2.2.1.1DNA自主轉座子
①反向重復序列(具有轉座酶識別序列)②轉座酶基因第二十四頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.2轉座因子的類型
2.2.1.2DNA非自主轉座子
①反向重復序列(具有轉座酶識別序列)第二十五頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.2轉座因子的類型
2.2.1DNA轉座子
自主轉座子①反向重復序列(具有轉座酶識別序列)②轉座酶基因
非自主轉座子①反向重復序列(具有轉座酶識別序列)P340第二十六頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.2轉座因子的類型
2.2.2LTR反轉錄轉座子①兩端有LTR(longterminalrepeat)
②LTR中含有反向末端重復序列③轉座酶基因和反轉錄酶基因P340第二十七頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.2轉座因子的類型
2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反轉錄轉座子①5′-UTR:untranslatedregion②3′-UTR(聚腺苷酸序列的A-T堿基對)③ORF1:編碼RNA結合蛋白openreadingframe④ORF2:編碼的蛋白質同時具有反轉錄酶和核酸內切酶功能P341第二十八頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.3DNA轉座的剪切-粘貼機制
①轉座酶識別并聚集轉座子兩端的反向重復序列,形成轉座體
②將DNA轉座子從原始位置切除
③DNA單鏈交換,即轉座子的3′-OH與靶DNA的5′-P相連④DNA聚合酶和DNA連接酶修復缺口P341第二十九頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.3DNA轉座的剪切-粘貼機制
①轉座酶識別并聚集轉座子兩端的反向重復序列,形成轉座體P341第三十頁,共三十三頁,2022年,8月28日2.3DNA轉座的剪切-粘貼機制
②將DNA轉座子從原始位置切除P341第三十一頁,共三十三頁,2022年,8
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