實驗五蛙坐骨神經—腓腸肌標本的制備及刺激與反應的關系實驗目的：

掌握蛙類坐骨神經腓腸肌標本的制備方法。應用電刺激方法測出肌肉閾刺激、閾上刺激與最適刺激的強度值了解刺激與肌肉收縮的關系實驗原理兩棲類動物的一些基本生命活動和生理功能與恒溫動物相似，其離體組織器官所需的生活條件比較簡單，并且易于控制和掌握，因此在生理試驗中常用蟾蜍或蛙類的離體組織器官作為試驗標本。蛙類坐骨神經－腓腸肌標本是研究神經沖動和肌肉收縮機能等生理試驗最常用的試驗材料，制備此標本是生理試驗的一項基本但又非常重要的操作技術。刺激包括三方面的內容：刺激強度、刺激時間、刺激強度-時間變化率。其中，刺激強度就是電刺激的脈沖電壓，刺激時間就是某個單刺激所持續的時間。刺激強度對骨骼肌收縮形式的影響（固定刺激的時間和刺激強度-時間變化率）：單根神經纖維或肌纖維對刺激的反應是“全或無”式的。但在神經纖維肌肉標本中，則表現為當刺激強度很小時（閾下刺激），不能引起神經纖維動作電位的產生和肌肉的收縮；當刺激強度在一定范圍內變動時，肌肉收縮的幅度與之成正比。因為坐骨神經干中含有數千萬條粗細不等的神經纖維，其興奮性各不相同。弱刺激只能使其中少量興奮性高的神經纖維先興奮，并引起它所支配的少量肌纖維收縮。隨著刺激強度逐漸增大，發生興奮的神經纖維數目逐漸增多，其所引起收縮的肌纖維數目亦增多，結果肌肉收縮幅度隨刺激強度的增加而增強。當刺激達到某一強度時，神經干中全部神經纖維興奮，它們所支配的全部肌纖維也都發生興奮和收縮，從而引起肌肉的最大收縮。此后，若再增加刺激強度，肌肉收縮幅度將不再增加。我們把引起肌肉產生最大收縮時的最小刺激強度叫最適刺激強度。刺激頻率對骨骼肌收縮形式的影響（把刺激強度固定在最適刺激強度，把單刺激改為連續單刺激）：刺激頻率就是單位時間內連續刺激的次數。隨著刺激頻率的增高，肌肉的反應依次表現為單收縮、不完全強直收縮和完全強直收縮：⑴如果刺激頻率很小時，每相鄰兩個刺激的間隔時間很大，當其大于肌肉收縮的收縮期和舒張期之和時，肌肉表現為一個個的單收縮。單收縮包括收縮期及舒張期。前者占時較后者為短。⑵當逐漸增加刺激頻率，使新的刺激引起的肌肉收縮落在前一個刺激引起肌肉收縮的舒張期，這樣，肌肉在連續未完全舒張的基礎上就開始新的收縮，形成鋸齒樣的不完全強直收縮張力曲線。⑶當刺激頻率繼續增大時，新的刺激引起肌肉收縮落在前一次刺激引起肌肉收縮的收縮期，這樣，肌肉在連續收縮不全的基礎上出現新的收縮，形成一個類似方波的完全強直收縮張力曲線。實驗用品實驗動物：蟾蜍試劑與器材：計算機、BL-420F生物信號處理系

統、手術剪、手術鑷、玻璃分針、蛙板、鋅銅弓、張力換能器、

連接導線、刺激輸出、燒杯、任氏液、棉球、棉線等。實驗步驟：㈠坐骨神經-腓腸肌標本的制備1、破壞腦和脊髓2、去除軀干上部、皮膚及內臟左手捏住蟾蜍的脊柱，右手持粗剪刀在前肢腋窩處連同皮膚、腹肌、脊柱一并剪斷，然后左手握住蟾蜍后肢，僅靠脊柱兩側將腹壁及內臟剪去（注意避開坐骨神經）。并剪去肛門周圍的皮膚，留下脊柱和后肢。5、辨認蛙后肢主要肌肉，找出腓腸肌。7、剪去其他不用的組織在坐骨神經兩端各留一塊骨頭和肌肉，以便于固定。注意：剝離時一定要保持標本完整性；盡可能用玻璃分針，少用鑷子，避免刺激神經。8、標本檢驗完整的標本應包括四部分：一段脊柱骨、坐骨神經、腓腸肌、一段股骨頭。用鑷子輕輕提起結扎神經線，經任氏液沾濕的鋅銅弓短暫輕觸坐骨神經，如腓腸肌發生迅速的收縮反應，則表明機能完好。將標本置于任氏液中，穩定其興奮性15－20min，即可進行實驗。實驗項目刺激強度與反應關系刺激腓腸肌：調節刺激參數，選擇單刺激，改變刺激強度（從弱到強），觀察刺激強度變化對肌肉收縮的影響；找出閾強度、最適刺激強度；刺激神經：調節刺激參數，選擇單刺激，改變刺激強度（從弱到強），觀察刺激強度變化對肌肉收縮的影響；找出閾強度、最適刺激強度；比較腓腸肌與神經的興奮性刺激頻率與反應的關系：調節刺激參數，固定最適刺激強度，改變刺激頻率（從低到高），用連續單刺激刺激腓腸肌，觀察刺激頻率變化對肌肉收縮的影響。單收縮曲線復合收縮強直收縮

注意事項

在制備標本時，避免過度牽拉、手或金屬器械觸碰神經干；不能使動物皮膚分泌物，血液等污染神經和肌肉，不可用水沖洗，以免影響組織機能。制備標本及實驗中，隨時用任氏液潤濕神經和肌肉，防止干燥。刺激參數確認后，再進行刺激，防止神經肌肉損傷。每改變一次刺激頻率后，應休息0.5-1min,每次刺激不要超過3-4秒，以免標本疲勞。選擇刺激時，選程控刺激刺激時注意觀察肌肉的反應實驗結果記錄肌肉與神經的閾強度、最適刺激強度，并比較二者的興奮性；記錄在最適刺激強度下，刺激頻率與肌肉收縮的關系思考題制備好的神經肌肉標本為何要放在任氏液中？為什么刺激頻率增高肌肉收縮的幅度也增大？隨著刺激頻率的增高，各次刺激引起的收縮過程發生融合而疊加起來，這時肌肉