.操作臺基本要求:圖2.1.圖2.1.適合慣用右手的工作人員的理除并通風(fēng)南基本布局.慣用左手的工作人員可相應(yīng)為調(diào)整工作會面工物品的送放位置..隨著傳代次數(shù)的增加，連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系遺傳物質(zhì)不穩(wěn)定，不得將細(xì)胞存放于-20℃或-80℃冰柜中，因為細(xì)胞存在次低溫條件下活力迅速降低。.細(xì)胞污染：（1）細(xì)菌污染由22班即相差圖鵬顯示巫曖主代的上羽炬花還太麻鼾皮污染.以點顯徵象下可只貼理無泡用的且感存存一些靠讖發(fā)更笆微小涯札，但是臂個腳苗不易區(qū)分爐用以將患也方程區(qū)蜘一步放大高可斌顯示出各個大桁科南如恒一這些空趣通常為阡狀.妁2Hm衣，直徑約05叩10圖冉山里色方座的超迫忙堪均為1ODpmo(2)酵母污染圖才生埋殖相差圖信顯示站暨培蘇的加三生胞藪整段污桀口考茉的磔母細(xì)胞昱她或咫題X.復(fù)需時會年生中輔■」、的新卦.(3)霉菌污染初期PH值維持穩(wěn)定，污染嚴(yán)重后PH值迅速升高，導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁。(4)病毒污染一般不會對與其宿主物種不同的細(xì)胞培養(yǎng)物造成不良影響，通過電子顯微鏡檢查、一組抗體的免疫染色，ELISA實驗或者采用適當(dāng)病毒引物的PCR技術(shù)可以檢測出細(xì)胞為病毒污染。(5)支原體污染唯一檢測支原體污染的方法是采用熒光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自顯影.抗生素只能作為對付污染的最后手段而且只能短期使用，并應(yīng)盡快撤出.適合貼壁的細(xì)胞和懸浮的細(xì)胞貼壁培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)適營包拈原代出胞在內(nèi)的大多效抽的類型口適自己適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的拙胞以及其他一些無拈附性的細(xì)胞1例如:造皿郭胞卜常要醒朗傳代一怛是易于通過倒置顯微鐐雙察，較導(dǎo)傳和一但是零要每天進行堀胞計數(shù)和存活率測定一以監(jiān)測生長模式；可將培養(yǎng)物稀釋以赭淞生長.利用酣〔例如：EMLEK眸55,胰蛋,白酷）或機械方法瑁離細(xì)胞-無需通遼且或機捕方法解離副胞口細(xì)胞生長受表面積限制，因而產(chǎn)量受限*珀的生長野勤苴在塔養(yǎng)基中濃度的限制，易于擴大培養(yǎng)規(guī)槨口需要使用經(jīng)過組堪培於處理的容器口可使用未及組織培養(yǎng)處理的容器迸行培養(yǎng).但茄要援劭【即：搖晃曲授抨〕以便通行充分的『律交篇口可理毆位萩產(chǎn)物，用于細(xì)版學(xué)研究等多耗研究期域口可批量收萩產(chǎn)物.用于墨白用的大量生產(chǎn)及當(dāng)利用究領(lǐng)域..基礎(chǔ)培養(yǎng)基，減血清培養(yǎng)基，無血清培養(yǎng)基.PH值：大多數(shù)正常哺乳動物細(xì)胞系PH為7.4；成纖維細(xì)胞系適合輕度偏堿（PH7.4-7.7）Sf9和sf21等昆蟲細(xì)胞系最適合在PH值為6.2的環(huán)境中生長.溫度： 大多數(shù)人和哺乳動物細(xì)胞系在36℃至37℃最佳昆蟲細(xì)胞在27℃為最佳禽類細(xì)胞在38.5℃最佳冷血動物（15℃-26℃）.動物細(xì)胞形態(tài)劃分：成纖維細(xì)胞，貼附生長上皮樣細(xì)胞呈多角形，貼附淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞呈球形，不貼附?特殊形態(tài)：令I(lǐng)型有長突觸令I(lǐng)I型沒有軸突.細(xì)胞增長模式園43培養(yǎng)狙國的輿型生長撐式圖.此黃對酸困顯示了酒匏期展與里弄時間工時為美且.靖尹的隼地西管生姮手米生隹蛆帽拈.4箱接種后篁一小生長斷的是我需的.此盼焦如肥生共紜慢.址于適應(yīng)熱葬百鼻.為生愿也甚悚覺鉛的原老.延沛明之后是對短翱，此階的津能呈指黃甥班.海林生長施弄型中附言弄重.當(dāng)斯府生長厚開宓丹被杼息，即二一種里手抻營養(yǎng)盛韓埠】立者摑艇已占據(jù)所有可用甚哉對,細(xì)胞用進忍靜止懈［就：平臺飄L劇弗座度大大降飪甚T竟至停止，.何時傳代?哺乳動物：生長的PH值通常表示乳酸儲積，且有毒性，當(dāng)PH迅速降低（）0.1-0.2PH單位），同時細(xì)胞濃度增大，則應(yīng)對細(xì)胞進行傳代。■12.昆蟲細(xì)胞PH■12.貼壁細(xì)胞的解離方法解肉作用用途程寤堤輕臨昆珞養(yǎng)客出，寸罟劇烈毆打研柏貼壁的把觸.再想分裂亞胞副削司制的對雷白潞整感的摑鴕系；qSEM一些用腦藤重白曲修貼受性將跑藕國白的一般庖甑高望度重能!、已^形成舉層堵杓的m.特引是成■畀界細(xì)胞初第密法多祖障便留慮完登、匯告片層的載由一組地夙用齊皿表面脫高下聚，而不料型胞鼠靂TrypLE?解置函導(dǎo)站史性目艙；直嘍時代膝爭白甑：重要使用非訪物源性試■何地典域13.貼壁細(xì)胞的傳代所需材料?墓有玷里虻胞的塢葬客熱?經(jīng)包組織增齊處理的培齊麗，培養(yǎng)梅交熠芥皿-完全生式填養(yǎng)基.頊熱至m穴?次性無獨谷制1_就管三產(chǎn)匚室界箱，充石二五位取茶唐為弼的濯化空氣平劭苗溶液，列如:杜爾貝科碟觸/緩沖液tDPE*,不含鈣，集和配杠?梆裔利,列JS：技第日獨或TrypLEERp咨5.不■&錄缸?用于活拉胞相總岫胞計數(shù)的品劑料設(shè)備，例如.Uwn忙5寸自動加胞汁做柩、告給籃染/耳口嘰師計翌器-蜜百Suit巨r(nóng)SjM巨廣（B^krrianCouftsr（六壁細(xì)腿傳代流程 匪有腎細(xì)胞憒觸的咨校和愛筒均應(yīng)力元朗優(yōu)戀■金湎呆期F瑞的無泡理市，開且在展?jié)煌ㄅ隔崗工作.工從培養(yǎng)塞鼎中隊出用包的里覽塔葬基并于拜口，用不含超和鎂的平衡身的詼沖洗蛆庵（把1。51』塔??寰面朝雞至上mLSSiSL取寫蹈箜用擔(dān)房相惠的薦黑一惻輕輕加入沖洗液.以注曼依動歸胞品，軻后睡足容器過去。事二葉洗沙囊可去就可融抑住箱超捐作用的小?皿再、箕如篌口J.從增君容式中吸出.即^理升蕓耳*.向培養(yǎng)率中加入預(yù)科的廨惠嗣〔例加：腆蜜白料虱TWEF：試刺?應(yīng)足以商董西胞尾（繇lOcm^^O-SmL}.輕輕輪晃者器，陵統(tǒng)招定會費蓋用陂層口.我培養(yǎng)容器在室溫下照育的2分鐘口清注妝實際辨皆時閾根用所用空胞源不同而有淅差.在星氟翰下蓑熊細(xì)胞解幅情況.如果后常程度不達如喝，可持期,時間延性凡齒鐘，打如砂押畛查一次解高情況」也可羥羥指打培喬器器以加愧鼬胭黎度■九紀(jì)怛所高囁鹿大于善于兩％前，闡耨培并存事，徒用隗上液峰旱情就盡”加入所用解閽制阿佶值現(xiàn)的鷲建定至主任地葬基.啖卻瑞照層去畫樹看，僮培養(yǎng)基芬附，&常更附轉(zhuǎn)愿到IS-mLetl昭普中、義200Kg的高心力麋心占至I。分鐘."注笈離心遞電荏肘間依班無呼奘不同而等所差異?班用最少體啟的芨祺完全生虻培養(yǎng)基型新懸浮岫朋沉癥.取出少?其品正行計君&1&.采用IL球計勁器，馳凰汁觸餞抒照臺時藍拒編法或者陋聞匚燈,儂?自動細(xì)題計獨伐前定總芟膽數(shù)和活細(xì)胞百分比.心芟時一可再次向卻閱中加入生隹焙養(yǎng)基，以通達到所零的電胞茶廢，并重新避行卻胞計數(shù)。汪：變1E逮議使用匚aunt整廣自動sfl胞計戮長涮定忌細(xì)胞道和活弼膽百分比.Caint^官制眼胞訐物以汁熱用胃的樣不上與您回前使用的5計款器所需■相同，且不到一分鐘即可定成一個薦本的奧理夔的計題一適用于喑杵真極第胞*有關(guān)傳燒血球計數(shù)珥使用的克多恃芭-請參詢第鈕或的’支持擄本方累.部昔，3,杵華的懸液烽薛到該郎胞系攔若的接腫盍廖，并將適■悴他的酒袍后液轉(zhuǎn)移到新的非觸培養(yǎng)霹譽中.把細(xì)胞放回店養(yǎng)莉.汪：如巢便用塔苦拈.熱其放入JS;；箱前應(yīng)將瓶盜挺松.此便進行充分的胃低姿段，除非同愜用的是通不式培導(dǎo)他召透氣慢用盈，14.貼壁昆蟲細(xì)胞傳代:肘壁尾由薊胞傳代的注意事項 雖也品U到常傳優(yōu)的一毅步累與哺乳動物期胞相同，倬是理當(dāng)培養(yǎng)系統(tǒng)的一些關(guān)攝要求有所不同，為了我甯量巷緒黑，實鑿中磬密產(chǎn)國守所有產(chǎn)品明帝的承作說明a民出凱胞應(yīng)在無效盤戔代。住走.如梟書鐘的生理站至士民兄紀(jì)制.則向在細(xì)胞正到工吾牧甚事■者應(yīng)剛畀培從喀弗瓶底配脫離因進行傳代，囚力此射電隹客易匣器口細(xì)埴里度幅于匯合雙強的前％時.圣胞生王會受理抑制.牘笳狀態(tài)昭好的班電是時數(shù)用曲歌的空胞?培罪昆蟲獨胞時建設(shè)不要避行二科比碳交換.昆蟲釉胞由于“管.第涅化不理中培并口有微先弟件下可柘細(xì)跑栽在攫柞臺上奎考放八抽屜中于室溫下培并?但是，建說使用泡盅挖制在萬七的環(huán)境■泰冏昆三均胞專用的埒弗基.在無皿淌培齊基仲下一昆蟲挑域與基用貼的極為本固.霍至右勇以女力彳才能有其脫第=裝使足胞粉—―—一單的前一墳—一下塔齊租?為了避免萬人.三行此檢昨前四助董想蓋子.管者二建設(shè)不善即劑器里堪界哥.因為這槎可能受齒成細(xì)琪損仿.懸浮細(xì)胞的隹代 總諄貂也傳代比知理咄胞傳杖■袒敢有隼一些口由F匯制已經(jīng)在生悅唐共基中懸浮.囚統(tǒng)無需通述ift的作拓孽其從用春寄賽卷需雙圈，整個過程較為迅速.對翩圉的損情也粒小.喜浮培芬時不進行生靛尾芥基的更摸：而是海上箕m又加同一史.直到細(xì)胞臣含?可以直抵在墻葬期中稀群知粗.然后姓理堵養(yǎng)獷博，串■者也可以從培芹瓶中取出一部分細(xì)胞，花余下的細(xì)胞稀耶到詼霜眼垂適宜的接種害度.總矛坦能傳代后的加滿題一班比照珪隼脆短，懸浮培養(yǎng)等耨 懸浮注芥可錄用未經(jīng)第稅塔齊處里的元為用芥鹿喇加；不常折就根的辨瓶〕進行.停是，專為把用細(xì)胞里手值計匡痔福（即：般擇瓶〕具有出包的】律交換功班，盯進行更上規(guī)模茁黯旎婚芥。轉(zhuǎn)藻有兩種叁本毀計；注培養(yǎng)王田總掛的盤畔瑪里者垂直的葉輪技捍『即攬動卜叁旦葉他的拴色敗果更隹.轉(zhuǎn)布且喀蘆體態(tài)不求詞過轉(zhuǎn)瓶■現(xiàn)示停租的一泮，以便糧,充分〔胴如：5Kmk轉(zhuǎn)瓶蟲鑿井液體不能越過25口mu口15.懸浮細(xì)胞傳代流程.當(dāng)虻胞百臺瑋低［即：處于對敬士荒期而至達弱匯合桂態(tài)」時，從用弄箱中取出后齊埴，使用無歸吸贊乂珀里來中取出沙盤堀附注JU如果眼取作品前細(xì)照已轉(zhuǎn)沉迫.應(yīng)轉(zhuǎn)動培養(yǎng)殖一便細(xì)至在塔弄堂中均勻分布*.通過此忘品.采用CoMt”/自面陰埴汁及值或者￡球計覦黑.摑胞計也但接黑白朗慕拒假法君定總釉艷她和港知胞百力比.1.計Jf椅里隨碓拜到推薦令衿密度肘需要加人的笫井里悻押。4.在無由求愈下將適量預(yù)熱的主把培養(yǎng)基.；.口人到培齊.電申,舊委時可將培甚的吃胞分到多個增養(yǎng)費中.5、格培養(yǎng)箱的埴it旋開一圖，以便進行充分的3體交換1或青使用透與性瓶靛〕，井梅培寺期I回索延塢#箱.粗是逮腹取決不具體的削胞買.注：為了厚■融少陷胞評片和無用的代謝畫產(chǎn)要在推爨培養(yǎng)串票中番雙，每三周I或者必要時】應(yīng)拚鯉胞懸液輕輕需心一比，禽心力為lOOKd酎同為三軍加行仲，然后用新好的生母培養(yǎng)基堂新懸浮更胞沈淀*轉(zhuǎn)ittR寸JbMfi茶甚悻枳iaamL10IM25DmL50mL5(MmL2DCImL斐伯埋迎開箱既薦堪弟對轅塞笄番不要超過5館Ei,貓議息方茫成■魁.體祀較小的轉(zhuǎn)施更蛤逐步K夫培養(yǎng)族模。1.當(dāng)歸胞適芻傳H【即.勝于對聶戈景北面未達豆狂盲狀態(tài)｝附，以堵黑而中取出培養(yǎng)題，使用無曲吸發(fā)從培養(yǎng)期中段出抄;■瑞施把品，如垂變兄悻扉勃理前已建沉淀，應(yīng)轉(zhuǎn)動堵郭箍.他酒脆在塔畀型中均句安書*七逅近此樣品.王月亡mntuEE,自動菜胞園數(shù)儀園罟皿球計數(shù)需、蛆蹌歸數(shù)悅魏照吾瞼君挹觀法測定總用胞過和及西伯百分比.，計算舛英胞推璘到推薦若科雷康時需要卻入的雄至基悴即.工在無曲雙強下騰盲■和熱的生英箱養(yǎng)基加入到填養(yǎng)瓶中.哈要時可甚燧養(yǎng)的壯膽行到客個培萍睡中?入拼培芥箍的瓶蓋掛開一圈，以便進行充分的氣體兗掘，井杯培界瓶族回增養(yǎng)帽。轉(zhuǎn)速取決于無月斑啦系和二十靶父里。屈詼保蔻速始送去碓農(nóng)埔范圍內(nèi)一以更勇切應(yīng)力導(dǎo)進生胞颶注；為了盡■越受珀胞碎片和無用的R謝用產(chǎn)室在旋葉培并體系中番和,一三用（或青吁要田［應(yīng)將西胞導(dǎo)液舞輕靄心一凌,羯心力為1面乂中行間為5至10分鐘.然后用新鰭巴生式增舞型生笥焦券把抱質(zhì)淀，.細(xì)胞凍存:君幫井的細(xì)艷進行熔存的最隹方法是將細(xì)陋工干含有二甲基亞蝌B咨C）等冷昨保護劑的克全脂畀是中于液液中端存.冷凍保護惻可降生培養(yǎng)基的^點.并可魏域涉罪逮虞.大大降幅冰品祥成豹危險【冰品可損飾空胞-導(dǎo)致迪胞戲亡打注：DM5O可促進有機分子盅人能型a球忤客網(wǎng)SQ的成劑前.在玨用與就關(guān)物質(zhì)安主危古舊適應(yīng)的設(shè)啻如賽作規(guī)范.并應(yīng)按黑省地法魏處置此更過劑..冷凍細(xì)胞解凍方案:以下實匿有塞介幽了玲摩鶉胞弟凍的一般魂程.理里的實宴方軍一總廈參閱時附具輝細(xì)施國產(chǎn)金黃阻書「1，椅裝有冷凍細(xì)檢的旅存管從液敢春黑中取出.立即放人3rc水泡卬」2.在土產(chǎn)c水涵中輕密后動卷存曾，直至.東存管內(nèi)鋁票［余一小坡冰芯一使鴕胞迅謔解腺(1冊內(nèi)h3.幃選聲省轉(zhuǎn)明變層SiEiE風(fēng)粉內(nèi)?打開拉子前，用加州二酢感拭菇存管外的*4,杵豚蠢的挺胞急徜轉(zhuǎn)用副餐有適?舒虹朝幫、詰告該潮胞恭酌完空主性招茫荃豹離心智的.%取大約2MM9的期心為輔紀(jì)陋懸液薦.心J1。分加.英麻國心速度和時間取決干細(xì)胞裨黃*&茗心后，檢受上潘強是否不做，有無完整的瑁題譏定.再無的案件下小心倒融上酒液.不妻拽動細(xì)胞沉雉。才，輕輕將空需生新懸浮友完至生詆#:將基4-然后轉(zhuǎn)移到合適的埸井容器和睢苻的堵養(yǎng)環(huán)境中口注:培養(yǎng)瓶尺寸取決于珍存曾東存的細(xì)胞數(shù)■，培養(yǎng)耳蜩決于珀胞和型宇基/型“.利用血球計數(shù)器進行細(xì)胞計數(shù)：匕用酒粕清清計熱酒和盜君片b待計數(shù)他和黃酒片干片后.桂正偵片跌在情定位置a2收工罐怛.將10PL壓強加到￡1理計苴器上.不要噎明融焉出口1將計豌池工于倒置品德里第1口)［物鍍F.住用相差模式以區(qū)分噩胞.工計黝U間有網(wǎng)居約大E塔(1mm-)內(nèi)的壬袍數(shù).下圖中帶期略的方整己席而冏圉出口播史曼致乘以1口“過為先金身用弄差所含的卻胞數(shù)?應(yīng)席笛現(xiàn)付辭吊，取而次計靚的邛均生.上方IMPftOVtb上方IMPftOVtbHFUfiAUEFi.臺盼藍拒染法:可按以下流程濮確測定細(xì)配存活率?細(xì)胞存活率的計算方法是用皿球計皴器網(wǎng)格內(nèi)的活軍能毀除以總細(xì)胞數(shù)。如果