第八章病原學診斷與防治

第一節細菌學診斷包括；細菌學診斷——檢測病原菌及其抗原，產物或核酸血清學診斷——檢測患者血清中特異性抗體1醫學ppt第八章病原學診斷與防治第一節細菌一、病原菌檢測標本采集時應注意無菌操作，盡量避免雜菌污染。根據致病菌在不同病期的體內分布和排出部位，采取不同標本。應在使用抗菌藥物前采集標本，否則在培養時應加入拮抗劑。盡可能采集病變明顯部位的材料。標本必須新鮮，采集后盡快送檢。送檢過程中要采取適當的保存方式。標本做好標記，詳細填寫化驗單，保證各環節的準確無誤。標本采集與送檢原則2醫學ppt一、病原菌檢測標本采集時應注意無菌操作，盡量避免雜菌污染。標致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養與鑒定病原菌抗原檢測其它檢測形態、結構、染色性涂片鏡檢菌落特征生化反應藥敏試驗血清學反應沉淀反應協同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細菌代謝產物（氣相色譜）細菌核酸（PCR）噬菌體分離細菌素測定分子生物學技術動物試驗3醫學ppt致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養與鑒定病原菌抗原人體受致病菌感染后，其免疫系統被刺激后發生免疫應答而產生特異性抗體。抗體的量常隨感染過程而增多，表現為效價（滴度）的升高。因此，用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應特異抗體和其效價的動態變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學診斷(serologicaldiagnosis)。血清學診斷試驗最好取患者急性期和恢復期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。常用方法：直接凝集試驗、乳膠凝集試驗、沉淀試驗、補體結合試驗、中和試驗、ELISA。第二節血清學診斷4醫學ppt人體受致病菌感染后，其免疫系統被刺激后發生免疫應答而產生特異第二節病毒學診斷

一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）1早期（前驅期、急性期、發病前1~2天）2根據不同病毒感染，采集不同部位標本3病毒易被滅活（細胞內寄生，怕熱不怕冷），低溫保存，快速送檢4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）5血清學實驗檢查抗體（雙分血清）5醫學ppt第二節病毒學診斷一標本的采集與送檢（principl二病毒的分離培養與鑒定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒的分離方法動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發病情況雞胚培養不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細胞培養：分離病毒最常用的方法（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數目的單層細胞。（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。6醫學ppt二病毒的分離培養與鑒定（virusisolationa病毒在培養細胞中增殖的指標細胞的變化（1）出現細胞病變效應（CPE）：即某些病毒在細胞內增殖引起的特有的細胞病變（細胞變圓、聚集、壞死、脫落等）（2）形成細胞融合（多巨核細胞）（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結構。（病毒增殖場所）紅細胞吸附干擾現象細胞代謝改變（pH）7醫學ppt病毒在培養細胞中增殖的指標細胞的變化7醫學ppt正常細胞病變細胞8醫學ppt正常細胞病變細胞8醫學ppt（二）病毒的數量與感染性測定（三）新分離病毒的鑒定核酸類型、理化性狀、形態、血清學鑒定、基因測序和生物對比。9醫學ppt（二）病毒的數量與感染性測定9醫學ppt三、病毒感染的血清學診斷用已知病毒抗原檢測病人血清中相應抗體以診斷病毒性疾?。ㄖ泻蛯嶒?、補體結合實驗、血凝抑制實驗、凝膠免疫擴散等）10醫學ppt三、病毒感染的血清學診斷用已知病毒抗原檢測

四、病毒感染的快速診斷

(一)

形態學

電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒光鏡——大病毒和包涵體11醫學ppt四、病毒感染的快速診斷(一)

形態學11醫學pp12醫學ppt12醫學ppt13醫學ppt13醫學ppt14醫學ppt14醫學ppt15醫學ppt15醫學ppt16醫學ppt16醫學ppt17醫學ppt17醫學ppt（二）檢測病毒蛋白抗原用已知特異性抗體直接檢測病毒蛋白抗原（簡便、敏感、特異）常用方法：免疫熒光技術（IF）

固相放射免疫測定（SPRIT）

酶免疫技術（EIA）等。18醫學ppt（二）檢測病毒蛋白抗原18醫學ppt（三）檢測病毒特異性IgM抗體

檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染或證明病毒復制。19醫學ppt（三）檢測病毒特異性IgM抗體 檢（四）檢測病毒核酸

1核酸雜交

斑點雜交（dothybridization）

原位雜交（insitehybridization）

DNA印跡雜交（Southernblot）

RNA印跡雜交（northernblot）

2

核酸擴增聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCRDNA）連接酶鏈反應（ligasechainreaction，LCR）反轉錄PCR（ReversetranscrptasePCR，RT—PCR(RNA)

3

基因芯片技術（genechip）

20醫學ppt（四）檢測病毒核酸1核酸雜交20醫學ppt第三節真菌學診斷標本直接鏡檢深部標本染色標本G染色G+圓形大小不均有芽生孢子分離培養沙氏培養基菌落觀察角質標本不染色標本10%KOH觀察菌絲、孢子類型大小顏色皺摺鑒定動物實驗（致病性真菌）接種觀察發病情況死亡后取標本進一步鑒定皮膚超敏反應快速診斷血清學實驗核酸檢測真菌毒素檢測21醫學ppt第三節真菌學診斷標本直接鏡檢深部標本分離培養角質標本類死疫苗活疫苗類毒素新型活疫苗基因工程疫苗重組載體疫苗第四節特異性預防與治療一、人工主動免疫(artificialactiveimmunity)：將疫苗(vaccine)或類毒素接種于人體，使機體產生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于預防。合成疫苗亞單位疫苗DNA疫苗轉基因植物疫苗治療性疫苗22醫學ppt死疫苗第四節特異性預防與治療一、人工主動免疫(artifi抗毒素抗菌血清胎盤球蛋白、丙種球蛋白細胞免疫制劑二、人工被動免疫人工被動免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細胞因子等免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時。但這些免疫物質不是病人自己產生的，故維持時間短。主要用于治療或緊急預防。23醫學ppt抗毒素二、人工被動免疫人工被動免疫(artificial兩種人工免疫的比較區別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質抗原抗體或細胞因子等接種次數1-3次1次免疫出現時間慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出現）免疫維持時間長（數月~數年）短（2-3W）用途多用于預防多用于治療或應急預防24醫學ppt兩種人工免疫的比較區別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質抗三、細菌感染的治療抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學制劑）主要作用機制影響細胞壁合成影響細胞膜功能影響細菌蛋白合成影響細菌核酸合成25醫學ppt三、細菌感染的治療抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學制劑）2四、病毒感染的治療藥物治療核苷類藥物——抑制病毒基因復制——抑制病毒基因轉錄蛋白酶抑制劑天然藥物（中草藥）其他藥物（金剛烷胺）干擾素及干擾素誘生劑治療基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復制）免疫治療（特異性抗體、免疫調節劑、治療性疫苗等。26醫學ppt四、病毒感染的治療藥物治療26醫學ppt五、真菌的治療各種癬癥——外用抗真藥（易復發）深部真菌病——除去誘因，提高免疫力，用抗真菌藥物（副作用大）27醫學ppt五、真菌的治療各種癬癥——外用抗真藥（易復發）27醫學ppt此課件下載可自行編輯修改，供參考！感謝您的支持，我們努力做得更好！此課件下載可自行編輯修改，供參考！第八章病原學診斷與防治

第一節細菌學診斷包括；細菌學診斷——檢測病原菌及其抗原，產物或核酸血清學診斷——檢測患者血清中特異性抗體29醫學ppt第八章病原學診斷與防治第一節細菌一、病原菌檢測標本采集時應注意無菌操作，盡量避免雜菌污染。根據致病菌在不同病期的體內分布和排出部位，采取不同標本。應在使用抗菌藥物前采集標本，否則在培養時應加入拮抗劑。盡可能采集病變明顯部位的材料。標本必須新鮮，采集后盡快送檢。送檢過程中要采取適當的保存方式。標本做好標記，詳細填寫化驗單，保證各環節的準確無誤。標本采集與送檢原則30醫學ppt一、病原菌檢測標本采集時應注意無菌操作，盡量避免雜菌污染。標致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養與鑒定病原菌抗原檢測其它檢測形態、結構、染色性涂片鏡檢菌落特征生化反應藥敏試驗血清學反應沉淀反應協同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細菌代謝產物（氣相色譜）細菌核酸（PCR）噬菌體分離細菌素測定分子生物學技術動物試驗31醫學ppt致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養與鑒定病原菌抗原人體受致病菌感染后，其免疫系統被刺激后發生免疫應答而產生特異性抗體。抗體的量常隨感染過程而增多，表現為效價（滴度）的升高。因此，用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應特異抗體和其效價的動態變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學診斷(serologicaldiagnosis)。血清學診斷試驗最好取患者急性期和恢復期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。常用方法：直接凝集試驗、乳膠凝集試驗、沉淀試驗、補體結合試驗、中和試驗、ELISA。第二節血清學診斷32醫學ppt人體受致病菌感染后，其免疫系統被刺激后發生免疫應答而產生特異第二節病毒學診斷

一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）1早期（前驅期、急性期、發病前1~2天）2根據不同病毒感染，采集不同部位標本3病毒易被滅活（細胞內寄生，怕熱不怕冷），低溫保存，快速送檢4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）5血清學實驗檢查抗體（雙分血清）33醫學ppt第二節病毒學診斷一標本的采集與送檢（principl二病毒的分離培養與鑒定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒的分離方法動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發病情況雞胚培養不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細胞培養：分離病毒最常用的方法（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數目的單層細胞。（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。34醫學ppt二病毒的分離培養與鑒定（virusisolationa病毒在培養細胞中增殖的指標細胞的變化（1）出現細胞病變效應（CPE）：即某些病毒在細胞內增殖引起的特有的細胞病變（細胞變圓、聚集、壞死、脫落等）（2）形成細胞融合（多巨核細胞）（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結構。（病毒增殖場所）紅細胞吸附干擾現象細胞代謝改變（pH）35醫學ppt病毒在培養細胞中增殖的指標細胞的變化7醫學ppt正常細胞病變細胞36醫學ppt正常細胞病變細胞8醫學ppt（二）病毒的數量與感染性測定（三）新分離病毒的鑒定核酸類型、理化性狀、形態、血清學鑒定、基因測序和生物對比。37醫學ppt（二）病毒的數量與感染性測定9醫學ppt三、病毒感染的血清學診斷用已知病毒抗原檢測病人血清中相應抗體以診斷病毒性疾病（中和實驗、補體結合實驗、血凝抑制實驗、凝膠免疫擴散等）38醫學ppt三、病毒感染的血清學診斷用已知病毒抗原檢測

四、病毒感染的快速診斷

(一)

形態學

電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒光鏡——大病毒和包涵體39醫學ppt四、病毒感染的快速診斷(一)

形態學11醫學pp40醫學ppt12醫學ppt41醫學ppt13醫學ppt42醫學ppt14醫學ppt43醫學ppt15醫學ppt44醫學ppt16醫學ppt45醫學ppt17醫學ppt（二）檢測病毒蛋白抗原用已知特異性抗體直接檢測病毒蛋白抗原（簡便、敏感、特異）常用方法：免疫熒光技術（IF）

固相放射免疫測定（SPRIT）

酶免疫技術（EIA）等。46醫學ppt（二）檢測病毒蛋白抗原18醫學ppt（三）檢測病毒特異性IgM抗體

檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染或證明病毒復制。47醫學ppt（三）檢測病毒特異性IgM抗體 檢（四）檢測病毒核酸

1核酸雜交

斑點雜交（dothybridization）

原位雜交（insitehybridization）

DNA印跡雜交（Southernblot）

RNA印跡雜交（northernblot）

2

核酸擴增聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCRDNA）連接酶鏈反應（ligasechainreaction，LCR）反轉錄PCR（ReversetranscrptasePCR，RT—PCR(RNA)

3

基因芯片技術（genechip）

48醫學ppt（四）檢測病毒核酸1核酸雜交20醫學ppt第三節真菌學診斷標本直接鏡檢深部標本染色標本G染色G+圓形大小不均有芽生孢子分離培養沙氏培養基菌落觀察角質標本不染色標本10%KOH觀察菌絲、孢子類型大小顏色皺摺鑒定動物實驗（致病性真菌）接種觀察發病情況死亡后取標本進一步鑒定皮膚超敏反應快速診斷血清學實驗核酸檢測真菌毒素檢測49醫學ppt第三節真菌學診斷標本直接鏡檢深部標本分離培養角質標本類死疫苗活疫苗類毒素新型活疫苗基因工程疫苗重組載體疫苗第四節特異性預防與治療一、人工主動免疫(artificialactiveimmunity)：將疫苗(vaccine)或類毒素接種于人體，使機體產生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于預防。合成疫苗亞單位疫苗DNA疫苗轉基因植物疫苗治療性疫苗50醫學ppt死疫苗第四節特異性預防與治療一、人工主動免疫(artifi抗毒素抗菌血清胎盤球蛋白、丙種球蛋白細胞免疫制劑二、人工被動免疫