電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁蔗糖磷酸化酶（SP）活性檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-5029規格：50T/48S

紫外分光光度法產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系工作人員。試劑名稱規格保存條件提取液液體60mL×1瓶4℃保存試劑一液體20mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1瓶4℃保存試劑三液體2mL×1支4℃保存試劑四粉劑×2瓶-20℃保存試劑五粉劑×1瓶-20℃保存試劑六粉劑×3支-20℃保存試劑七粉劑×4支-20℃保存溶液的配制：1、試劑二：臨用前加入15mL蒸餾水，充分混勻。4℃可以保存4周；211.5mL-20℃2310mL-20℃4周；411mL-20℃保存，避免反復凍融，-20℃2周；臨用前按試劑六：蒸餾水=1:1的比例稀釋試劑六，現用現配；510.7mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存，避免反復凍融，-20℃2周；臨用前按試劑七：蒸餾水=1:1的比例稀釋試劑七，現用現配。產品說明：（SucrosePhosphorylase13家族，是一種催化轉移葡萄糖苷鍵的酶，能夠催化蔗糖和無機磷酸鹽合成1-磷酸-葡萄糖。該酶主要以蔗糖、1-磷酸葡萄糖為供體，多類物質如多羥基的糖和糖醇、酚羥基、羧基等為受體，催化合成各種糖苷。SP1-6-6-磷酸葡萄糖脫NADP+340nm340nmSP活性。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計、低溫離心機、恒溫培養箱/水浴鍋、可調式移液器、研缽/勻漿器、1mL石英比色皿、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1(g)︰提取液體積(mL)1︰5-10的比例（0.1g1mL提取液10000g，4℃10min，取上清置于冰上待測。25min（104個提取液體積（mL）500-1000︰1的比例（5001mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞或細菌（200W3710000g，4℃10min，取上清置于冰上待測。3、液體：直接檢測。若液體渾濁可離心后取上清測定。二、測定步驟1、紫外分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。2、試劑一37℃預熱10min。3、操作表：試劑名稱（μL）測定管空白管試劑一325425試劑二250250試劑三2525試劑四5050試劑五5050試劑六100100試劑七100100混勻，37℃水浴預熱5min樣本100-15sA1（A1空白37℃2min2min15sA2測定（A2空白），ΔA=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）?？瞻坠苤恍铚y定1-2次，如果樣本數量過多也可以將試劑一到試劑七按上述比例混勻后進行測定。三、蔗糖磷酸化酶（SP）活性計算按照蛋白濃度計算酶活定義：37℃，每毫克蛋白質每分鐘催化產生1nmolNADPH為一個酶活單位。SP活性（U/mgprot）=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷（V樣×Cpr）÷T=803.85×ΔA÷Cpr按照樣本質量計算酶活定義：37℃，每克樣本每分鐘催化產生1nmolNADPH為一個酶活單位。SP活性（U/g質量）=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T=803.85×ΔA÷W按照細胞數量計算酶活定義：37℃，每104個細胞每分鐘催化產生1nmolNADPH為一個酶活單位。SP活性（U/104cell）=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×細胞數量（萬個）)÷T=803.85×ΔA÷細胞數量（萬個）摩爾消光系數，62201mLmg/mL；T：反應時間，2min；109：1mol