電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁肝脂酶（HL）活性檢測試劑盒說明書貨號:UPLC-MS-4411規格:100T/48S

微量法產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系工作人員。試劑名稱規格保存條件試劑一液體110mL×1瓶4℃保存試劑二液體1.5mL×1瓶4℃保存試劑三粉劑×1瓶4℃保存試劑四粉劑×2支-20℃保存標準品粉劑×1瓶4℃保存溶液的配制：1、試劑三：臨用前加入10mL雙蒸水，充分溶解待用，用不完的4℃保存兩周；211mL-20℃36.94mL丙酮10μmol/mLα-萘酚標準溶液，充分溶解待用，用不完的-20℃產品說明：竇周間隙腔面的肝細胞微絨毛表面，可水解各種脂蛋白中的甘油三酯（G）和磷脂（，使各種脂蛋白顆粒的HL及其活性增高時，可導致血漿中低密度脂蛋白（LDL）水平升高，加速動脈粥樣硬化的發生與發展。α-α-B595nm有特征吸收峰，其顏色深淺在一定范圍內與肝脂酶活性成正相關。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測需自備的儀器和用品：可見分光光度計//96/漩渦震蕩儀、EP管、丙酮、蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1（g）︰試劑一體積(mL)1︰5~10的比例（0.1g1L試劑一4℃，10000×g10min，取上清待測。2、細胞：按照細胞數量（104個）︰試劑一體積（mL）500~1000︰1的比例（5001mL試劑一（300W373min10min，取上清待測。3、血清/血漿：直接測定。二、測定步驟1、分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至595nm，用蒸餾水調零。2、將試劑三在30℃預熱20min以上。310μmol/mL5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL的標準溶液備用。4對照管測定管標準管空白管樣品（μL）2020--標準溶液（μL）--20-試劑一（μL）908080100試劑二（μL）-101010混勻，30℃反應10min--試劑三（μL）80808080試劑四（μL）10101010595nmA對照管、A測定管、AAΔA=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A（1-2次）三、HL酶活計算1、標準曲線的繪制：xΔAyy=kx+bΔA帶x（L。2、HL酶活的計算：按蛋白濃度計算酶活定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產生1μmol的α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（U/mgprot）=x×V樣÷（V樣×Cpr）÷T=0.1x÷Cpr按樣本質量計算酶活定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產生1μmol的α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（U/g鮮重）=x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）÷T=0.1x÷W按照細胞數量計算酶活定義：每104個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產生1μmol的α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（U/104cell）=x×V樣÷（V樣×細胞數量（萬個）÷V樣總）÷T=0.1x÷細胞數量（萬個）按液體體積計算酶活定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產生1μmol的α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（U/mL）=x×V樣÷V樣÷T=0.1xV反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.02mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質量，g；V樣總：加入試劑一體積，1mL；T：反應時間，10min。注意事項：1、若樣本為動物肝臟，建議將樣本用試劑一稀釋25倍以上再進行檢測，并在計算公式中乘以稀釋倍數。2、若樣本為肥胖型動物