WatersQuattroPremi液質(zhì)聯(lián)用儀的使用與維護(hù)保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP2004-11-09目錄簡(jiǎn)述(11.1樣品入口(21.2真空系統(tǒng)(21.3數(shù)據(jù)系統(tǒng)(2環(huán)境要求(3儀器使用(33.1開(kāi)機(jī)步驟(33.2質(zhì)譜調(diào)諧窗口各項(xiàng)參數(shù)設(shè)定(53.3創(chuàng)建項(xiàng)目(63.4質(zhì)量校正(73.5調(diào)諧(Tuning(143.6信號(hào)采集(153.72695型液相色譜(InletMethod(193.8創(chuàng)建質(zhì)譜方法(253.9創(chuàng)建樣品列表(273.10運(yùn)行樣品列表(SampleList(303.11QuanLynx來(lái)編輯定量方法(393.12用QuanLynx進(jìn)行批處理(443.13查看QuanLynx定量結(jié)果(473.14關(guān)機(jī)(52注意事項(xiàng)(53維護(hù)與保養(yǎng)(54簡(jiǎn)述QuattroPremier(Figure是一臺(tái)高效串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，用于常規(guī)LC/MS/MS分析。Figure1-1QuattroPremierMassSpectrometer樣品的離子化發(fā)生在處于大氣壓狀態(tài)下的離子源中。離子通過(guò)取樣錐孔進(jìn)入真空系統(tǒng)，然后穿過(guò)源travelling-wave(T-Wave!進(jìn)入第一級(jí)四極桿,在此按照質(zhì)/荷比(m/z過(guò)濾(Figure1-。按照質(zhì)量數(shù)分開(kāi)的離子進(jìn)入T-Wave碰撞室，進(jìn)一步發(fā)生碰撞誘導(dǎo)裂解(CID或者直接進(jìn)入第二級(jí)四極桿。碎片離子通過(guò)第二級(jí)四極桿進(jìn)行質(zhì)量

分析。離子最后經(jīng)過(guò)倍增電極,phosphoj和光電倍增器檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)。輸出信號(hào)被放大,數(shù)字化后傳給信號(hào)系統(tǒng)。rhe訂口沁 血||5I氣uiidct^nicdllisiiLiniUkIulclIdii：LiriLpi^|lln||.Irhe訂口沁 血||5I氣uiidct^nicdllisiiLiniUkIulclIdii：LiriLpi^|lln||.Iheii^g!jn^ii[I^HRi胡0fllifrod里“*山前”toth世It舶闘心⑷吃恤巾怡ntlcj,SdhtpHn^CMP

andiwt目lock■■Sin叫*>l弊fulfil山eliquidLntraihifLioiiEysicinarcinrroduccd,ntalrnnsphcriLpressure,sole3hciDri^ntiu-npute亡?????arSouFcel^Wave^^BIonGuide ■■DataSystemQuBdiupols1T-W^vvCQliiwQnEllQuadojacrie2[nin^mihcditmsunrd^McvtetlbyRi?pliuEnnii^qjlierdelcvnyn5>^cmIhe L&umpliLih/d,di^iEizud,iijhIprL.KiilirdInihi:Massl_>"LSiLitafyalumFigure1-2QuattroPremierSchematic1.1樣品入口該儀器可以與下列兩種進(jìn)樣方式組合:HPLC系統(tǒng)，可以提供LC流出組分的分子量信息，進(jìn)行目標(biāo)分析和定量。注射泵，分析寶貴的，低濃度的樣品。HPLC系統(tǒng)或注射泵將樣品輸入ZsprayTM離子源中。通過(guò)改變探頭來(lái)改變離子化模式。探頭上的識(shí)別pins可以鑒別系統(tǒng)的離子化模式。1.2真空系統(tǒng)由外置的初級(jí)抽氣泵和內(nèi)設(shè)的渦輪分子泵提供真空系統(tǒng)。渦輪分子泵抽分析器和T-Wave離子傳輸區(qū)域的真空。初級(jí)抽氣泵可以是旋轉(zhuǎn)式泵或無(wú)油螺旋式泵。系統(tǒng)通過(guò)一個(gè)Piran真空計(jì)監(jiān)測(cè)渦輪分子泵的轉(zhuǎn)速和真空度。如果真空度不夠,Pirani真空計(jì)作為開(kāi)關(guān)將中斷儀器操作。真空隔斷閥可以在不破壞真空的情況下進(jìn)行離子源的日常維護(hù)。1.3數(shù)據(jù)系統(tǒng)包括embeddedPC,工作站和MassLynx軟件。MassLynx可以控制整個(gè)系統(tǒng)，包括設(shè)置和運(yùn)行HPLC系統(tǒng)，儀器調(diào)諧，采集數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)處理。embeddedPC和工作站之間的通訊由網(wǎng)線(xiàn)連接。1.環(huán)境要求2.1儀器室要保持整潔、干凈、無(wú)塵;配套設(shè)施布局合理。2.2儀器室溫度應(yīng)相對(duì)穩(wěn)定,一般應(yīng)控制在20-25C,保持恒溫;相對(duì)濕度最好為50-70%,室內(nèi)應(yīng)備有溫度計(jì)和毛發(fā)濕度計(jì),一般采用空調(diào)和吸濕機(jī)調(diào)節(jié)溫度和濕度。2.3儀器室電源要求相對(duì)穩(wěn)定,電壓變化要小,最好配備不間斷穩(wěn)壓電源,防止意外停電。儀器使用3.1開(kāi)機(jī)步驟3.1.1分別打開(kāi)質(zhì)譜、液相色譜和電腦電源，此時(shí)質(zhì)譜內(nèi)置的CPU會(huì)通過(guò)網(wǎng)線(xiàn)與電腦主機(jī)建立通訊聯(lián)系,這個(gè)時(shí)間大約需要1至2分鐘。3.1.2待液相色譜通過(guò)自檢，進(jìn)入Idle狀態(tài)，依照液相色譜操作程序，依次進(jìn)行操作。a.DegasserOi打開(kāi)脫氣機(jī)。WetPrime濕灌注。PurgeInjector平衡色譜柱。3.1.3雙擊桌面上的MassLynx4.0圖標(biāo)進(jìn)入質(zhì)譜軟件。此時(shí)，如果進(jìn)入軟件時(shí)出現(xiàn)提示：“Theembeddedsystemisnotresponding,Thesystemwillruninstanda則說(shuō)明質(zhì)譜內(nèi)置的CPU（EPC與電腦主機(jī)的通訊聯(lián)系還未建立，請(qǐng)稍等后再進(jìn)入軟件，如果打開(kāi)軟件僅為處理數(shù)據(jù)則沒(méi)有關(guān)系（質(zhì)譜主機(jī)電源未開(kāi)時(shí)進(jìn)入軟件也會(huì)有同樣提示。3.1.4點(diǎn)擊質(zhì)譜調(diào)諧圖標(biāo)（MSTune進(jìn)入質(zhì)譜調(diào)諧窗口?！?土EK』3.1.4點(diǎn)擊質(zhì)譜調(diào)諧圖標(biāo)（MSTune進(jìn)入質(zhì)譜調(diào)諧窗口?！?土EK』1*!押約粘Tt￡t*?￡1■ntQriidiliH[■HEMGFi.禍刑F計(jì) jE?|<fiHK￡k 乂 屮■Figure3-1InitialTunePage3.1.5選擇菜單“Options>Pump這時(shí)機(jī)械泵將開(kāi)始工作,同時(shí)分子渦輪泵會(huì)開(kāi)始抽真空。等達(dá)到真空要求后，儀器前面板右上角的狀態(tài)燈“Vacuum”將變綠。3.1.6點(diǎn)擊真空狀態(tài)圖標(biāo),檢查真空規(guī)的狀態(tài),確認(rèn)真空達(dá)到要求。2.1.7角認(rèn)氮?dú)鈿庠摧敵鲆呀?jīng)打開(kāi)，輸出壓力為90ps。3.1.8殳置源溫度(SourceTemp到目標(biāo)溫度。3.2質(zhì)譜調(diào)諧窗口各項(xiàng)參數(shù)設(shè)定3.2?電噴霧電離源(ESI在質(zhì)譜調(diào)諧窗□選擇要使用的離子模式,IonMode>Electrospra。^點(diǎn)擊進(jìn)入Source界面，設(shè)定Source界面里各項(xiàng)參數(shù)。加在ESI源內(nèi)毛細(xì)管上的高壓，正離子模式一般是在Capillary(KV2.5-3.75KV之間優(yōu)化,負(fù)離子模式一般是在2.0-3.0KV之間優(yōu)化。在負(fù)離子模式時(shí)，如果毛細(xì)管電壓殳置過(guò)高容易引起放電現(xiàn)象。Cone(V樣品錐孔電壓，一般在10-100V之間優(yōu)化，通常來(lái)說(shuō)，分子量小的樣品選擇的錐孔電壓要相對(duì)小，當(dāng)提高錐孔電壓時(shí)，可能得到的碎片信息會(huì)多一些。Extractor二級(jí)錐孔電壓，一般在0-5V之間優(yōu)化。RFLen(V六級(jí)桿透鏡電壓,一般在0-0.5V之間優(yōu)化。SourceTemp源溫度，一般在80C-120C之間優(yōu)化，一般來(lái)講，設(shè)定與流動(dòng)相流速大小有關(guān),如果用注射泵直接進(jìn)樣,流速在5-40Ul/min時(shí),設(shè)為80 當(dāng)液相色譜流速在100-300Ul/min時(shí),設(shè)定為120CoDesolvationTemP兌溶劑氣溫度,一般在120C-300C之間優(yōu)化,與流動(dòng)相流速大小,流動(dòng)相含水比例高低,是否容易氣化相關(guān),用注射泵直接進(jìn)樣,流速在5-40Ul/min時(shí),設(shè)為120,流速在5-40Ul/min時(shí),設(shè)為80C,當(dāng)液相色譜流速在100-300Ul/min時(shí),設(shè)為300C。Desolvation(L/脫r溶劑氣流量,一般在300-1000L/Hour之間優(yōu)化，與流動(dòng)相流速大小,流動(dòng)相含水比例高低,是否容易氣化相關(guān)。Cone(L/hr錐孔氣的流量,一般在0-100L/Hour之間優(yōu)化。點(diǎn)擊圖標(biāo)，進(jìn)入Analyser界面，設(shè)定Analyser界面里的各項(xiàng)參數(shù)。LMResolution|氐質(zhì)量數(shù)分辨率，典型值15.0HMResolution高質(zhì)量數(shù)分辨率，典型值15.0IonEnergy離子能量，一般在0-1之間優(yōu)化。Multiplie光電倍增管電壓，典型值650Vo3.2.2大氣壓化學(xué)電離源(APCI2.2.在1質(zhì)譜調(diào)諧窗口選擇要使用的離子模式,IonMode>APCI+o進(jìn)入Source界面，設(shè)定Source界面里各項(xiàng)參數(shù)。Corona高壓放電針電流，正離子模式一般在0-10之間優(yōu)化，負(fù)離子模式一般在0-5之間優(yōu)化。SourceTemp源溫度，一般在120C-150C之間優(yōu)化。APCIProbeTempAPCI加熱器溫度,一般在300C-600C之間優(yōu)化。3.3創(chuàng)建項(xiàng)目（Project為了便于進(jìn)行數(shù)據(jù)管理,可以創(chuàng)建不同的項(xiàng)目（Projec項(xiàng)目的后綴為.prog個(gè)項(xiàng)目都有對(duì)應(yīng)的子目錄進(jìn)行相應(yīng)文件的管理。3.3.1從主菜單中選擇“File>ProjectWiz會(huì)引導(dǎo)你去創(chuàng)建一個(gè)新的項(xiàng)目。3.3.2輸入項(xiàng)目（projec名稱(chēng)及描述，點(diǎn)擊“Next”進(jìn)入下一步。3.3.選擇“CurrentprojectasTemp將將會(huì)把上一次所使用的項(xiàng)目里的方法拷貝到你新建的項(xiàng)目中去，點(diǎn)擊Finis。2.2.4新的項(xiàng)目會(huì)被創(chuàng)建，而且軟件會(huì)自動(dòng)切換到新的項(xiàng)目中。3.4質(zhì)量校正質(zhì)量校正（Calibrati是與儀器的調(diào)諧（Tuningoptimizat:分開(kāi)進(jìn)行的,為了保證質(zhì)量的準(zhǔn)確，在儀器安裝及維護(hù)后，定期進(jìn)行校正。通常質(zhì)譜被校正后，校正結(jié)果可以被儲(chǔ)存起來(lái)，以備日后調(diào)用。QuattroPremier采用金屬鉬四級(jí)桿，非常穩(wěn)定，日常工作情況下質(zhì)譜是不用校正的，只用調(diào)用以前做的校正表即可。3.4.雙擊質(zhì)譜調(diào)諧圖標(biāo)（MSTune進(jìn)入質(zhì)譜校正和調(diào)諧窗口。3.4.2點(diǎn)擊真空狀態(tài)圖標(biāo)去檢查真空狀態(tài),以確認(rèn)真空已達(dá)到要求。3.4.3點(diǎn)擊分析表頭并輸入下列參數(shù),如果需要進(jìn)行其他不同分辨率條件下的校正，則對(duì)應(yīng)輸入LMResolutior和HMResolution的值。SettingsGenericStartConditionsLMResolution15HMResolution15IonEnergy0.5Multiplier650SyringePumpFlow10選擇IonMode>Electrospray在+E,ectrospray條件下所做的校正均可以用于其他所有方式。!ES+;.^ource!3.4.4點(diǎn)擊，按下表輸入?yún)?shù)，做校正時(shí)采用下列常規(guī)的Electrospra條件。Settings<250ul/minCapillary(kV3.5Cone(V30

Extractor(V3RFlens(V0.3SourceTemp100DesolvationTemp200GasFlow-Desolvation350GasFlow-Cone503.4.5點(diǎn)擊氣體圖標(biāo)打開(kāi)氮?dú)狻S+!Source3.4.5點(diǎn)擊氣體圖標(biāo)打開(kāi)氮?dú)狻S+!Source3.4.6點(diǎn)擊操作按鈕（Operate當(dāng)質(zhì)譜的電壓被加上時(shí)，操作按鈕的顏色會(huì)從紅變?yōu)榫G。作按鈕的顏色會(huì)從紅變?yōu)榫G。Sb-[Jg~F■噸曲1”D■曲躊也葉」［?J*滬［|Z:Sb-[Jg~F■噸曲1”D■曲躊也葉」［?J*滬［|Z:出肘|時(shí)|?l?t￡CtaTf*^■^■9尸1陽(yáng)ILfKM5MLii^fintn Jimrtl3d JM■IHEH7n J571M—qjF.i丄席?|7||匪l^riHudi 在 gjpfcfai3*CIiB9tzkTL-t*f?&<1|耶？■r廠(chǎng)Figure3-2TunePageunderOperatecondition3.4.7將250ul進(jìn)樣針抽滿(mǎn)校正液（SodiumIodidewithCeasiumIo或depG等并安裝在質(zhì)譜下方的注射泵上，設(shè)定注射泵流速為10ul/min3.4.8從調(diào)諧界面選擇Options>SyringeTy確定被選定（如果用其它的進(jìn)樣針,可以從表中去選擇，或者自己重新定義。3.4?按下注射器圖標(biāo)（syring注射泵開(kāi)始轉(zhuǎn)動(dòng)向質(zhì)譜輸入校正液。3.4.1在相應(yīng)的ReferenceFi里查找要選擇想監(jiān)測(cè)的質(zhì)量數(shù)。Bed*[■!-二]i|U^S-SBTSfS-廠(chǎng)LAXCdbJM.05^3031131DAMDiuwgyj疋FnuLT.FragsE.-MJCditatfkirr-|4?Ldihtf>jrrMSIStan bri -Nc-cdbitfhrr-MEZStale=-FJc-ca4taahfr-MSZ呂3伽綢=-Mc-caitaahfr-MSZSo-an -Nc-cdthtfkifr-KJNFigure3-3CalibrationOptionsWindow3.4.1在Mass編輯器，打開(kāi)mass窗口，172.8840622.5667、1072.24941971.6149將監(jiān)測(cè)范圍（span和增益（gaii調(diào)到適當(dāng)?shù)闹怠?.4.12點(diǎn)擊File>Open選擇Uncal.ca并打開(kāi)(Open,校正窗□的三種校正類(lèi)型都必須顯示“NoCalibrati如上圖所示，如果不是，點(diǎn)擊Calibrate>DefaU去刪除這些校正。3.4.13從菜單欄中選擇校正(Calibration3.4.14在Referencefi中選擇校正文件NaCis2(ZQ2000用，NaCis4(ZQ4000用。3.4.15從菜單欄中選擇“Calibrate>StartAcquisition”3.4.16在校正類(lèi)型界面，三項(xiàng)都打勾選定，接著選擇采集參數(shù)按鈕IAcquisitionParametef?:-..-'~IAcquisitionParameter?.-..Tvpesr-StaticCalibration常SeamingCalibrationScarSpeedCorripensaticn3.4.17選擇校正參數(shù):5canFiom |5D amu□KFigure3—4CalibrationAcquisitionSetuoDialogBO擊30K.返回到自動(dòng)校正對(duì)話(huà)欄,同時(shí)啟動(dòng)注射泵開(kāi)始進(jìn)樣。5canFiom |5D amu□KFigure3—4CalibrationAcquisitionSetuoDialogBO擊30K.返回到自動(dòng)校正對(duì)話(huà)欄,同時(shí)啟動(dòng)注射泵開(kāi)始進(jìn)樣。AcquisitionParametefs-..Tvp8￡-Static匚alibr^tionvSeamingCalibration』Scar:SpeedCorripensationAcquisitionParameter?...Cdlilbi祇訕AcquisitiQiniS<lup心匸qj馬前cnPmianf忒EigFigure3—5AutomaticCalibrationDialogBox3.4.19選擇采集（Acquire和校正（Calibrate擊OK開(kāi)始校正，質(zhì)譜將會(huì)自動(dòng)運(yùn)行校正并和參考文件（NaCis中的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量數(shù)進(jìn)行進(jìn)行比對(duì),采集和校正大約需要2分鐘時(shí)間。

3.4.20校正程序完成后,校正統(tǒng)計(jì)滿(mǎn)足指定的要求,將顯示校正成功的信息并出現(xiàn)校正結(jié)果。Atrtijnhcdic;CdlitirdlianT陽(yáng)曲P PMSIf?5canningCaibidtETi KM5Z禺 5peedCampensdunPicccsse石Cdfcrele□Picccsse石Cdfcrele□AcquitEVmlyPsFirtHeocrtFigure3-6CalibrationOptionsWindowwithCompletedCalibrationDetails3.4.2從校正頁(yè)面選擇File>Save并，輸入校正文件的名稱(chēng)。3.4.2從Figure3-3CalibrationOptionsWi選擇WFile>Calibra打開(kāi)DisplayCalibrationGrap對(duì)S話(huà)框。Figure3-7DisplayCalibrationGraphsDialogBoxFigure3-7DisplayCalibrationGraphsDialogBox3.4.23點(diǎn)擊Browers選擇用于校正的文件，點(diǎn)擊OK,重復(fù)校正程序并顯示校正報(bào)告。Figure3-7CalibrationReport3.4.24滿(mǎn)足要求后，保存校正文件。3.4.25現(xiàn)在儀器已經(jīng)被校正了，下一步可以用調(diào)諧界面去優(yōu)化你的樣品的檢測(cè)靈敏度。3.5調(diào)諧（Tuning質(zhì)譜針對(duì)特定的樣品都有其特定的最佳化條件，了解樣品特性，如何選擇電離源，流動(dòng)相及流動(dòng)相添加物，使樣品能夠電離是關(guān)鍵。通用的調(diào)諧參數(shù)可以用來(lái)分析大部分樣品，大部分的參數(shù)一旦設(shè)定之后不需要調(diào)整，調(diào)整對(duì)于信號(hào)的影響不大，而對(duì)于部分樣品來(lái)講，特別是含量極低的狀況下，需要通過(guò)調(diào)諧來(lái)優(yōu)化最佳參數(shù)。3.5.1點(diǎn)擊質(zhì)譜調(diào)諧圖標(biāo)進(jìn)入調(diào)諧窗口。3.5.2點(diǎn)擊真空狀態(tài)圖標(biāo)確認(rèn)真空規(guī)已經(jīng)達(dá)到滿(mǎn)量程.3.5.3根據(jù)樣品條件的需要選擇相應(yīng)的離子模式，比如IonMode>Electrospray+3.5.4點(diǎn)擊分析頁(yè)面，按下氣體開(kāi)關(guān)按鍵，打開(kāi)氮?dú)狻?.5.5將已經(jīng)裝滿(mǎn)你的樣品的注射器裝在注射泵上，用管路接到質(zhì)譜，請(qǐng)選擇ug/ml級(jí)的樣品來(lái)調(diào)諧。設(shè)定注射泵流速通常為5-10ul。也可以用三通，一路是正常工作流速的流動(dòng)相，一路是樣品，二者混合后進(jìn)入質(zhì)譜。3.5.(一般對(duì)于ESI正離子模式使用乙晴和水為流動(dòng)相，提高錐孔電壓將增加碎片信息.Settings<250ul/min>250ul/minCapillary(kV3.53.5Cone(V20-3020-30Extractor(V55RFlens(V0.50.5SourceTemp120150DesolvationTemp300400GasFlow-Desolvation350600GasFlow-Cone50503.5.7按下操作按鈕，當(dāng)電壓被加上時(shí)，Operat圖標(biāo)將由變。3.5.8點(diǎn)擊注射器圖標(biāo)（syring注射泵開(kāi)始轉(zhuǎn)動(dòng)，向質(zhì)譜輸送樣品。在質(zhì)譜編輯窗□，輸入要調(diào)諧的樣品的分子離子峰，并設(shè)定一個(gè)較小的span所有的輸入請(qǐng)按回車(chē)鍵確認(rèn)。3.5.9調(diào)節(jié)各項(xiàng)參數(shù)包括Probe的位置使目標(biāo)峰的強(qiáng)度最佳化。3.5.1選擇File>SaveA輸入調(diào)諧文件名稱(chēng)，以備調(diào)用。3.5.1點(diǎn)擊注射泵圖標(biāo)停止注射泵流速,并點(diǎn)擊Standby當(dāng)MS在待機(jī)狀態(tài)時(shí)，會(huì)由變。3.6信號(hào)采集本單元介紹如何直接在調(diào)諧界面（TunePage進(jìn)行樣品信號(hào)采集。3.6.1點(diǎn)擊氣體圖標(biāo)打開(kāi)氮?dú)猓聪虏僮靼粹o。當(dāng)電壓被加上時(shí),Operat圖標(biāo)將由變，確定質(zhì)譜已經(jīng)在工作狀態(tài)，并有樣品被輸入質(zhì)譜。PrgMforOperate乩lonbUfe^Hyiruri|arFutmjjtxuUmi口聲H&居杠陽(yáng)TL￡tlfl ?出八9UK比 iBFLiWlMJfclttiF—J-a竺F出八9UK比 iBFLiWlMJfclttiF—J-a竺F■J 女I-—J—1DB[J--I?h-1rF—in Iri Udll aVUTifriMItill3Uiiri-^j?n“■cmutviIT￡『nrriA￡dXU?-、”環(huán)甲rn Im~WliwH^KHTinrq~|inFigure3-8TunePageofMSScan3.6.2點(diǎn)擊Acquire圖標(biāo)將出現(xiàn)以下對(duì)話(huà)框。3A.i;qui5iithii7Setup一Du呂兩"燈:FileDataFiteNdmg-D*aFi_nclnn3A.i;qui5iithii7Setup一Du呂兩"燈:FileDataFiteNdmg-D*aFi_nclnnFigure3-9AcquisitionSetupDialogBoxH5Scan二CcnliddD孩日Faimai.Trw"iv.I*匚」■.-?r”-rfc；|；'l.fStsnlinreklErdkb目卜一一Irtti予canTime■⑸ 131北匕|Qrign...DataFileNam在此輸入所采集的數(shù)據(jù)文件名。DataFormat所采集數(shù)據(jù)的存儲(chǔ)方式，有CentroidContinuum和MCA三種選擇。Centroid棒狀圖:每次掃描的數(shù)據(jù)都會(huì)被存下來(lái)，可以單獨(dú)查看每次掃描的質(zhì)譜圖或者是summedspectrum數(shù)據(jù)雖然按照連續(xù)(continuum方式采集，但會(huì)被自動(dòng)處理并以棒狀圖的方式存儲(chǔ)，在一個(gè)質(zhì)量點(diǎn)只選擇一個(gè)代表性的點(diǎn)存儲(chǔ)，所得到的譜圖是一根一根棒狀的譜圖，優(yōu)點(diǎn)是文件的數(shù)據(jù)量小，不會(huì)占用很多的硬盤(pán)空間，是較常用的采集方式，缺點(diǎn)是從棒狀圖中無(wú)法去判斷譜圖的分辨率，對(duì)于沒(méi)有分開(kāi)的同位素峰，可能會(huì)造成質(zhì)量不準(zhǔn)確。Continuum(連續(xù)掃描:每次掃描的數(shù)據(jù)都會(huì)被存下來(lái)，可以單獨(dú)查看每次掃描的質(zhì)譜圖或者是summedspectrum,可以得到每個(gè)質(zhì)量點(diǎn)的峰形和分辨率信息，但數(shù)據(jù)量較大。MCA:每次掃描的數(shù)據(jù)都會(huì)被加和在一起，因?yàn)樵胍粜盘?hào)不會(huì)出現(xiàn)在相同位置，所以MCA方式采集的數(shù)據(jù)是樣品信號(hào)被疊加，而噪音則是平均，因而能夠提高信噪比。通過(guò)選擇StartMas和EndMass來(lái)確定要掃描的質(zhì)量范圍。RunDuratioH言號(hào)采集的時(shí)間ScanTime每次掃描所花的時(shí)間,ScanSpeed掃描速率二MassRange/(ScanTime+Inter-scan在計(jì)算掃描時(shí)間時(shí),要保證掃描速率在已被校正的范圍內(nèi)。InterScanDel每次掃描之間的間隔,一般為0.1S3.6.3點(diǎn)擊開(kāi)始鍵(Star即可開(kāi)始采集信號(hào)。3.6.4采用同樣的方法可以進(jìn)行MS/MS掃描調(diào)諧。不同的是需要選擇母離子,打開(kāi)碰撞氣,給予一定的碰撞能量。ParametersSettingsEntrance0ExitCollisionIonEnergyCollisionGasFlow(mL/min這個(gè)單元介紹如何設(shè)置液相色譜的泵,進(jìn)樣器和檢測(cè)器的條件。3.7.1點(diǎn)擊液相方法圖標(biāo)進(jìn)入方法編輯界面。r 1Untitled.wat-lnl?1Method 匚|XE)le iciolfL匚軻tjejpStatusIndicaloffRuiningStatus[nletPlutwOrAuNTi卅s(nuhd)FlowR-3!e(piRntin|Pressure(Vail：OJOOOOJOOODO100.0弩0.0規(guī)Figure3-11InletStatusStart/StopPum泵流速的開(kāi)關(guān)控制。Lampon/of控制2996檢測(cè)器的燈的開(kāi)或關(guān)。脫機(jī)控制狀態(tài),在液相自己的控制面板來(lái)操作儀器。WetPrime2695WetPrim濕灌注控制。3.7.2點(diǎn)擊Inlet設(shè)置泵的參數(shù)。RrilvprifsahHFlnwsa在溶劑和流速頁(yè)面，按如下設(shè)置:SolverlsandRaws|RunTiitb[mir:]DegasserFlow〔ml/mir]FImFiampIrrms]SolventsandFIqwkrnlunnSetupPump^radien*PurpEvenhPumpAFumpBfPumpCDumpD$匚晦ntNa(neFigure3-12InletMethod1輸入溶劑的比例。Solventw日ndFlows2設(shè)置泵的運(yùn)行時(shí)間。3對(duì)于典型的質(zhì)譜流速（50u-350u］在下拉菜單中選擇25u為StrokeRat設(shè)置。SolventsandFlows4輸入泵的初始流速。RnlvfintsandFb在柱溫設(shè)定頁(yè)面，按如下設(shè)置:Figure3-13ColumnSetupITemperatureC設(shè)定柱溫箱工作溫度。2TemperatureLimit(+]/-設(shè)定柱溫箱溫度允許范圍。3HighPressure(Ba設(shè)定液相系統(tǒng)壓力最高限,當(dāng)系統(tǒng)壓力超出范圍時(shí),軟件會(huì)自動(dòng)停止流速。4Pre-columnVolume選項(xiàng)輸入系統(tǒng)滯后體積，對(duì)于2695系統(tǒng)，—般為550ul該參數(shù)只對(duì)梯度起作用。c在頁(yè)面設(shè)定梯度表。1設(shè)置梯度初始條件，按InsertLi編入梯度表,然后分別編輯、插入各項(xiàng)梯度條件。(curve是6線(xiàn)性梯度變化。注意梯度表的第一行的梯度曲線(xiàn)必須是Curve1In&ertDeieteDeleteLineLineTable2如果液相色譜系統(tǒng)有樣品加熱和冷卻裝置，點(diǎn)擊圖標(biāo)設(shè)

QlejjjewlooJsL匚Wabefs￡695fjelp口[-'■mJ備鏑論垢曰爭(zhēng)◎「譽(yù)劉Chamel1|Channel21QlejjjewlooJsL匚Wabefs￡695fjelp口[-'■mJ備鏑論垢曰爭(zhēng)◎「譽(yù)劉Chamel1|Channel21￡ndW^vetenglth[nm]DataAcquisitiori$tartWavelenglih(nfn)Resolution[rm]7jnisrpolaLe65ErwnEspostreTime(ms)IrKbumBritCohlrol"AutoEHpasuie(speictra/sfflc)FiterRsspQns&2S-aveFiterRsspQns&2S-aveToDisk3點(diǎn)擊設(shè)置2996二極管陣列檢測(cè)器參數(shù)aStartWavelength(nm,EndWavelength波長(zhǎng)采集范圍bResolution(n設(shè)定光譜分辨率，分辨率越高，數(shù)據(jù)量越大。通常要看紫外光譜數(shù)據(jù)，光譜分辨率可以設(shè)到最高(1.2nm如果只為了看色譜圖，光譜分辨率可以設(shè)定到3.6nm或4.8nm,以減少數(shù)據(jù)量。同樣，波長(zhǎng)的采集范圍也可以盡量縮小。cSamplingRat信號(hào)采集數(shù)率，采集數(shù)率越高，數(shù)據(jù)量越大。如果要保證對(duì)一個(gè)色譜峰準(zhǔn)確積分，通常這個(gè)色譜峰最少要有20個(gè)數(shù)據(jù)采集點(diǎn)擬和而成，以此來(lái)設(shè)定采集速率。dstoptim是指每個(gè)樣品PDA的采集時(shí)間，這個(gè)時(shí)間一般應(yīng)該與泵的運(yùn)行時(shí)間和質(zhì)譜方法的采集時(shí)間一致。e選擇SavetodiS保證PDA數(shù)據(jù)被采集并存在電腦內(nèi)。4選擇File-SaveAs并輸入液相方法的名稱(chēng)。5點(diǎn)擊狀態(tài)圖標(biāo)，確認(rèn)所有的狀態(tài)燈是綠的。6如果液相通訊有問(wèn)題，在液相方法編輯主菜單選擇LC/將通訊復(fù)位。7液相色譜自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣，在液相色譜編輯窗口，選擇Tools/InstrumentCon:點(diǎn)擊,確認(rèn)EvenIn被打上勾。

Figure3-15InletConfiguration3.8創(chuàng)建質(zhì)譜方法本單元介紹如何創(chuàng)建質(zhì)譜采集方法。3.8.在Masslynx軟件主界面點(diǎn)擊質(zhì)譜方法（MSMethod圖標(biāo)，進(jìn)入質(zhì)譜方法編輯界面。QuattroPremie具有全掃描（MSScan、選擇離子反應(yīng)（SIR、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM、子離子掃描（Daughters母離子掃描（Parents以及中性丟失（NeutralLos等多種掃描功能。

Figure3-16MSMethodEditor3.8.2以MRM為例,創(chuàng)建質(zhì)譜方法，點(diǎn)擊MRM圖標(biāo)，打開(kāi)MRM功能編輯器（MRMFunctionEditorMRM方式有較高的靈敏度，用于定量計(jì)算。Figure3-17MRMFunctionEditor3.8.3輸入母離子的質(zhì)量數(shù)（Paren、子離子的m/z值（Daughter駐留時(shí)間（Dwell,Sec以及錐孔電壓（Cone,Volt和碰撞能量（CollEnergy,e等參數(shù)。點(diǎn)擊Add，以上輸入的值被添加到FunctionLi中。另外也可以選擇使用調(diào)諧窗口優(yōu)化時(shí)所設(shè)置的條件。這時(shí)的錐孔電壓和碰撞能量會(huì)按照調(diào)諧窗口的設(shè)置執(zhí)行。3.8.4在IonizationMoc下拉菜單中選擇離子化模式，在RetentionWindows(mins中輸入質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集時(shí)間。3.8.5如果還有其他離子對(duì)，要和上一個(gè)MRM采集在同一張色譜圖上時(shí)，重復(fù)上面兩?步，最后選擇OK。如果要用不同通道采集不同選擇離子色譜圖,則直接選擇OK,再重新點(diǎn)擊開(kāi)始。一個(gè)質(zhì)譜方法里可以有多個(gè)通道，但過(guò)多的通道會(huì)降低靈敏度。3.8.6從主菜單中選擇File〉SaveA并輸入質(zhì)譜方法的名稱(chēng)，退出質(zhì)譜方法編輯界面?，F(xiàn)在質(zhì)譜方法已經(jīng)建好。3.9創(chuàng)建樣品列表(SampleList以下步驟將介紹如何創(chuàng)建樣品列表，采集樣品，包括定量。以下是Masslynx軟件主界面。

QjUnl?I護(hù)Fm1』^Ujnlir§!.np3--J'.KA尸MB*2'J-JJ■■』QJ屈如兮|審"野UasQucti*HEmpty4RFFIiJfLJ工&01總A—EK4RFFIiJfLJ工&01總A—EK扌bHLTAMgsln*rn.irv>Fn^■■ErIJ >1用g"mst"■ 詢(xún)仕rb?*iFfKFVafcjiMl-rtfrii-TjM■d冷1'El叩処］1i4iM*knb|耳地時(shí)FjlridDEFUL1DEHFMJlT}啊mp壞T.<2匚 □=;11DTM剛acrwLiBffMJLl1VDCQIi3M*#■p-il撫乂珂□DtroLlDtK/Ll?lQtm^rcM砧IS,'I^^hI詢(xún)DLFmjLPDti-WLIlUlUOSdx工妙他DF：F?JLTDfTWLlIDOMISwMF"L_T'dd：日EFWMTCNXiKTIIbdOtfl^imwWr-；IcgtiMafDEFnA-IMtwLI?lEiaQtwiMia，A5W>?口ER^JUMf*ULlST"ID^nOlirdw11旦nfagAriOCHET砂TWfaiLT帳11Whd<KDCFAULTDfiTULToin-nnocu1沁起％DLrAULFI3UMIL1u1DCDD0Cu卜n1MUbVIJ■■MHfiVUlEKMuUuip-mJnuHueR禪T-?np?rEUDERHJL1&DM4jLTIDtOd^Pi誦■R?i■■帥DUJWU"mmiltIIingiju*.護(hù):H1IW?B—肚rwuDC^MltTilID財(cái)T?Q"0:rweffiiDthAULPl%!|^ULIIDOJU^uMa迥[ftp4Wl|R#mat*■世OCFAUtlMri4JLi?■4Rjrixk^±pD?□FFa^-TDf別LIT90?□h?峠?世MtjujlImnrwu^iipp*53+^71N.r-rrtWDEFiWLPWf-*WL1町幀r^iXsiJWEMi-mEhr15旺NWDtWLI1QIWT甲■Q:n,\MVifUHflMWFlIi□FF4JIJWWJLTIQDOnis^ivD理USASQ4nwuwi^VfirruAiinoB2梓乂4rs:料!|i運(yùn)!亠1jDLFMJLPDUmILI4r'M肚r-tofc^U口計(jì)皿E*電rib\R?K4MGH1?5EFJMAJMfJiAlBOW)￡e4rSpaicEnnthrwn>?gqrfiTiM?pEAt■fan?gl^]Figure3-18SampleList3.9.1選擇,新建立一個(gè)樣品表3.9.2樣品表介紹輸入樣品名稱(chēng)（樣品名必須不同,否則會(huì)被覆蓋輸入對(duì)每個(gè)樣品的文字性描述，可以空著不輸入。和選擇運(yùn)行樣品要使用的質(zhì)譜方法和液相方法。和定義2695自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品瓶號(hào)，及進(jìn)樣體積（l-100ul定義樣品類(lèi)型，如果是標(biāo)準(zhǔn)品選擇Standard如果是分析樣品則選擇AnalyteSampleTypeAnalyte SampleTv\f在里輸入標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，如果有其他不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，可以在ConeB,ConcC,ConeD需要在CustomerDispla里選出……輸入。不同的樣品可以在這里調(diào)用不同的調(diào)諧文件。如果樣品表的表頭沒(méi)有顯示要使用的內(nèi)容，用鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)擊樣品表的第一行第一列，然后選中，會(huì)出現(xiàn)下面列表，在里面將將所需要用的內(nèi)容選中。3.9.選擇Sample/Add設(shè)定要添加的樣品數(shù)量。

SampleTypeAnalyteSampleTypeAnalyte3.9.選擇，或者在主菜單選擇File>Save輸入這個(gè)樣品表的名稱(chēng)后綴為.SPL。樣品表就已經(jīng)編好等待運(yùn)行。3.10運(yùn)行樣品列表(SampleList3.10.點(diǎn)擊狀態(tài)圖標(biāo)，確認(rèn)MS和LC狀態(tài)是否已經(jīng)Ready3.10.2選擇運(yùn)行，開(kāi)始運(yùn)行樣品。3.10.3如果僅采集數(shù)據(jù)而不同時(shí)進(jìn)行處理，可以只選擇，然后點(diǎn)OK。3.10.4如果要想在采集樣品時(shí)同時(shí)處理數(shù)據(jù)(Integration，Calibration，andQuantiatio請(qǐng)選擇并按OK。3.10.5如果想使用自動(dòng)定量功能，請(qǐng)同時(shí)選擇

若要打印，選擇，接下來(lái)在BrowsetotheQuanitfyMethodfile選擇定量方法，并按OK確認(rèn)。Figure3-19StartSampleListRunDialogBox3.10.6如果樣品沒(méi)有開(kāi)始運(yùn)行，請(qǐng)確認(rèn)暫停鍵是否被按下3.10.7定義譜圖顯示。點(diǎn)擊圖標(biāo)再點(diǎn)擊?點(diǎn)擊圖標(biāo)并選擇。選擇和,OK確認(rèn)。3.10.8查看色譜圖和質(zhì)譜圖a.在MassLynx主界面，選擇File>Oper選擇打開(kāi)相應(yīng)的要查看樣品所在的樣品表（SamplelistP出W.yrtKQUdailFfQwUlljr^.ApI閃障1隊(duì);廠(chǎng)-_— — T ■中q*ej?護(hù)Izn^MvSp^^tjum:nForriaiaiy^rriMjpEdll-*5*^<plii-2*MSE^￡E--SPQj.h占InMHM?thndaIDr-fahii朗!iA皿i^YUI口妙丫溯環(huán)SAYIO#5計(jì)I■?nrubHDCTALh.rGWhi曲DEFALAT也齢嚀時(shí)DEF^JULT兀伽創(chuàng)和?PETWA.TIt^vddd OFrAlAT則 OjEFWAIgAriiM QEFAMifI^S^hnintR HEJiUJlTI 也 DETWlT咔匚 DEFAULTWHQC g￡T41A.TI討“肝 PErAJJitffaEkM-irvrh'M^ITS1w.1DEfiOMTDCFALE.TDEF-dATDEFEATDtrw^lCi|ii-ALh.'l口HaimIdefaultDEFALkTDEfWATDEFAULTPEWlUTldO￡iEdit&ihuEd￡iRriur申HmRmHal脳R?陽(yáng)n?jHdUOAMOPn-Qnu111T11:::2帶囂:*?￡工r>iib-?ji.i口燈血［bmujLfDEFAJLltTDETJMXTDEfAUlT6ri*JAI口"AJUODEFALilT□rnuLTDEFAULTDEFAIATDLrauirPIfajat口trwLHiPI*AUHPE4-MJLTDCF^ULlDEF-dJLTDEfMfcTDEFEATQlirAULl口r.TAJLJLl□EtUJLlD^flOJLTDE^AXATDEFAJIATPEtAiAl口|.l*iAtIDN? 勺wd■弓D2IBM?n'e10.DWuraIDGW? 和ar?j鈿hM-tDtfe ^InlNd血他 忖ms 19IClOB &iwdtfd '13U)?? CC D)I4JW3 DC 2mW l】R nA?MMa il⑷財(cái) Ann bt打血jfcru^0KmcuHl如An^taiUIDW°Ani￥>DID.WDUHJOWAn**#D10WOppgg gAjuM*0b.在樣品表中單獨(dú)或同時(shí)選中要查看的樣品，然后點(diǎn)擊rra.<Qii和刃呻QUuiUf，樣品色譜圖會(huì)被打開(kāi)。Figure3-21ATypicalChromatogramb.也可以在譜圖顯示窗□去選擇和打開(kāi)已存儲(chǔ)的文件，點(diǎn)擊Experiment可以查看該數(shù)據(jù)的所有參數(shù)設(shè)置。c.對(duì)于MS全掃描色譜圖，雙擊要查看的色譜峰，對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜圖會(huì)出現(xiàn)在質(zhì)譜窗□但只是一次掃描的信息,若用鼠標(biāo)右鍵選中一段時(shí)間，出現(xiàn)的質(zhì)譜圖則是幾次掃描的總和（取決于所選時(shí)間的長(zhǎng)短。Figure3-22ChromatogramDataBrowerFigure3-22ChromatogramWindowFigure3-23SpectrumWindow通常可以選擇自動(dòng)差減功能來(lái)提取一個(gè)干凈”勺質(zhì)譜圖,可以扣除溶劑里的干擾,在色譜圖窗口,點(diǎn)擊,然后分別用鼠標(biāo)右鍵選擇色譜峰和要差減的基線(xiàn)。雙擊質(zhì)譜圖中質(zhì)量數(shù)強(qiáng)度最大的,將顯示該質(zhì)量數(shù)的色譜圖。f選擇圖標(biāo)，激活質(zhì)量色譜圖對(duì)話(huà)框,可以對(duì)圖譜進(jìn)行解釋處理。

MassChromatogramxCancelFile...File:Pest03Description(nn/z):f*Addtrace「ReplacetraceNewwindowMassChromatogramxCancelFile...File:Pest03Description(nn/z):f*Addtrace「ReplacetraceNewwindowFigure3-24TheMassChromatogramdialogforfullscandataFigure3-25TheMassChromatogramdialogforMRMdataDescriptioi根:據(jù)數(shù)據(jù)類(lèi)型不同而不同,x,y分別代表質(zhì)量數(shù)或通道。x顯示x的色譜圖;x+y顯示x加y的色譜圖;x-y顯示x減y的色譜圖;x_y顯示從x到加y的所有質(zhì)量數(shù)或通道的總和的色譜圖。增加色譜圖到當(dāng)前窗口中替換當(dāng)前窗口中的色譜圖在新的窗口顯示色譜圖g選擇圖標(biāo)，激活圖譜平滑對(duì)話(huà)框,對(duì)圖譜進(jìn)行平滑處理。設(shè)定平滑參數(shù)后，點(diǎn)擊OK,開(kāi)始進(jìn)行平滑處理,得到平滑后的圖譜。Figure3-26TheSmoothchromatogramdialogFigure3-27TypicalSmoothmessagebox

Time10.0010.5012.0011.0011.50I585uhor2cnanneisTIC8.06e4Preparedstandard.'5TTime10.0010.5012.0011.0011.50I585uhor2cnanneisTIC8.06e4Preparedstandard.'5TSTANDRMSm(SG,2x7)IOO-.1評(píng)Figure3-28ResultsofchromatogramsmoothingI廠(chǎng)Ita--h-h選擇圖標(biāo),激活圖譜積分對(duì)話(huà)框，對(duì)色譜峰面積進(jìn)行積分。設(shè)定積分參數(shù)后，點(diǎn)擊OK,開(kāi)始積分，得到積分結(jié)果。Preparedstandard.'5J'STANDRMSm(SG,2x7)IOO-IIOO-IFigure3-29TheIntegratechromatogramdialog

Figure3-30PeakIntegrateinProgressmessagei選擇Process>SignalToNoi命令,激活信噪比對(duì)話(huà)框,選擇好參數(shù)后，點(diǎn)擊OK,即可得到信噪比結(jié)果。信號(hào)范圍噪齊范閑□K兇因NoisePeakIntegrationPeakIntegrationinPrcgRjsCan<eiFlangej1346:1371Cancel1411:1511HaiseNOExtidPfocsssirigIgnore ofScans信號(hào)范圍噪齊范閑□K兇因NoisePeakIntegrationPeakIntegrationinPrcgRjsCan<eiFlangej1346:1371Cancel1411:1511HaiseNOExtidPfocsssirigIgnore ofScans金SignalloHoistRiocessirtgIgnore 兩Figure3-31TheSignaltoNoisedialog3.11用QuanLynx來(lái)編輯定量方法3.11.在Quanlynx界面中選擇,會(huì)出現(xiàn)定量方法編輯界面。EditMethodTEditMethodTMethodEditor-[Untitled]JnJ2dFileEditHelpCompound:Figure3-32TheQuantifyMethodEditorNameInternalRef|[None]QuantifyTraceSec>>FileEditHelpCompound:Figure3-32TheQuantifyMethodEditorNameInternalRef|[None]QuantifyTraceSec>>|AcquisitionFunctionNumber如丫TConcentrationofStandards|pjxec|Jl.OOOPeakLocation(*RetentionTime(mins)RelativeRetentionTime3.11.2同時(shí)打開(kāi)相應(yīng)的色譜圖,用鼠標(biāo)右鍵選擇相應(yīng)的色譜峰,該色譜峰對(duì)應(yīng)的信息會(huì)自動(dòng)被添加到定量方法編輯界面里。GerfiiaiParameter;.[cWortoiurorGeneralParameters..dim/