/12圖二二u俯a寸圖二二u俯a寸94CfI4匚的-''I\l-^而A冷卻T”泥將一物納住利“補死1爻體細艙平斯肝腦代孕母干構建重組質粒時需要的工具酶有，對獲取的目的基因可用技術對其擴增。（2）實驗小組用BamHI和BlgII兩種限制酶切割目的基因和質粒，構建重組質粒后導入大腸桿菌中，在篩選重組質粒的培養基上，若大腸桿菌菌落顯藍色，說明導入了。沒有導入任何外源DNA的大腸桿菌（填“能”或“不能”）在該培養基上生存。（3）將若干個質粒和目的基因用BamHI和BlgII兩種限制酶切割后，用DNA連接酶相連，然后再用BamHI和EcoRI切割成功連接后的產物，獲得了長度為0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四種長度的DNA片段，則目的基因的長度為kb（已知目的基因的長度大于1kb，1kb=1000個堿基對）。14．醫學研究發現，番茄紅素具有一定的抗癌效果，其合成、轉化途徑如圖一所示。由于普通番茄合成的番茄紅素易發生轉化，科學家設計了一種重組DNA（質粒三）能表達出雙鏈RNA（發卡），番茄細胞可以識別侵入的雙鏈RNA并將該雙鏈RNA及具有相同序列的單鏈RNA一起降解，提高了果實中番茄紅素的含量（圖二）。請分析回答下列問題：肥氧醯*ftS便化尋京*雙曲窿c艱鍵地監、II冊對段陳j端（）表達出發卡的DNA片段實際上是兩個反向連接的基因，由于“發卡”阻止了其在細胞內的（填“轉錄”或“翻譯”）過程，所以提高了果實中番茄紅素的含量。（2）為保證第二個目的基因片段反向連接，處理已開環質粒所用的兩種限制酶是和。（3）科學家發現，培育成功的轉基因番茄植株對光能的利用能力有所下降，據圖一推測可能的原因是。為解決此問題，可以按照乳腺生物反應器的原理，在此表達出發卡的DNA片段前面加入只在果實中發揮作用的。（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外側游離的磷酸基團。對已開環的質粒二兩端去磷酸化的主要作用是阻止其，該DNA分子仍可以和目的基因連接，形成缺少個磷酸二酯鍵的重組質粒，隨后在細胞中被修復。15.下圖是科學家利用人的a-抗胰蛋白酶基因培育轉基因羊的過程，據圖回答下列問題。（1）獲得目的基因有許多方法，圖中A到B獲得大量目的基因的方法,該技術擴增目的基因的前提是要有一段已知序列，以便根據這一序列合成。（2）圖中B到C的過程屬于基因工程操作程序中的,1處表示,是一段特殊結構的DNA7/12

片段，位于基因首端，是酶識別結合的部位，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA。C到D過程采用最多的方法是，受體細胞D通常是。（4）D到E，E到F分別使用的技術是、基因工程參考答案Sau3Al可以顯著降低化學反應的活化能氨芐青霉素用限制酶切割后破壞了基因，但不會破壞A基因，導入重組質粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗IGAItC曲（4；A1CA性），能在含氨芳青霉素的培養基上生存下來U.-i\c.i都不能桑甚胚或囊胚質粒感染煙草細胞，把目的基因插入到煙草細胞的染色體A上防止目的基因自連和質粒自連,以形成帶有目的基因的重組質粒否含有目的基因的質粒中抗四環素的基因被破壞雙鏈復制B、C目的基因和質粒自身環化農桿菌轉化法花粉管通道法基因工程育種、單倍體育種通過花粉向其他植物擴散早期胚胎培養&細胞正常的）a基因脫氧核苷酸序列或堿基對序列或2遺傳信息）限制性核酸內切酶、連接酶和胰蛋白酶三抗a蛋白的抗體治療性（或體細胞核移植等）脫氧核苷酸排列順序（或堿基對排列順序）引物磷酸二酯鍵質粒上的可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的上基因表達載體上的目的基因首端為加入啟動子A復制原點和酶切位點啟動子和終止子2，4-D乙提高受體細胞的轉化率（或使之成為能吸收周圍環境中分子的感受態細胞）染色體A除草劑1/3X，4X3，X2，X1限制性核酸內切酶堿基互補配對變性含量高②③a—抗胰蛋白酶的mRNA乳腺蛋白基因的啟動子篩選含有目的基因的受體細胞核移植技術減數第二次分裂中滋養層大腸桿菌是原核細胞，不含內質網和高爾基體等細胞器，不能對核糖體合成的蛋內質進行加工，不能產生有生物活性的a一抗胰蛋白酶復制原點、終止子c和Hind四環素聚合酶鏈式（或PR酶（或酶）引物乙堿基互補配對雙鏈復制花粉母本纖維素酶和果膠酶農桿菌轉化（或基因槍）細胞壁目的基因、標記基因、終止子R聚合酶結合和識別的部位指數（n）目的基因的核苷酸序列互補配對食物可持續整2n體性早期胚胎體外受精（轉基因、核移植）【答題空10】生理狀態【點睛】本題關鍵是計算PCR技術經n次循環后，得到的產物中含引物A的比例的分析規律：首先，在n次循環后，得到的含目的基因的DNA片段共有2n個；其次，每個含目的基因的DNA片段都有1條鏈可與引物A結合；第三，觀察發現在每輪循環中，最初以引物B結合的母鏈產生的這個DNA片段，始終不含引物A。核移植E細胞具有發育的全能性干擾素基因啟動子終止子和HindIII和PstIEcoRI和PstI綠抗原抗體雜交【點睛】PI技術擴增目的基因和基因工程操作步驟都是考試的重點，也是理解的難點，解題時極易失分，尤其是如何正確判斷限制酶的選擇，需要引起足夠的重視，現舉例如下：根）據目的基因兩端的限制酶切點確定限制酶的種類：①應選擇切點位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇PstI。②不能選擇切點位于目的基因內部的限制酶，如圖甲不能選擇SmaI。③為避免目的基因和質粒的自身環化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質粒，如圖甲也可選擇用PstI和EcoRI兩種限制酶但要確保質粒上也有這兩種酶的切點）。（2根）據質粒的特點確定限制酶的種類：①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶一致，以確保具有相同的黏性末端。②質粒作為載體必須具備標記基因等，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結構，如圖乙中限制酶SmaI會破壞標記基因。一氨芐青霉素限制酶、連接酶多聚酶鏈式反應）沒有目的基因的空質粒重組質粒不能1.8【解析】（1）依題意和圖示分析可知：在構建重組質粒時，由于目的基因的插入，使質粒中的基因的結構遭到破壞，導致基因編碼的酶失活或不能編碼該酶，因此不能使無色的一變為藍色；但目的基因的插入，沒有破壞（氨芐青霉素抗性基因）的結構，因此含有重組質粒的微生物對氨芐青霉素有抗性。綜上分析，若要篩選成功導入目的基因的重組質粒，培養基中應加入的物質有Xgal和氨芐青霉素。構建重組質粒時需要的工具酶有限制酶和DNA連接酶。利用PCR（多聚酶鏈式反應）技術可以擴增目的基因。⑵結合對（1）分析可知：成功導入重組質粒的大腸桿菌，基因編碼的酶失活或不能編碼該酶，因此不能使無色的Xgal變為藍色。因此在篩選重組質粒的培養基上，若大腸桿菌菌落顯藍色，說明導入了沒有目的基因的空質粒；若大腸桿菌菌落顯白色，說明導入了重組質粒。沒有導入任何外源DNA的大腸桿菌，因缺乏Ampr（氨芐青霉素抗性基因），對氨芐青霉素沒有抗性，所以不能在該培養基上生存。（3）已知目的基因的長度大于。依題意并分析圖示：將若干個質粒和目的基因用BamHI和BlgII兩種限制酶切割后，用連接酶相連，得到的重組質粒中含有1個BamHI酶切位點和1個EcoRI酶切位點，同時得到的沒有目的基因的空質粒中含有2個BamHI酶切位點和1個EcoRI酶切位點。用BamHI和EcoRI切割沒有目的基因的空質粒，會獲得了長度為0.7kb、1kb和2.5kb三種長度的片段；用BamHI和EcoRI切割重組質粒，會獲得了長度為2.8kb和2.5kb兩種長度的片段，其中2.8kb長度的片段中含有目的基因。綜上分析，可推知：目的基因的長度=2.8kb—1kb=1.8kb。番茄紅素環化酶翻譯胡蘿卜素、葉黃素合成受阻，光反應被抑制啟動子自身成環(自身環化)2【解析】(1)由于番茄紅素環化酶能催化番茄紅素轉化為胡蘿卜素，所以表達出“發卡”的片段實際上是兩個反向連接的番茄紅素環化酶基因，由于“發卡”阻止了其在細胞內的翻譯過程，所以提高了果實中番茄紅素的含量。()為保證第二個目的基因片段反向連接，處理已開環質粒所用的兩種限制酶是和H產生不同的黏性末端。(3)科學家發現，培育成功的轉基因番茄植株對光能的利用能力有所下降，據圖一推測可能的原因是不能合成番茄紅素環化酶，從而不能催化番茄紅素轉化為胡蘿卜素，導致胡蘿卜素、葉黃素合成受阻，光反應被抑制。為解決此問題，可以按照乳腺生物反應器的原理，在此表達出“發卡”的片段前面加入只在果實中發揮作用的啟動子。()去磷酸化是去掉黏性末端最外側游離的磷酸基團。對已開環的質粒二兩墻去磷酸化的主要作用是阻止其自身環化該分子仍可以和目的基因連接，形成缺少2個磷酸二酯鍵的重組質粒，隨后在細胞中被修復。擴增技術目的基因的核苷酸引物基因表達載體的構建啟動子聚合顯微注射技術受精卵早期胚胎培養胚胎移植【解析】試題分析：圖示為通過基因工程技術培育轉基因羊的過程，A到B為PCR擴增目的基因的過程，B到C為構建重組質粒的過程，C到D為將目的基因導入到受體細胞的過程，D到E為胚胎的早期培養，E到F為胚胎移植過程。（1）圖中A到B獲得大量目的基因的方法PCR擴增技術，該技術擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據