實驗二

微生物的培養與鑒定

(附：實驗報告要求)儀器分析實驗(生物分析)1之前我們介紹過傳統的微生物分類鑒定，由于是以形態、生理生化等特征為依據，因此實驗過程比較繁瑣，時間也比較長。微生物的快速鑒定和自動化分析技術

如何使微生物的鑒定快速、準確、簡易和自動化，一直是微生物工作者的研究熱點。隨著微電子、計算機、分子生物學、物理、化學等先進技術向微生物學的滲透和多學科的交叉，這方面的技術在微生物鑒定中被廣泛使用，推動了微生物學的發展。21．微量多項試驗鑒定系統微量多項試驗鑒定系統（細菌的自動化鑒定）是建立在數值（編碼）鑒定的基礎上的。常規(傳統)分類鑒定需要測定項目眾多，不能適應快速的需求，尤其臨床病原菌的鑒定。因此，應運而生的出現多種類型成套鑒定系統及編碼鑒定方法。3該方法的基本原理是針對微生物生理生化特征，配制各種培養基、反應底物、試劑等，分別微量（約0.1mL）加入各個分隔室中（或用小圓紙片吸收），冷凍干燥脫水或不干燥脫水，各分隔室在同一塑料條或板上構成檢測卡。4試驗時加入待檢測的某一種菌液，培養2-48小時，觀察鑒定卡上各項反應，按判定表判定試驗結果，所得結果以數字方式表達（編碼），并與數據庫數據(手冊或軟盤)對照，或輸入計算機后使用相應的軟件，從而得出鑒定結果(包括屬、種的名稱，有的鑒定系統還可給予分類位置)。5下面給大家介紹API/ATB系統中的API20E系統。API20E系統主要用于腸桿菌科細菌的鑒定，可在24小時內鑒定革蘭氏陰性的桿菌108種或項（腸桿菌科、弧菌科、非發酵革蘭氏陰性桿菌）。腸桿菌科在環境中及動物產品中非常普遍，其中部份是致病性(沙門氏、耶爾森氏等)7該系統的鑒定卡是一塊有20個分隔室的塑料條，分隔室由相連通的小管和小杯組成，各小管中含有不同的脫水培養基、試劑或底物等，每一分隔室可進行一種生化反應，個別的能進行兩種反應。

（上圖為陽性反應。下圖為陰性反應）8API20E需額外補充氧化酶結果孵育18-24小時，37oC鑒定可使用閱讀表編碼手冊APILABPLUS軟件10試驗過程:按照要求，將菌液加入每一分隔室培養(有的還需要添加試劑)觀察鑒定卡上20個分隔室中的反應變色情況，判定陽性或陰性編碼(每三個反應項目編為1組，共有7組，每組中每個反應項目定為一個數值，依次為1、2、4，各組中試驗結果判定為陽性的記為“+”，并寫下其所定的數值，反應為陰性的記為“—”，并寫為0，每組中的數值相加，便是該組的編碼數，這樣便形成了7位數的編碼)查閱API20E系統的檢索表或輸入計算機檢索，就能鑒定出該菌是什么菌種或生物型。1112操作步驟1(API20E)分離單個菌落挑單個可疑菌落盡量避免使用高度選擇性培養基調制菌液懸浮液(容量:5ml)操作步驟2(API20E)將菌液接種到小管或小管及小杯(CIT,VP和GEL)將試條放進培養盒內將5ml無菌水放進培養盒里利用石臘油覆蓋指定的生化孔(有劃線的孔)

ADH

ODC

H2S

URE把培養蓋蓋上（防水份蒸發）閱讀結果利用編碼手冊或APILABPLUS軟件進出分析根據說明書上，或彩圖的指示，記錄結果於報告單上。1819目前國際上常用的6種微量多項試驗鑒定系統的優缺點比較見下表：

202．自動化的微生物鑒定儀應用較早的而普遍的有法國Bio-MerieuxVitexInc公司生產的微生物鑒定儀（automicrobialsysytem，簡稱AMS）。還有半自動化的鑒定儀，也是Bio-Merieux公司生產的ATB(automatictestingbacteriology)。另外還有美國安普中心生產的biolog儀。21環境生物實驗室目前所擁有的微生物自動鑒定系統是Bio-Merieux公司生產的ATBExpression儀。22最后介紹一下選條：無論是自動條還是人工條，在實驗開始前，必須正確選擇合適的鑒定條，這是十分重要的。選擇的方法是：通過對幾個簡單的特征（革蘭氏染色、形態觀察、氧化酶和接觸酶等）的測定，來確定鑒定條。24252、在實驗報告的實驗結果和討論部分，應該說明以下問題：本人在本實驗中鑒定細菌的實驗結果是什么？所得到的實驗結果該如何解釋？實驗所給出的鑒定結果是否可信？理由何在？與標準手冊上所描述的該種細菌特性相比？你所鑒定的細菌菌株有什么差異？造成這種差異的原因是什么？如果本實驗所給