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文檔簡介

1、PAGE3基因探針及其應用當前人類基因組研究方興未艾，許多基因的結構、功能相繼得到闡明。人類基因組有3109個堿基對，約有10萬個基因在不停地工作，我們該如何從這龐大的基因組中找到自已感興趣的目的基因，尤其是單拷貝基因這里就需要用到核酸雜交技術。所謂核酸雜交，是根據堿基配對原理，以已知DNA片斷（基因片斷）作為探針與待測樣品DNA片斷進行雜交，從而判斷兩者的一致性或同源性程度。其中，選擇、制備合適的基因探針至關重要。1基因探針的概念基因探針，即核酸探針，是一段帶有檢測標記，且順序已知的，與目的基因互補的核酸序列（DNA或RNA）。基因探針通過分子雜交與目的基因結合，產生雜交信號，能從浩翰的基因

2、組中把目的基因顯示出來。根據雜交原理，作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件：應是單鏈，若為雙鏈，必須先行變性處理。應帶有容易被檢測的標記。探查不同的目的基因和不同種類的基因缺陷，應當選擇使用不同種類和長度的探針。2基因探針的種類總體上，基因探針可以分為人工合成的DNA探針和天然的克隆探針兩鐘。人工合成的DNA探針（主要是指寡核苷醚探針）用磷酸三酯法或亞磷酸三酯法等化學法人工合成，目前均由DNA合成儀合成。最常見的寡核苷酸探針長度在1830個堿基之間。其特異性可以根據需要加以改變，以識別靶序列中單堿基變化。如果被測基因的序列已知，基因缺陷主要是點突變，可以人工合成一段與被測序列互補的寡苷酸

3、探針。通常是兩種寡核苷酸探針同時使用，一個與正常序列互補，一個與缺陷序列互補，通過分子雜交，將缺陷基因與正常基因區別開來。天然的克隆探針是對天然核酸序列進行克隆得到，大致包括cDNA探針、基因組探針、RNA探針、內含子序列探針和小衛星DNA探針等。最常見的有三種：cDNA探針：經典方法是先從細胞總RNA中分離出mRNA，再由逆轉錄途徑從mRNA合成cDNA，構建cDNA文庫，并用適當方法從文庫中篩選出所需的cDNA克隆。也可應用2，這種驚人的密度大大提高了基因探針的檢測效率。由于基因芯片技術的迅速發展，將使基因探針的應用更為廣泛。可以預見，今后基因探針技術的發展必將日益突出地體現出“規模化”、“自動化”、“程序化”、

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