1、細菌內毒素檢查法王思理2000版較95版藥典修改要點新增加三個定義1.細菌內毒素檢查用水2.鱟試劑靈敏度3.反應終點濃度其他增加內容前言：細菌內毒素國家標準品的用途增加了復核鱟試劑靈敏度。試驗準備：增加了試驗所和器皿應確證無干擾細菌內毒素的檢查。 鱟試劑靈敏度復核:增加了2管陰性對照。供試品干擾試驗:增加了標準對照 檢查法:鱟試劑的支數由原來4支增加為5支結果判斷: 細菌內毒素檢查法應用指導原則1.細菌內毒素限值的確定：L=K/M2.干擾實驗3.標準物質4.鱟試劑5.細菌內毒素檢查用水細菌內毒素定量測定法（比濁法和顯色基質法）1.標準物質2.細菌內毒素檢查用水3.鱟試劑：應符合定量測定要求。4

2、.實驗準備：同細菌內毒素檢查法。細菌內毒素檢查法應用指導原則的指導意義1.明確指明了制訂指導原則的目的是“為了將細菌內毒素檢查法廣泛應用于藥品、生物制品的質量控制”講的非常明確。 2.首次從官方文件中肯定了細菌內毒素定量測定法，這對促進“定量法”在我國應用將起重大的促進作用。 細菌內毒素檢查法應用指導原則的指導意義3.指導原則對細菌內素限值作出了非常明確的規定：1、細菌內毒素限值的確定 藥品、生物制品的細菌內毒素限值(L)一般按以下公式確定：L=K/M4.在這次指導原則中只字未提熱源與細菌內毒素兩法改變中的對比試驗，即今后在兩法改換中不必再做對比試驗。這樣必將大大加速我國兩法的改換進程。細菌內

3、毒素國家標準品981的研制概況1.我國細菌內毒素國家標準品從1979年研制成功并正式建立至今共研制分發了六批。2.現行細菌內毒素國家標準品981的研制與考核時間3.研制分四個階段細菌內毒素國家標準品981的特點1.細菌內毒素精品的提取2.細菌內毒素國家標準品的賦形劑3.候選品的生產4.候選品的考核5. 協作標定-新的國際標準品IS2為基 準細菌內毒素檢查法考察報告1. 王思理等一行4人于1998年1月16日-27日首次赴美國進行細菌內毒素檢查法的專題考察。2.我們這次考察作了充分準備,是帶著問題而去的,在出訪前又集中討論了要了解的重點問題. 3.這次考察將對我國細菌內毒素檢查法的發展起到良好的

4、作用. 考察主要收獲一.鱟試劑的生產與管理1.鱟試劑生產企業生產的試劑均須按照美國聯邦法律的有關規定進行質量控制并送FDA檢驗通過后方可銷售 。2.生產企業在批批送檢時須呈交所有質量控制和原始記錄 。3.在對鱟試劑的靈敏度進行標定時需同進使用美國內毒素國家標準品和鱟試劑參考標準品。考察主要收獲三.細菌內毒素檢查法用于藥品生產過程及最終產品的質量控制考察主要收獲四.由熱原檢查法改為細菌內毒素檢查法1.細菌內毒素限值的計算2.由熱原檢查法轉換為細菌內毒素檢查法的條件是供試品在一定條件下不干擾鱟試驗，每個廠家每個品種做3批供試品的干擾試驗即可，不必進行對比試驗。 考察主要收獲五.細菌內毒素檢查法1.

5、鱟試劑靈敏度復核的目的不是考察靈敏度是否準確，而且考察操作是否準確，以及工作標準品是否準確 。2. 0.1ml規格的鱟試劑的生產與使用應與國際接軌。3.對供試品進行常規檢查時，陽性對照對4個濃度，至少有兩個濃度，即2和0.25。同時供試品陽性對照不可缺少。每個濃度平等做兩管。4. 用于配制調節供試品酸堿度的氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液、緩沖溶液等均嚴格要求細菌內毒素檢查用水。 考察主要收獲六.其他1在計算大輸液的內毒素限值時，M一般定為10ml/kg/hr。2.FDA的關于細菌內毒素檢查法的Guldeline(指南)不具有法律效應，它不是Regulation。3.美國藥典收裁的細菌內毒素檢查法的法定

6、方法為凝膠法，其它兩種方法可以采用，但需做比較試驗。4.新藥在生產過程中和最終產品的質量控制均須要求采用細菌內毒素檢查法。 幾點建議1.抓緊修訂和完善中國藥典2000年版附錄細菌內毒素檢查法。2.制訂細菌內毒素檢查法應用指導原則，統一規范檢查中的有關問題。3.對鱟試劑實行批批檢定或統一發放細菌內毒素工作標準品，建議中檢所研究解決。4.擴大品種的應用，建議藥典會制定原則，宜先將中國藥典95年版中要求進行熱原檢查法的品種改為細菌內毒素檢查法，新藥應積極推廣使用細菌內毒素檢查法。關于如何在我國將熱原檢查法改為細菌內毒素檢查法的記得建議建議二.要在我國大量品種實施細菌內毒素檢查法的一個重要任務是必須要

7、作好細菌內毒素檢查法系統工程的標準化工作。 細菌內毒素檢查法系統工程標準化的內容1. 細菌內毒素檢查法的修訂 2.細菌內毒素檢查法擴大應用指導原則的制定3.細菌內毒素檢查法標準化操作規范(SOP)的制訂4.細菌內毒素國家標準品的研制5.鱟試劑內在質量的研究建議三.明確了上述兩個問題，其首要的具體問題就是要科學地合理地確定細菌內毒素的限值。 四. 將熱原檢查法改為細菌內毒素檢查法，并且確定了內毒素限值后，關鍵總是就是作好干擾試驗。 五.做好品種的選擇工作建議六.要在我國實施熱原檢查法改為細菌內毒素檢查法的規范化。 1.規定內毒素限值(L)2.由藥廠和鱟試劑廠相結合，共同做好供試品的干擾試驗，實現

8、兩個方法的轉換 。3. 要求各級藥檢所，做好配合和復核工作。 建議七、由藥典會制定兩法轉換申報程序總之為使2000年版藥典能有較多的品種采用細菌內毒素檢查法，必須抓緊時間，充分利用這個良好機遇，做好品種匯總申報和審批工作。論藥品生物制品細菌內毒素檢查限值的確定我國細菌內毒素檢查法建立現狀可以概括的說：慢！主要原因：1.如何將熱原檢查法改為細菌內毒素檢查法或者說如何以細菌內毒素檢查法代替熱原檢查法？至今還沒有一個明確的規定。2.如果科學地合理地確定細菌內毒素檢查限值？尚未得到應有的重視。一、如何科學地合理地確定細菌內毒素檢查的限值L=K/MK值的確定 M值的確定 二、目前國內在細菌內毒素限值確定

9、中存在的問題 1.采用熱原檢查劑量就會造成細菌內毒素檢查的內毒素限值規定過嚴。2.細菌內毒素限值L確定后，就根據L值進行稀釋和做干擾試驗。這樣它們的結果也需重新考慮了。3.目前大量的細菌內毒素限值的實際確定、鱟試驗、發表文章、上報成果等多用“熱原檢查劑量”或“L=K/（fM），f為安全系數，一般為310”來確定L值。 再論細菌內毒素限值的確定目前細菌內毒素限值確定存在的問題主要問題是對“M為人用每公斤體重每小時最大劑量”作了如下的解釋： 1.把最大劑量解釋成“熱原檢查法劑量” 。2.把最大劑量解釋成“每小時的人用量的f倍” 。3.把最大劑量解釋成“熱原劑量或人用最大劑量” 。筆者認為科學地合理地確定細菌內毒素限值不僅對我國建立細菌內毒素檢查法至關重要，對保證被檢藥品的安全使用也十分重要。而且它還直接關系到判斷藥品合格與否，影響藥品能否出廠，同時與國際貿易和對外技術交流等都有十分密切的關系。 筆者認為雖然同一品種