1、環(huán)境三致物的生物檢測 環(huán)境三致物：指能致畸、致癌、致突變的物質(zhì)DNA基因染色體的作用檢測DNA損傷，DNA損傷修復等檢測三致物對基因突變，包括正向突變和回復突變?nèi)旧w畸變試驗；微核試驗；SCE試驗特點：時間短、成本低、結(jié)果可靠環(huán)境三致物的生物檢測 環(huán)境三致物：指能致畸、致癌、致突變的物項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術 一、蠶豆根尖微核技術的原理 讓我們復習一下細胞有絲分裂的過程吧項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術 一、蠶豆根尖微核技術的原第六章環(huán)境三致物的生物檢測課件有絲分裂各時期有絲分裂各時期植物細胞的有絲分裂植物細胞的有絲分裂有絲分列各期圖像有絲分列各期圖像項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術 一、蠶豆根尖

2、微核技術的原理 蠶豆根尖細胞在進行有絲分裂過程中，染色體經(jīng)常發(fā)生斷裂，但一般情況下，斷裂可以自行愈合，如果受到有害因子的攻擊，染色體就不能愈合，甚至增加斷裂，形成染色體片段，這些染色體片段由于缺乏著絲點而不能到達細胞的兩極，而留在細胞質(zhì)中，一旦新細胞核形成，這些片段就形成大小不同的小核，即微核。因此，我們可以根據(jù)微核率的高低說明誘變物的強弱。 項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術 一、蠶豆根尖微核技術的原項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術二、受試生物材料 松滋青皮豆 ，或其他蠶豆品種1. 蠶豆浸種催芽 25，浸泡2630h 浸種 催芽：用紗布松松包裹吸漲的種子置解剖盤內(nèi)，保持濕度，在25的溫箱中催芽1230

3、h。待種子初生根露出23mm，再選取發(fā)芽良好的種子，放入鋪滿薄層濕脫脂棉的解剖盤內(nèi)，仍在25下催芽3648h，當大部分種子的初生根長至23cm時，即可用于處理 三、試驗步驟項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術二、受試生物材料 松滋青皮豆 項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術2. 處理根尖 每一處理選取68粒初生根生長良好，根長一致的種子，放入盛有被測液的培養(yǎng)皿中，讓被測液浸泡住根尖即可，用自來水（或蒸餾水）作對照處理，方法相同。處理時間為46h。 3. 根尖細胞恢復培養(yǎng) 將處理后的種子，用自來水（或蒸餾水）浸洗3次，每次23min，然后把洗凈的種子再放入濕脫脂棉盤中，按前述培養(yǎng)條件恢復培養(yǎng)2224h 項目九

4、蠶豆根尖微核監(jiān)測技術2. 處理根尖 每一處理選取6項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術4. 根尖細胞的固定 將恢復后的種子，從根尖頂端切下lcm長幼根放入青霉素空瓶中，加卡諾氏液固定24h 5. 孚爾根（Feulgen）染色 (1) 固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸餾水浸洗2次，每次5min (2) 吸凈殘水，再加5mol/LHCI將幼根泡住，連瓶放入28水浴鍋中水解幼根25min左右，至幼根被軟化即可 (3) 用蒸餾水浸洗幼根2次，每次5min 項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術4. 根尖細胞的固定 將恢復后項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(4) 在暗室或遮光的條件下加席夫（Schiff）試劑，染色14h (5

5、) 除去染液，用SO2洗滌液浸洗幼根2次，每次5min (6) 用蒸餾水浸洗1次，5min (7) 將幼根放入新?lián)Q的蒸餾水中，置4的冰箱內(nèi)保存，可供隨時制片之用。 6. 制片 45%醋酸壓片法項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(4) 在暗室或遮光的條件下加項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術7. 鏡檢及微核識別標準 大小是主核大小的1/3以下，并與主核分離；形狀為圓形、橢圓形或不規(guī)則形；著色與主核相當或稍淺 每一處理觀察3個根尖，每個根尖隨機計數(shù)1000個細胞中的微核數(shù) 項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術7. 鏡檢及微核識別標準 大項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術五、實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理和污染程度的劃分 （一）數(shù)據(jù)處理

6、 1. 按以下公式計算各測試樣品（包括對照組）的微核千分率（MCN） MCN= 某測試點（或?qū)φ战M）觀察到的MCN數(shù)某測試點（或?qū)φ战M）觀察到的細胞數(shù) 1002. 如果被監(jiān)測的樣品不多，可直接用各樣品MCN率平均值與對照比較（t檢驗），從差異的顯著性判斷水質(zhì)污染與否 項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術五、實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理和污染程項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術3. 如果被檢測的樣品較多，可先用方差分析（F檢驗）看各樣品的MCN平均值與對照的差異顯著性。 （二）結(jié)果評價 1. 利用“MCN”進行評價 30重污染 項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術3. 如果被檢測的樣品較多，可項目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術2. 利用