1、9/9沙苑子調節小鼠免疫功能作用的實驗研究關鍵詞：沙苑 【摘要】 目的 探討沙苑子及其復方制劑對小鼠免疫功能的調節作用。方法 二級昆明小鼠174只，雌雄各半，體重1822g，隨機分3組。用沙苑子及其復方制劑給小鼠灌胃15d后活殺，用稱重法測量臟器系數；用足跖厚度增加法評價細胞免疫功能；用溶血空斑法評價體液免疫功能；用腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的方法評價巨噬細胞吞噬功能。結果 沙苑子能明顯提高小鼠DTH反應程度；巨噬細胞吞噬功能明顯增強；溶血空斑數明顯增多；白細胞介素-1、6、8(IL-1、6、8)水平增高，與對比組比較具有顯著的統計學意義(P0.05)。結論 沙苑子具有調節小鼠免疫功能的作用。

2、【關鍵詞】 沙苑子；免疫功能；小鼠 The effect of flatstem milkvetch seed and its compound preparation on regulation of immunological function of mice 【Abstract】 Objective To investigate the effect of flatstem milkvetch seed and its compound preparation on the regulation of immunological function of mice.Methods One

3、hundred seventy four of second order Kunming mice(weight 1822g)，male and female each occupying one half，were randomly divided into three groups.All the mice were sacrificed after they had been given flatstem milkvetch seed and its compound preparation in intragastric administration for fifteen days.

4、The organs index of mice was calculated by determining the organs weight and the cell immunity were evaluated by determining the thickening of pedis.Hemolytic plaque test was used to appraise humoral immunity，and peritoneal macrophage swallowing chicken red blood cell test was used to appraise the p

5、hagocytes function.Results Compared with the control group，the DTH reaction and phagocytes function were improved obviously(P0.05)，and the quantity of hemolytic plaque and the concentration of IL-1，IL-6，IL-8 were increased significantly(P0.05) in flatstem milkvetch seed and its compound preparation

6、group.The spleen and thymus index had no statistic difference among all the groups.Conclusion Flatstem milkvetch seed can regulate the immunological function of mice. 【Key words】 flatstem milkvetch seed；immunological function；mice 沙苑子(Semen astragali complanati)為豆科植物扁莖黃芪(Astragulus complanatus R.Br)

7、的干燥成熟種子?，F代醫學研究發覺，沙苑子含有豐富的硒、銅、鐵、鋅、錳及脂肪油、鞣質、維生素A等成分，具有養肝明目、強腰健骨、滋潤肌膚等功效1。筆者通過對實驗動物IL-1、6、8，胸腺及脾臟重量指數等免疫指標測定，探討沙苑子對小鼠調節免疫功能的生物作用。 1 材料與方法 1.1 實驗動物 二級昆明小鼠174只，雌雄各半，體重1822g，購自軍事醫學科學院實驗動物中心(動物合格證號：BDW95007)。 1.2 受試藥物 沙苑子水煎劑，含生藥量200mg/ml；復方沙苑子由沙苑子、玄駒、紅景天、北五味子、枸杞子、麥冬、川芎等水煮提取組成，含生藥量400mg/ml。均由本所制劑室配制。沙苑子產于陜西

8、，螞蟻為廣西產雙齒多刺蟻(Polyrhachis dives smith)，其他中藥材均購自北京康玉藥店。 1.3 試劑 綿羊紅細胞由采自健康成年綿羊血制備，豚鼠血清由衛生部環境衛生監測所毒理室提供，雞紅細胞采自健康成年來杭雄雞血制備，其余為國產分析或優級純試劑。 1.4 儀器 放免計數儀為上海產SN-682型。 1.5 實驗方法 將174只小鼠按體重編號后，用隨機表分成4大組，分不進行巨噬細胞吞噬功能實驗、溶血空斑實驗、遲發型變態反應、測定胸腺、脾臟指數實驗。每項實驗的動物又分為沙苑子組、復方沙苑子組和生理鹽水對比組，各組均為12只小鼠。沙苑子組、復方沙苑子組分不用沙苑子、復方沙苑子水煎劑0

9、.5ml灌胃，每日1次；生理鹽水對比組同時用等量的生理鹽水灌胃，連續15天。 1.5.1 巨噬細胞吞噬功能的實驗 按照文獻2方法，末次給藥后，給每只小鼠腹腔注射2%雞紅細胞懸液1ml。間隔30min，頸椎脫臼處死，仰位固定于鼠板上。正中剪開腹壁皮膚，經腹膜注入生理鹽水2ml，轉動鼠板1min。然后吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于兩片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內，移置37孵箱溫育30min。孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細胞。晾干，以1：1丙酮-甲醇溶液固定。4%(V/V)Giemsa-磷酸緩沖液染色3min，用蒸餾水漂潔，晾干，在油鏡下計數巨噬細胞，每片200個，按下式計算吞噬百分率

10、和吞噬指數： 吞噬百分率=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數200個巨噬細胞100% 1.5.2 溶血空斑實驗 應用溶血空斑實驗進行抗體生成細胞檢測2。取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只鼠經腹腔注射SRBC 1108個。將用SRBC免疫5天后的小鼠處死，取脾，制成細胞懸液。將表層培養基加熱溶解后與等量雙倍的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內加0.5l體積分數為10%的SRBC(用SA液配制)、10l脾懸液，迅速混合后傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養箱中溫育1.5h，然后將用SA緩沖液稀釋的補體(1：5)加入到玻片架凹槽內，接著培養1.

11、5h后計數溶血空斑數，以空斑數代表分泌抗體的細胞數。 1.5.3 遲發型變態反應 采納足底增厚法進行DTH檢測3。給小鼠腹腔注射1%SRBC 0.1ml/每鼠，將其致敏，4天后測量左后足跖部厚度，然后在測量部位皮下注射體積分數為20%的SRBC(20l/每鼠)，注射后24h測量左后足跖部厚度，同一部位測量3次，取平均值。以注射前后足跖厚度的差值，表示DTH的程度。 1.5.4 對小鼠胸腺、脾臟指數的阻礙 末次前稱其體重，給藥30min斷頭處死，立即取出，稱量脾臟、胸腺濕重，計算其指數。計算公式如下： 脾(胸腺)指數=脾(胸腺)重量(g)體重(g) 1.5.5 沙苑子對小鼠血清IL-1、6、8水

12、平的 HYPERLINK / 阻礙 將上述30只小鼠按上述方法分組給藥，按 HYPERLINK / 文獻4的方法，末次給藥后，30min斷頭取血，3000r/min離心10min分離血清，取足量血清待測。 1.6 統計學 HYPERLINK / 分析 計量數據均用SAS軟件進行方差分析。 2 結果 2.1 沙苑子對小鼠3項免疫功能的阻礙 結果見表1。表1 沙苑子對小鼠3項免疫功能的阻礙 (xs)注：與生理鹽水對比組比較*P0.05，*P0.01；用藥組比較#P0.05 表1數據表明，小鼠服用沙苑子及其復方制劑，能明顯增強小鼠吞噬雞紅細胞的能力；增加小鼠抗體生成細胞數。尤其是復方沙苑子組與對比組

13、比較，具有顯著的統計學意義。同時沙苑子與復方沙苑子比較，前者更能增加抗體生成細胞數。用藥組與對比組比較DTH明顯增強，具有明顯提高小鼠細胞免疫功能的作用，具有顯著的統計學意義(P0.01)。 2.2 對小鼠胸腺、脾臟指數的變化 結果見表2。 2.3 沙苑子對小鼠血清IL-1、6、8水平的阻礙 結果見表3。表2 沙苑子對小鼠胸腺、脾臟重量與指數的阻礙 (xs)注：結果顯示各用藥組小鼠與對比組小鼠比較胸腺與脾臟以及其指數差異無顯著性(P0.05)。表3 沙苑子對免疫實驗小鼠血清IL-1、6、8的阻礙 (xs)注：與對比組比較*P0.05，*P0.01 從表3能夠看出，用藥組血清IL-1、6、8水平

14、明顯高于對比組(P0.05)，特不是沙苑子對IL-1、復方制劑對IL-1、8水平的阻礙較對比組尤為顯著(P0.01)，差異具有顯著性。 3 討論 從20世紀80年代起，許多學者對沙苑子進行了較為集中的 HYPERLINK / 研究， HYPERLINK /dangdai/ 現代藥理研究證實，沙苑子能夠調節血液流變學、血壓和腦血流量，具有明顯的保肝、降脂、抗疲勞等作用，并能提高免疫功能4。機體對抗原物質的免疫應答，是由免疫系統中各免疫細胞(包括巨噬細胞、T細胞、B細胞等)相互協調、共同完成的5。PFC是反映抗體生成細胞水平的指標之一，它的完成需上述各項免疫細胞的協調作用，本文中經沙苑子作用后，小鼠對SRBC的免疫應答能力明顯提高，從表1結果能夠看出，用藥組小鼠形成的溶血空斑數明顯高于對比組，即產生特異性抗體的B淋巴細胞數明顯增多。DTH是反應T細胞功能的指標之一，實驗中用藥組小鼠的足跖腫脹度明顯高于對比組，講明沙苑子具有增強機體的特異性細胞免疫功能的作用。巨噬細胞是一個有多種功能的免疫細胞，在機體非特異性免疫、體液免疫以及腫瘤免疫方面起著重要的作用6，7。沙苑子及其復方制劑，能使小鼠的巨噬細胞吞噬功能明顯增強，與對比組小鼠比較差異顯著。 白細胞介素是一類具有重要生物活性的免疫細胞因子，IL-1要緊由單核巨噬細胞產生，