1、分子史上的經典事件答：1953watson和crick提出的DNA分子雙螺旋模型在科研過程中，要擁有清醒的宏觀洞察力、非凡的科學想像力和嚴實的邏輯思想能力，選擇正確的研究路線，寬泛借鑒別人的研究成就并加以綜合性的科學思慮。分子生物學的理論基礎是主要的研究策略有（第一章）答：1958年，克里克提出兩個學說，確立了分子生物學的理論基礎。第一個學說是“序列學說”，它以為一段核酸的特別性完好由它的堿基序列決定，堿基序列編碼一個特定蛋白質的氨基酸序列，蛋白質的氨基酸序列決定了蛋白質的三維構造。第二個學說是“中心法例”，遺傳信息只好從核酸傳達給核酸，或核酸傳達給蛋白質，而不可以從蛋白質傳達給蛋白質，或是從

2、蛋白質傳回核酸。研究策略：體內和體外實驗的聯合將遺傳和DNA聯系起來。體內（Invivo）實驗：在活體內進行的實驗，包含在培育的細胞或組織。體外（Invitro）實驗：在細胞提取物中，或許是人工合成的細胞成分混淆物中。分子與其余學科關系生物學離不開生物學技術答：分子生物學是由生物化學、生物物理學、遺傳學、微生物學、細胞學、以致信息科學等多學科互相浸透、綜合交融而產生并發展起來的。現代生物學的發展愈來愈多的應用分子生物學的理論和方法進行研究。什么是分子生物學廣義的觀點：分子生物學是研究核酸、蛋白質等生物大分子形態、構造特點及其重要性、規律性和互相關系的科學。狹義的觀點：從分子水平研究生物大分子的

3、構造與功能進而說明生命現象實質的科學，主要指遺傳信息的傳達（復制）、保持（損害和修復）、基因的表達（轉錄和翻譯）與調控等，也稱之為基因的分子生物學。DNA分子在構造上為何最適合作為遺傳信息載體（第二章第一節）化學性質比較穩固，DNA復制時嚴格恪守堿基互補配對原則，且為半保存復制；四種脫氧核糖核苷酸能夠構成不一樣的長鏈，能夠攜帶大批遺傳信息。DNA提取操作重點是（第二章第一節）提取原則：保持一級構造的完好性，將其余生物大分子的污染降到最低。提取流程：破裂細胞；DNA開釋到水相；去垢劑或蛋白變性劑抽提；除掉蛋白等雜質。DNA積淀，DNA溶解和保存。DNA提取和判定的有關操作中需要注意什么1）DNA

4、分子較大應注意防備機械張力將其打斷，所以操作要柔和，離心速度要控制。2）要滅活DNA酶，采納的EDTA或許檸檬酸鈉辦理，或許用去垢劑（SDS）、蛋白變性劑（苯酚、氯仿等）就能夠基本滅活，別的，55辦理也常常用于滅活剩余的DNA酶。3）除掉蛋白質等雜質時酚抽概要完全，上清要去盡，汲取上清時不要帶有積淀。4）鑒準時注意電泳時的電壓，電泳緩沖液的濃度，pH；采納適合的凝膠以及凝膠的濃度。簡述RNA的功能。（1）RNA是一些病毒的遺傳物質。（2）與蛋白質合成有關，mRNA在功能上是基因和蛋白合成機器之間的中介；tRNA在功能上是mRNA上密碼子和氨基酸之間的連接分子。（3）有些RNA擁有催化活性（核酶

5、）。比如研究發現，四膜蟲的26srRNA的單個內含子在體外擁有自我剪接功能；RNaseP中的RNA組分在體外能對tRNA前體進行加工。（4）RNA能夠經過多種門路調理基因表達。調停門路包含不一樣的RNA折疊，核糖開關，與非編碼RNA有關的RNA擾亂現象、X染色體隨機失活現象等。獲取高質量RNA的操作應注意什么RNA一般分子量較小，不易被機械拉力打斷；最重要的是克制RNA酶（RNase）的活性，防備RNA被降解。所以，要創建一個嚴格的無RNA酶環境第一要防備外源RNase污染:干凈實驗室環境一次性手套，勤換；操作時能夠帶口罩。環境干凈（防止飛塵中細菌、真菌產生外源性RNA酶污染，無空氣對流）玻璃

6、和塑料器皿辦理。玻璃：慣例洗凈后，200干烤4小時塑料器皿（離心管、槍優等）：用%的DEPC水常溫浸泡留宿，滅菌干燥后使用。溶液配制：加%DEPC辦理的雙蒸水配制，高壓除掉殘留的DEPC。其次，克制內源RNase的活性。克制劑有-巰基乙醇，異硫氰酸胍，十二烷基肌酸鈉。簡述蛋白質的功能和活性調控主要層次。）構成組織與修理組織。蛋白質是構成組織細胞的主要資料。2）構成酶和某些激素的成分。加強機體抵擋力，構成抗體調理浸透壓供應熱能。轉錄水平翻譯水平翻譯后水平什么是蛋白質組學簡述蛋白質組學研究的一般流程。沿著雙向電泳質譜蛋白質數據庫檢索這一典型的蛋白質組學研究技術路線。蛋白質組學是應用各樣技術手段研究

7、蛋白質組的一門新興科學。A)整體角度剖析細胞內動向變化的蛋白質構成成分、表達水平與修飾狀態B)認識蛋白質之間的互相作用與聯系；c)揭露蛋白質功能與細胞生命活動規律。比較以下觀點：外顯子和內含子外顯子(extron)：成熟的mRNA或蛋白質中存在的序列。（在DNA或mRNA中都存在的序列）內含子(intron)：在DNA上存在，而在mRNA（或cDNA）中不存在的序列，初級轉錄產物加工成成熟mRNA時被切除的間隔序列。基因編碼區和cDNA編碼區基因編碼區既包含外顯子還包含內含子，cDNA編碼區不過外顯子的拼接啟動區和停止區啟動區是位于編碼區上游的非編碼區，包含加強子，TATAbox等一些轉錄開端

8、元件，停止區是位于編碼區下游的非編碼區，包含停止子。初級轉錄產物和成熟mRNA初級轉錄產物是由DNA轉錄出來的mRNA前體，還沒有經過加工修飾，里面還有內含子序列轉錄出來的產物。成熟mRNA就是初級轉錄產物切去內含子對應部分的序列，最后編碼蛋白質的序列。如何理解DNA復制是一個復雜的過程與DNA復制有關的蛋白質（包含酶）主要有哪些，有什么作用DNA分子是反向平行的兩條互補鏈；DNA雙鏈解旋需要能量和；解旋形成的DNA單鏈有形成鏈內堿基配對的趨向，需要單鏈聯合蛋白的參加；DNA復制需要多種酶參加，如：引物酶，DNA聚合酶，解旋酶，拓撲異構酶等；復制中有時犯錯，需要校訂體制；不論環狀DNA仍是大分

9、子量的DNA對復制系統都有物理限制拓撲異構酶：去除DNA解旋時在復制叉部分產生的超螺旋解旋酶：解開DNA雙鏈。引物酶：在單鏈DNA處合成引物，形成引物模版接頭。DNA聚合酶：合成DNA，修復DNA。單鏈聯合蛋白：與單鏈DNA聯合，防備DNA復性滑動夾蛋白：加強DNA聚合酶的延長能力DNA連結酶：連結相鄰DNA鏈RNA酶：去除RNA引物。DNA復制的半保存特征和半不連續特征是如何發現的DNA半保存復制最先是由沃森和克里克提出的，1958年，MatthewMeselson和FranklinW.Stahl的實驗確立了DNA的復制是半保存方式。采納含非放射性的15N的培育基培育細菌若干代，被15N標志

10、的大腸桿菌轉入14N為氮源的培育基中，達成第一代、第二代生殖時，經過CsCl密度梯度離心分別DNA，因為DNA的密度不一樣，形成在260nm紫外光下可見的不一樣地點的條帶。Okazaki的脈沖標志和脈沖追蹤的實驗發現DNA是半不連續復制的。資料是受T4噬菌體感染的大腸桿菌嗎，用3H標志的脫氧胸苷進行脈沖標志，再加入大批非同位素標志的脫氧胸苷進行追蹤，在不一樣的時段，采集大腸桿菌，抽取DNA，堿變性辦理，超離心，分別大小不一樣的DNA，進行密度梯度離心，離心管底部和上部均有放射性，表示復制過程中形成的有大片段也有小片段。證了然復制的半不連續性。分子生物學中的工具酶在使用時需要注意什么請舉例說明。

11、要注意溫度緩和沖液用量，比如T4DNA連結酶，酶量1l,緩沖液用量l，反響溫度是161.線性DNA的復制如何解決后隨鏈上最后一個引物去除以后的縮短問題簡述體制。門路1：蛋白質取代RNA作為引物：擁有線性染色體的細菌和某些擁有線性染色體的病毒，以蛋白質取代RNA作為引物，“引物蛋白”利用氨基酸供應-OH。路過2：端粒酶：染色體的尾端構造端粒的3端都突出成為單鏈DNA，能夠召募端粒酶進行尾端復制。端粒聯合蛋白在線性染色體的復制和構造的保持上有什么作用端粒聯合蛋白能夠調理端粒酶的活性，進而調控端粒序列的長度。與端粒雙鏈地區聯合的蛋白會精準的調控端粒的長度，這些蛋白作為弱的阻抑物能夠克制端粒酶的活性，

12、克制效應和端粒的長度正有關。端粒較短的時候，僅有少許的端粒聯合蛋白，對端粒酶的克制效應較弱，端粒酶能夠延長端粒的3端；當DNA合成體制達成雙鏈中后隨鏈的合成后，更多的端粒聯合蛋白聯合到端粒，提升了對端粒酶進一步延長的克制。端粒聯合蛋白形成t-loop構造，能夠保護染色體尾端。人類細胞中分別的端粒是環狀構造，該構造叫做t-loop，是端粒3單鏈DNA尾端向端粒的雙鏈DNA地區插入產生的，與端粒的長度控制有關，因為環狀構造能夠保護端粒不被DNA修復酶修復。仿佛端粒聯合蛋白和其余一些胞內蛋白促使了該構造的形成。原核和真核DNA復制過程有哪些共同點與原核對比，真核DNA復制有哪些特別之處。復制的原理同

13、樣；都是開端子蛋白對復制器的辨別,經過開端子蛋白以及解旋酶裝載器將解旋酶召募到復制器上,解旋酶產生單鏈DNA地區，作為RNA引物合成的模板。原核細胞DNA復制中，一旦開端子蛋白和復制起點聯合，DNA解旋酶就會被招募到起點，開端復制,真核細胞DNA復制中，起點的選擇和復制的開端是分別的，這是經過形成前復制復合物控制的。兩個事件的分別能夠阻擋基因組的過分復制;真核細胞DNA的復制有多個起點。復制調理中，細菌是DnaA開端蛋白與DNA的聯合；真核生物是MCM解旋酶和DNA的最先聯合上。與原核對比，真核解決尾端復制問題的門路多樣。細胞中參加DNA修復的聚合酶為何比參加DNA復制的聚合酶要多，如何對待這

14、一事實。保護DNA遺傳信息的穩固性對生物細胞來說是極其重要的。作為一種能決定生命狀態存在和持續的生物大分子，DNA分子的序列在遺傳過程中必要保持高度的精準性和完好性，所以細胞中含有大批用于修復DNA損害的修復系統，DNA修復系統是細胞進化出的保證在損害阻擋復制或許產生突變以前就辨別，而且修復損害的體制。可多修復體制能夠由不一樣的酶來發動，如切除修復體制，能對各樣DNA的損害進行修復，以保持每個世代遺傳信息的穩固性，所以細胞中含有大批用于修復DNA損害的酶。參加修復的酶包含在復制中以及在轉錄翻譯中出現突變進行修復的酶，所以細胞中參加DNA修復的聚合酶比參加DNA復制的聚合酶要多。轉錄和DNA的復制在化學和酶學上有哪些相像性，有哪些重要差異1）轉錄過程需要的原料是核苷酸，DNA復制過程需要的原料是脫氧核苷酸；2）參加的酶不一樣：轉錄是RNA聚合酶，復制是DNA聚合酶；3）轉錄過程不需要引物，復制過程需要引物；4）轉錄出來的RNA產物與模板DNA不保持堿基互補配對；（5）轉錄缺