1、PAGE PAGE 36第一章 生物大分子的提取與沉淀分離技術一、名詞解釋1.生化技術：是在生物化學及其相關學科應用的各種技術。主要是指生物體內物質及其代謝產物，特別是生物大分子的分離、檢測、制備與改造技術。 2.提取（萃取）：是在一定的條件下，用一定的溶劑處理樣品，使欲分離的物質充分釋放到溶劑中的過程。又稱“抽提”或“萃取”。 3.沉淀分離技術：是通過改變某些條件或加入某種物質，使溶液中某種溶質的溶解度降低，從而從溶液中沉淀析出的技術。 4.鹽溶：低鹽濃度下蛋白質的溶解度隨著鹽濃度的升高而增加的現象。 5.鹽析作用：鹽濃度升高到一定程度后，蛋白質的溶解度隨著鹽濃度的升高而降低，結果使蛋白質沉

2、淀析出，這種現象即為鹽析作用。 6.等電點沉淀法：是利用蛋白質在pI時溶解度最低，以及不同的蛋白質有不同的pI這一特性，對蛋白質進行分離純化的方法。 7.有機溶劑沉淀法：利用不同蛋白質在不同濃度的有機溶劑中的溶解度不同而使蛋白質分離的方法稱為有機溶劑沉淀法。二、填空1. 現代生化技術的顯著特點：是以三高所著稱，即：高技術、高投入、及高利潤。2. 生物大分子主要包括： 蛋白質 、 酶 、 核酸 、 多糖 和 脂類 ，它們是生物體內存在的具有特殊生物學功能的高分子化合物。3. 生化分離技術主要有沉淀分離技術分離、層析分離技術分離、電泳分離技術分離和超離心分離技術分離技術。4. 蛋白質和酶的種類繁多

3、，在提取時應根據其存在的部位、分子結構及溶解性質的不同選擇不同的提取方法。5. 影響提取的因素主要有 溶劑 、 溶解度 、 溫度 、 pH 和 濃度差 等。6. 水溶液法提取酶和蛋白質時，要注意控制好鹽濃度、溫度、pH值等因素。7. 沉淀分離技術包括鹽析 沉淀、等電點沉淀和有機溶劑沉淀等技術。8. 在分段鹽析中，在一定的pH和溫度條件下，改變離子強度稱為 Ks分段 鹽析，而在一定的鹽和離子強度條件下，改變溫度或pH值稱為 分段 鹽析。9. 實驗室進行蛋白質鹽析沉淀時應用最多、最廣的鹽是 硫酸銨 。10. 在核蛋白提取時，應選用0.14mol/L的氯化鈉溶液提取 核糖 核蛋白，而選用1mol/L

4、的氯化鈉溶液提取 脫氧核糖 核蛋白。11. 核酸分離時從pH5沉淀中可分離得到 tRNA 。12. RNA的提取方法主要有 稀鹽溶液 提取和 苯酚水溶液 提取。13. 苯酚水溶液提取核酸時， 蛋白質 和 DNA 沉淀于 苯酚 層中，而 RNA和 多糖 溶解于 水層 中。14. 核酸沉淀分離主要有 有機溶劑沉淀法 、 等電點沉淀法 、 鈣鹽沉淀法 和 選擇性溶劑沉淀法 四種方法。15. 能夠選擇性地沉淀DNA的試劑是 異丙醇 。三、問答題1進行細胞破碎的方法有哪些：機械破碎法：是通過機械運動所產生的剪切力的作用使細胞破碎的方法。物理破碎法：用各種物理因素(溫度、壓力、超聲波)的作用使細胞破碎的方

5、法。化學破碎法：用化學試劑可使細胞膜結構改變或破壞，改變細胞膜的通透性。酶學破碎法：通過加入酶或利用細胞本身的酶的作用，使細胞破碎的方法。 2蛋白質和酶提取、分離的一般原則：提取、分離方法條件要溫和使目的蛋白質和酶的活性和功能不受損害盡量盡早除去各種雜質、脂類、核酸及毒素。設法除去變性的和不需要的蛋白質。設法提高目的蛋白質的含量或生物活性。分離純化要在緩沖溶液中進行。建立靈敏、特異、精確的檢測方法。根據其存在的部位、分子結構及溶解性質的不同選擇不同的提取方法。3實驗室進行蛋白質鹽析沉淀時應用最多、最廣的是硫酸銨，它的優缺點是什么：優點：它在水中溶解度大；其溶解度受溫度的影響較小；價廉易得；不易

6、引起蛋白質變性；分離效果比其它鹽好。缺點：緩沖能力差；NH4+離子會干擾蛋白氮的測定。4核酸提取要注意的原則：防止核酸酶的降解: 在提取分離核酸時要降低核酸酶的活性，通常加入抑制劑和去激活劑。防止化學因素的降解: 避免強酸強堿。防止物理因素的降解: 核酸大分子、高溫、機械作用等均可以破壞核酸分子的完整性，因此核酸提取適于在低溫及避免劇烈攪拌等條件下進行。第二章 層析分離技術一、名詞解釋1.層析分離技術：是利用混合物中各組分的物理、化學性質（分子的形狀和大小、分子的極性、吸附力、分子的親和力、分子的分配系數等）的不同，使各組分以不同程度分布在兩相中，當流動相流過固定相時，各組分以不同的速度移動，

7、而達到分離的技術。 2.吸附層析：是利用吸附劑對不同物質的吸附力不同而使混合物中的各組分分離的技術。 3.解吸作用：在一定條件下，被吸附物離開吸附劑 表面的現象稱為解吸作用4.洗脫：加入解吸附劑，使物質從固定相上分離下來的方法。 5.分配層析：是利用各組分的分配系數不同而予以分離的方法。 6.分配系數：是一種溶質在兩種互不相溶的溶劑中溶解達到平衡時，該溶質在兩相溶劑中的濃度比值。 7. 薄層層析：是將固定相的支持劑均勻地鋪在支持板上，成為薄層，把樣品點在薄層上，用適當的溶劑展開，從而使樣品中各組分達到分離的一種層析技術。8. 氣相層析：是一種以氣體為流動相的一種高效、快速的層析分離技術。 9.

8、 擔體：是固定相的“載體”或“固體支持物”，大多為多孔性固體顆粒。 10. 死時間：從進樣到出現空氣峰最高峰的時間。 11.保留時間：從進樣到出現色譜峰最高點所需的時間。 12.校正保留時間：指樣品組分的保留時間與進樣到出現空氣峰最高值的時間之差。 13. 死體積 ：指從進樣到出現空氣峰最高值時所通過的載氣體積 14.保留體積：指從進樣到出現組分濃度最高峰時所通過的載氣體積 15.校正保留體積：指保留體積與死體積之差 16.定量校正因子：是單位峰面積中某物質的量 17.離子交換層析：是利用離子交換劑上可解離基團(活性基團)對各種離子的親和力不同而達到物質分離的一種層析分離技術 18.凝膠層析：

9、又稱之凝膠過濾，分子篩層析或排阻層析。是用高交聯度的固體凝膠按照物質分子量大小進行分離的技術。 19.洗脫體積：某一組分物質從加樣到層析最高峰出現時所需的洗脫液總體積。20.親和層析：是利用生物分子間所具有的專一而又可逆的親和力而使生物分子分離純化的技術。 21.配基：又稱為“配體”。指親和層析中作為固定相的一方。二、填空1. 層析分離技術按流動相狀態可分為 液相 層析和 氣相 層析；按分離過程所主要依據的物理化學性質分為 吸附層析、分配層析、離子交換 層析、 分子排阻(凝膠過濾) 層析、 親和 層析等。2. 洗脫方法根據所用洗脫劑不同分為 溶劑洗脫法 、 置換法(取代法) 、 前緣分析法(前

10、緣洗脫法) 。3. .聚酰胺薄膜層析只適用于 極性分子 的分離。4. 紙上層析是以濾紙纖維 的 結合水 為固定相，以 有機溶劑 作為流動相，展開時樣品中各物質在兩相之間不斷地進行分配，由于各物質有不同的 分配系數 、 移動的速率 也就不同，從而達到分離的目的。5. 溶質在濾紙上移動的速度可用Rf值表示，Rf = 溶質斑點中心移動的距離溶劑前沿移動的距離 ，Rf值決定于 分配 系數，不同的物質在兩相間的 分配系數 不同，Rf值也不同，由此可根據Rf值的大小對物質進行定性分析。6. 薄層層析中用的薄層板有 硬板(濕板) 與 軟板(干板) 之分，常用的薄層板制作方法有浸涂 法、 噴涂 法、 傾斜涂布

11、法 法和推鋪法 法。7. 氣相層析根據其固定相的不同可分為 氣固 層析和 氣液 層析兩種。8. 氣相層析具有 分辨率高 、 分析速度快 、 靈敏度高 和 應用范圍廣 等特點。9. 10. 氣相層析的流動相是 氣體 ，稱為 載氣 ，常用的有 氫氣 、 氮氣 、 氦氣 、 氬氣 等。載氣的選擇主要根據所使用的 檢測器 和 載體氣流 決定。11. 紅色擔體用于分離 非極性 和 弱極性 物質；白色擔體用于分離 極性 物質12. 氣相層析時，樣品在進柱前必須變為氣體，有些物質難于氣化必須先將其轉變為 易揮發 的衍生物再進行氣相層析。13. 進行氣相層析時，應注意控制好 氣體流量 、 進樣溫度 、 進樣時

12、間 和進樣量。14. 熱導池檢測器屬于 濃度型檢測器 。氫焰檢測器屬于 質量型檢測器 ，其靈敏度比熱導池檢測器高 倍左右，是目前應用最廣泛的檢測器之一。15. 離子交換層析的操作過程包括上柱(加樣) 、 洗脫 和 收集 、樹脂再生三大步驟。16. 凝膠裝柱時必須注意柱中不能有 氣泡 或 裂紋 存在三、問答題： 1. 選擇吸附劑時應注意的問題：吸附劑應有適當的吸附力和盡量大的表面積；對被分離物有足夠的分辨率，對不同物質的吸附力不同；對被吸附物的吸附應是可逆的，一定條件下可解吸、洗脫；不溶于所用的溶劑中，不引起被吸附物化學變化；顆粒均勻，操作時穩定，不會破裂。 2. 選擇洗脫劑時應注意的問題：不與

13、吸附劑起化學反應，且不使吸附劑溶解；對樣品的各組分溶解度大、粘度小、流動性好；不與各組分起化學反應，且易與被洗脫組分分開；純度高，無雜質影響。3. 紙層析時對濾紙的選擇有何要求：濾紙的厚薄程度、纖維的松緊度不同，使與濾紙纖維結合的水量不一樣，兩相的體積比也不同。得到的Rf 值也不相同。濾紙中的雜質也會影響Rf 值。因此，層析時對濾紙的要求較高：由高純度的棉花制成，質地均一、厚薄一致、纖維松緊度適中、有一定的機械強度。 4. 在紙層析前，濾紙和層析裝置為什么要先用層析溶劑平衡：5. 擔體應具備哪些條件：表面積大；孔徑分布較均勻；表面無催化或吸附性能；與固定液或被分析的物質不起化學反應；熱穩定性好

14、；有較好的機械強度。 6. 離子交換劑選擇時應考慮哪些因素：樣品離子帶何種電荷 陰離子只能被陰離子交換劑吸附，陽離子只能被陽離子交換劑吸附；離子的濃度 濃度大時，選擇交換容量大的交換劑型號被分離物質相對分子量的大小 分子量大時要求交聯度低，分子量小時選擇較高交聯度更好；離子與交換劑親和力的大小 選擇不同型號的交換劑，既要考慮吸附，還要考慮便于洗脫；樣品物質及交換樹脂的物理化學特性 根據其對酸、堿、溫度的敏感情況，控制好環境條件。7. 試述凝膠層析的基本原理： 凝膠是一種多微孔的多孔徑網狀支持物組成進行分子過濾的分子篩；物質分子在層析柱中的運動有重力的垂直方向運動和無定向擴散的布郎運動；大分子物

15、質不能進入微孔在凝膠空隙間快速流出層析柱；小分子能夠進入微孔，因而在凝膠中許多孔中穿行，因通過的距離長，后流出層析柱；分子直徑越小能夠進入的孔越多，流出層析柱越慢；根據分子篩這一原理可依據物質分子直徑的大小按照由大到小的順序流出層析柱而得到分離。因此，它是一個反篩。第三章 電泳技術一、名詞解釋：1. 電泳：是帶電粒子在電場中向著與本身所帶電荷相反的電極移動的現象。 2. 泳動度：泳動度()帶電顆粒在單位電場強度下的泳動速度3. 薄層電泳：是將支持物與緩沖液調制成適當厚度的薄層而進行電泳的技術 4. 凝膠電泳：是以各種具有網狀結構的多孔凝膠作為支持物的電泳技術。 5. 等電聚集電泳：是在電泳系統

16、中，加進兩性電解質載體。當通以直流電時，兩性電解質載體即形成一個由陽極到陰極連續增高的pH梯度。當不同等電點的分子進入這個體系時，各自聚集到與其等電點相當的pH位置上，從而使不同等電點的分子得以分離的電泳技術。二、填空1. 按所使用的支持體的不同分為 紙 電泳、 薄層 電泳、 薄膜 電泳、 凝膠 電泳和 等電聚焦 電泳。按支持介質的形狀分為 平板 電泳和 柱狀 電泳。2. 分子在電場中移動的方向決定于所帶 電荷 的種類，帶正電荷的向的 負極 移動；帶負電荷的向 正極 移動； 靜電荷為零 的分子在電場中不移動。分子在電場中移動的速度主要決定于于顆粒所帶 凈電荷的量 ，同時受分子的 大小 和 形狀

17、 的影響。3. 影響電泳的外界因素有電場強度 、 溶液的pH值 、 溶液的離子強度 、 電滲 以及緩沖液的粘度和溫度。4. 凝膠電泳與其他電泳的主要區別，在于凝膠電泳同時具有電荷效應 和 分子篩效應的雙重作用，具有很高的 篩選效率 。5. 聚丙烯酰胺凝膠電泳按其凝膠系統的組成可分成 連續 凝膠電泳 、 不連續 凝膠電泳、 梯度 凝膠電泳和 SDS 凝膠電泳。6. 不連續電泳的凝膠由上至下可分為 樣品膠 、 濃縮膠 、 分離膠 。7. 蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠電泳中，其遷移率主要取決于它 所帶的電荷 以及分子的大小和形狀 。在聚丙烯酰胺系統中加入SDS，則蛋白質分子的遷移率主要取決于其 相對分質量

18、 ，而與它的 所帶的電荷 及 分子的形狀無關。8. 在聚丙烯酰胺凝膠不連續電泳系統中不僅具有 電荷效應 效應和分子篩效應 效應，而且還具有 濃縮效應 效應，因此比連續電泳系統具有更高的分辨率和區帶清晰度。三、問答題1. 試述聚丙烯酰胺凝膠具有哪些的優點：（）在一定濃度時，凝膠透明，有彈性，機械性能好；(2)化學性能穩定，與被分離物不起化學反應，在很多溶劑中不溶；(3)對pH和溫度變化較穩定；(4)幾乎無吸附和電滲作用，只要Acr純度高，操作條件一致，則樣品分離重復性好；(5)樣品不易擴散，且用量少，其靈敏度可達10-6g；(6)凝膠孔徑可調節，根據被分離物的分子量選擇合適的濃度,通過改變單體及

19、交聯劑的濃度調節凝膠的孔徑；(7)分辨率高,尤其在不連續凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應為一體。因而較醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖電泳等有更高的分辨率。 2. 等電聚集電泳具有哪些優缺點：優點： 分辨率高；隨電泳時間增加區帶越來越窄；樣品加在任何部位都可以聚焦到等電點pH位置；很稀的樣品都可分離，且重現性好；可用于測定多肽或蛋白質的等電點。缺點：要求使用無鹽溶液，但某些蛋白質在無鹽溶液中溶解度低，易產生沉淀。對一些在pI不溶解或發生變性的蛋白質不適用。 3. 對載體兩性電解質有什么要求：在pI處必須有足夠的緩沖能力，以便控制pH梯度。在pI處必須有足夠的電導，以便使一定電流通過。而且，各不同p

20、I值的載體有相同的電導系數，使整個體系中電導均勻，獲得均勻的電場。相對分子質量要小，以便在聚焦后能容易地和蛋白質組分分開。化學組分不同于被分離物質，以免干擾測定。不與被分離物質起化學反應，也不會引起被分離物質變化。 第四章 離心分離技術一、名詞解釋1. 離心分離技術：是借助于離心機旋轉所產生的離心力，根據物質顆粒的沉降系數、質量、密度、浮力等因素的不同而使物質分離的技術。 2. 沉降系數：指在單位離心作用下，粒子的沉降速度。單位：S ( Sverdberg ), 1S = 11013cm/s 3. 差速離心：采用不同的離心速度和離心時間，使沉降速度不同的顆粒分批分離的方法。 4. 密度梯度離心

21、：是樣品在密度梯度介質中進行離心，使沉降系數比較接近的物質得以分離的一種區帶分離方法。 5. 等密度梯度離心：是不同的顆粒在離心力的作用下，不同浮力密度的物質顆粒向下沉降或向上漂浮，一起移動到它們各自浮力密度恰好相等的位置(等密度點)，形成區帶的方法。(又稱為平衡等密度離心)。 6. 相對離心力 ( RCF )：指顆粒所受的離心力(c)與地心引力(重力Fg )之比二、填空1. 通常按離心機轉速的不同，將其分為 常速 離心機 、 高速 離心機和 超速 離心機三種。P812. 常速離心機的轉速通常在 8000 r/min以內，高速離心機的轉速在 10000-25000 r/min，轉速大于 250

22、00 r/min的離心機稱為超速離心機。3. 在超速離心中，離心方法可分為 差速離心 、 密度梯度離心 和 等密度梯度離心 。P824. 物質顆粒在離心場中所受離心力( Fc )的大小，決定于顆粒的 質量（m） 和離心加速度 離心加速度（c） 。三、問答題 1.根據離心方法的不同，離心時間所表達的含義有什么區別：離心時間是影響離心效果的主要因素之一，其概念按離心方法不同有所差別。差速離心的離心時間：指某種顆粒完全沉降到離心管底的時間。又稱澄清時間、沉降時間。密度梯度離心的離心時間：指形成界限分明的區帶的時間。等密度梯度離心的離心時間：指顆粒完全到達等密度點的平衡時間。第五章 化學檢測技術一、名

23、詞解釋1. 化學檢測技術：是根據物質的化學性質而對物質進行定性、定量測定的方法 2. 蛋白質的免疫化學檢測：利用抗原與抗體之間特異的結合而對蛋白質進行定性定量分析的技術稱為蛋白質的免疫化學檢測技術。 3. 抗原：能刺激動物機體產生抗體，并能特異地與這種抗體結合的物質。 4. 抗體：是在動物體內對于抗原的反應而產生的能特異性地與這種抗原結合的一類免疫球蛋白。 5. 抗原決定簇：蛋白質的抗原特性是由蛋白質的化學結構決定的，蛋白質多肽鏈的一部分或某些特定的基團可與抗體結合，稱為抗原決定簇或抗原的決定基。 6. 凝集反應：細胞性抗原與相應的抗體相混合時，就會凝集成團，這種抗原-抗體反應稱為凝集反應。

24、7. 抗血清的效價：免疫血清在一定量抗原存在下，能顯現明確的沉淀反應的最大稀釋度的倒數。 8. 抗體的沉淀反應：將可溶性抗原(蛋白質)與相應抗體混合，當兩者的比例適當，并有適當的鹽類存在時，可形成沉淀，這種現象叫抗體的沉淀反應。9. 免疫擴散：是利用蛋白質在半固體基質上的擴散作用，使抗原和抗體在濃度比例合適的部位產生沉淀帶或沉淀環，從而檢測蛋白質的方法。10. 免疫電泳：將免疫擴散和電泳技術結合起來檢測蛋白質的技術。 二、填空1. 糖類的化學檢測主要是利用游離羰基的還原性與試劑進行氧化還原反應而進行測定的。2. 糖類的化學檢測中，最常用的試劑是 斐林 試劑，其基本組成是由A液和B液兩液組成，A

25、液的主要成分是 CuSO4 ，B液主要由 酒石酸鉀鈉 和 NaOH 組成。3. 糖液滴入斐林試劑中時，酒石酸鉀鈉銅是一種 氧化 劑，可與還原糖的游離 羰基 發生 氧化還原 反應，生成 紅 色的 氧化亞銅 沉淀。4. 蛋白質的含氮量幾乎是恒定的，平均含氮量為16%，只要測出蛋白質含氮量，乘以 6.25 ，即為蛋白質的含量。5. 在蛋白質是由多種 氨基酸 以 肽鍵 相互聯接而成的，在一級結構中可發現，它的主鏈中， 肽 鍵占 1/3 ，沒有任何一種物質含 肽 鍵量如此豐富。因此，可用一些該鍵所能發生的反應，對蛋白質進行測定。6. 凱氏定氮的主要步驟有： 消化 、 蒸餾 、 滴定 與 計算 。7. 雙

26、縮脲反應是指蛋白質在 堿性 溶液中與Cu2+ 結合，生成 紫紅色 絡合物的反應。8. 一般氨基酸與茚三酮反應生成 紫色 化合物，而亞氨基酸反應后生成 黃色 化合物。9. 抗體是一類 免疫球蛋白 ，由兩條 重鏈 和兩條 輕鏈 通過多個 二硫鍵 連接成 Y 型，抗體分子的 N 端是抗體與抗原決定簇的結合部位，它決定了抗體的 特異性 ，當抗原決定簇與抗體的 N 端結合時，產生變構效應，使 C 端的某些部位結構改變，而產生一系列的 免疫效應 。10. 利用免疫化學檢測蛋白質的方法主要有 凝集 反應和 沉淀 反應。11. 根據核酸中所含的磷及戊糖的化學性質可用 定磷法 、二苯胺法 和 地衣酚法等進行檢測

27、。12. DNA中脫氧核糖在酸性環境中與二苯胺試劑一起加熱，產生藍色 反應。在595nm處有最大吸收峰，通過測定光密度、光吸收值，從標準曲線上可查出DNA含量。13. RNA中的核糖在濃鹽酸和三氯化鐵存在下，與 地衣酚 在100共熱，產生 綠色 物質，它在 670 nm處有吸收高峰，因此，該反應檢測和定量RNA。第六章 光學檢測技術一、名詞解釋 1. 光學檢測技術：是利用物質所具有的各種光學性質，對物質進行定性、定量及結構分析的技術 2. 旋光檢測技術：利用旋光計測量出旋光物質(光學活性物質)對偏振光放置角度的方向和大小。從而進行定性與定量分析的技術。 3. 分光光度檢測：又稱分子吸收光譜檢測

28、。是利用物質分子所特有的吸收光譜而對物質進行定性、定量測定的檢測技術。二、填空1. 光學檢測技術多種多樣，生化領域常用的有 旋光檢測 技術 、 熒光檢測 技術和 分光光度檢測 技術。2. 分子中具有不對稱碳原子的物質能夠使偏振光的偏振面產生 旋轉 作用，即旋光作用。3. 根據物質吸收光譜的頻率范圍不同分光光度檢測可分為：紫外分光光度檢測 、 可見光分光光度檢測 和 紅外光分光光度檢測 。4. 核酸分子由于含有 共軛雙鍵 ，所以有強烈的紫外光吸收性質，其最大吸收高峰為 260 nm；蛋白質由于含有 苯環 等紫外吸收基團，故也有紫外光吸收性質，但其吸收高峰在 280 nm處。三、問答題 1. 在生

29、化領域中，應用熒光檢測的方法在哪些：在生化領域中，應用熒光檢測的方法分三類：直接用熒光性物質檢測利用非熒光性物質與熒光試劑反應，生成熒光性物質在熒光性物質溶液中加入消光物質第七章 氣體檢測技術一、名詞解釋： 氣體檢測技術：是利用物質在生化反應或化學反應中放出或吸收的氣體的性質，通過測定氣體量的變化而對物質進行定性、定量分析的技術。二、填空：應用于氣體檢測技術的儀器主要有兩種：華勃氏(Warbury)呼吸儀和范斯萊克(Van Slyke)檢測儀。前者主要用于測O2的吸收量或CO2的放出量；后者主要用于檢測-氨基酸與亞硝酸反應產生的N2，從而計算氨基酸含量。第八章 放射性同位素檢測技術一、名詞解釋

30、1. 放射性同位素檢測技術：是利用放射性同位素研究物質的運動和變化的技術。 2. 同位素：凡是原子序數相同，而質量數不同的元素稱為同位素。即原子核內質子數相同，而中子數不同的元素。 3. 衰變：放射性同位素的原子核自發地按一定規律變化，同時放出各種射線的過程稱為衰變或蛻變。 4. 放射性半衰期：指放射性元素的原子核數目因衰變而減少一半所需的時間。5. 放射性強度：指單位時間內原子核衰變的數目。單位：居里(Curie，Ci)6. 比放射性：指單位質量(克)或體積(ml)樣品在單位時間內原子核衰變的數目。 7. 放射自顯影技術 ( autoradiography )：是利用樣品中放射性物質放出的射

31、線，作用于核子乳膠片，而在膠片上顯影，從而探測放射性物質的位置和分布情況的技術。 8. 本底值：指未加樣品前空白測量所得 (來自儀器本身、宇宙射線或其它放射線引起) 的計數。 9. 熄滅(猝死)：是液體閃爍測量系統內使射線探測效率下降的現象。二、填空1. 同位素分為兩種：一種是原子核結構穩定，不會自行發生變化的稱 穩定 同位素；另一種其原子核結構不穩定，會自行地發生變化，不斷地放出各種射線，最后衰變為另一種元素，這種同位素是 不穩定 同位素，通常稱為放射性同位素。2. 放射性同位素衰變過程中放射出的射線主要有三種： 射線即粒子 ，帶正電荷； 射線即 粒子 ，帶負電荷； 射線，即不帶電荷的 光子

32、 。3. 生化領域使用的放射性同位素，多數是發射射線或射線，或同時發射射線和射線的同位素。4. 放射性同位素危害人體的途徑有 內照射 和 外照射 兩種。5. 檢測放射性的方法很多，常用的有： 放射自顯影 技術、 蓋革計數管 探測和 閃爍計數器 探測。三、問答題簡單說明放射性同位素摻入及其方法：放射性同位素的摻入是指放射性同位素通過一定方法與物質分子結合，成為分子結構的一部分的過程。摻入方法：主要有三種 化學合成法 用化學方法將其引入到物質分子中。生物合成法 在生物體內，經新陳代謝引入到物質分子中。如，加入培養基中；酶促合成法 利用酶的催化作用，引入到物質分子中。第九章 生物檢測技術一、名詞解釋

33、1. 生物檢測技術：是利用生物體對被檢測物質的特有反應而鑒定被檢物質的質量和功效的方法。2. 半致死量(LD50)：指被試驗動物中死亡率達50%時的藥物劑量。 3. 局部刺激性試驗：是將被檢藥物注射進生物體內，觀察在注射部位是否出現炎癥或產生過敏反應等局部刺激現象。 4. 溶血試驗：是指檢測藥物是否引起紅血細胞膜破裂而釋放出血紅蛋白。 5. 熱原試驗：指檢測藥物中有沒有使動物體溫升高的致熱物質存在。 6. 過敏性試驗：指檢測藥物中有無引起過敏反應的物質存在的一種方法。 7. 變異原試驗：是檢驗藥物或食物中有無引起生物產生變異的物質存在的試驗。 8. 變異原：引起生物明顯地產生變異的物質。 9.

34、 生長促進物質是對生物的生長繁殖有促進作用或不可欠缺的物質。如，維生素、氨基酸、激素等。：二、填空1生物檢測的范圍主要是：生物效價 測定和 安全性 試驗。2.效價是指某一物質引起 生物反應 的 功效 單位。 生物反應 是指生物體對一物質的特有反應。3安全性試驗主要包括 毒性試驗 、 局部刺激性實驗 、 溶血實驗 、 熱原實驗 、 過敏試驗 和 變異原實驗 。4過敏反應是一種 變態 反應。指動物非經口注入異種蛋白質后所表現的一種 反應性 增高現象。引起過敏反應的物質稱為 致敏原 。5抗生素可用 化學 檢測法、 光學 檢測法和 生物 檢測法。6抗生素的生物檢測法是利用抗生素對特定 微生物 的生長起

35、 抑制作用而進行檢測的技術。7抗生素的生物檢測方法主要有 稀釋法 和 擴散法 兩種。8生長促進物質的生物檢測，一般以 微生物 作為試驗材料。第十章 核磁共振檢測技術一、名詞解釋1核磁共振：具有磁距的原子核在高強度磁場作用下，可吸收適宜頻率的電磁輻射，由低能態躍遷到高能態的現象。不同分子中原子核的化學環境不同， 將會有不同的共振頻率，產生不同的共振譜。 2齊曼效應：具有核自旋性質的原子核在磁場的作用下，這些原子核的自旋狀態可分為不同的能級的現象。 3化學位移：當相同的原子核處在分子中的不同基團時，其所吸收的電磁波頻率稍有不同的現象。 4自旋偶合：不同原子自旋之間產生的互相干擾現象，也稱為自旋-自

36、旋偶合。 5自旋分裂( spin-spin splitting )：由于自旋偶合的結果，使共振圖譜由單峰變為多重峰的現象。 6自旋偶合強度：即原子核自旋的相互干擾的強度。自旋偶合常數(J )表示。 7自旋解偶合( spin decoupling 即 自旋去偶 )：指核A的自旋偶合對核B的波譜的影響，由于對核A進行共振頻率的輻射而被消除。 8弛豫現象：指高能級的核，回到低能級而放出能量的過程。二、填空1磁共振技術主要包括 核磁共振 和 電子自旋共振。2核磁共振的基本原理主要包括 変曼效應 、 化學移位 、自旋偶合和 弛豫現象 。3弛豫過程有兩種：放出的能量以熱的形式散發在固體晶格或液體溶劑之中，

37、稱為 自旋-晶格 弛豫。放出的能量轉移到另一個自旋的原子核中，稱為 自旋-自旋 弛豫。三、問答題： 1如何進行共振圖譜的解析：共振圖譜的解析主要抓住四個方面：根據磁場強度和照射電磁波的頻率，確定是否含有某種元素。一定強度的外加磁場中，不同原子核共振吸收的電磁波頻率各不相同，容易做出判斷；根據化學位移（值）判斷該元素在哪一個基團中 因不同基因中所受屏蔽作用不同，使共振吸收的電磁波頻率稍有不同。可將圖譜位置與文獻中記載的各基因的化學位移（值）作比較而確定基團名稱；根據圖譜的自旋分裂情況以及自旋偶合常數（J）的值，得知鄰近的基團結構；測定圖譜的峰面積，通過面積比得知元素的數目或確定化合物的含量。第十

38、一章 酶技術一、名詞解釋1.操縱子：在DNA分子中按一定的次序排列的調節基因、起動基因、操縱基因和受它控制的若干個結構基因一起被稱為操縱子。 2.產物阻遏作用：指酶的反應產物或代謝途徑的末端產物對酶合成的阻遏作用。 3.固定化酶：指固定在載體上，在一定的空間范圍內進行催化反應的酶。 4.固定化細胞：固定在載體上，在一定的空間范圍內進行生命的活動稱為固定化細胞。又稱為固定化活細胞、固定化增殖細胞或固定化完整細胞。 5.固定化原生質體：是固定在載體上，在一定的空間范圍內進行新陳代謝的原生質體。 6.交聯固定化技術：借助雙功能團試劑使酶蛋白分子之間發生交聯，可制成網狀結構的固定化酶。此固定化法稱為交

39、聯固定化技術。 7.酶分子修飾：通過各種方法使酶分子結構發生某些改變。從而改變酶的某些特性和功能的過程，稱為酶分子修飾。 8.大分子結合修飾法：利用水溶性大分子與酶結合，使酶的空間結構發生某些精細的改變，從而改變酶的特性與功能的方法稱為大分子結合修飾法。簡稱為大分子結合法。 9.肽鏈有限水解修飾：是利用肽鏈的有限水解，使酶的空間結構發生某些精細的改變，從而改變酶的特性和功能的方法。 10.氨基酸置換修飾：將肽鏈上的某一個氨基酸換成另一個氨基酸，則會引起酶蛋白空間構象的某些改變，從而改變酶的某些特性和功能。這種修飾方法稱為氨基酸置換修飾。 11.蛋白質工程：蛋白質工程又被稱為第二代遺傳工程。是指

40、通過改造與蛋白質相對應的基因中的堿基排列次序，或設計合成新的基因，將它克隆到寄主細胞中，通過基因表達而獲得具有新的特性的蛋白質的技術過程。 二、填空1生物工程主要包括： 基因工程 、 細胞工程 、 酶工程 和 發酵工程 。2生物工程領域廣泛應用的基本操作技術主要包括 酶 技術、 克隆 技術以及 細胞和原生質體融合 技術。3酶技術主要包括： 酶生物合成的調節 技術、 酶的分離純化 技術、酶反應動力學研究 技術、 酶分子修飾 技術和 酶、細胞和原生質體固化技術。4許多酶的生物合成都是通過誘導物的 誘導 作用而進行的。在適當的時候添加適當的誘導物，可以大大提高酶的產量。誘導物可分為 酶的作用底物 、

41、 酶的反應產物 和 酶的底物類似物 三大類。5.酶生物合成的阻遏作用有 產物阻遏 作用和 分解代謝物阻遏 作用。6.分解代謝物阻遏作用與 環腺苷酸(cAMP) 的濃度有關。在容易利用的碳源充足時， cAMP 濃度低， 受體蛋白(CRP) 不能與cAMP形成復合物，就不能與啟動基因結合，RNA聚合酶亦無法結合，酶就無法合成，即呈現分解代謝物阻遏遏作用。在容易利用的碳源不存在或缺乏時， cAMP 濃度增高，易與 cAMP受體蛋白(CRP) 形成復合物。此復合物與啟動基因結合，RNA聚合酶才能結合到啟動基因位點上，分解代謝物阻遏作用解除，通過 轉錄 和 翻譯 ，進行酶的合成。7.酶的可逆抑制作用有

42、競爭性抑制 作用、 非競爭性抑制 作用和 反競爭性抑制 作用三類。8.隨著抑制劑濃度I的增加 Km 增加， Vmax 不變，屬于競爭性抑制；Km不變， Vmax 值減小。屬于非競爭性抑制； Km 和Vmax 值都減小， Km/ Vmax 不變，屬于反競爭性抑制。9.酶、細胞或原生質的固定化方法有 吸附法、 包埋法 、結合法 和 交聯法 。10. 雙倒數作圖法是以 1/v 對 1/S 作圖，其縱軸截距是 1/ Vmax ，橫軸截距是 -1/Km ，斜率為 Km/ Vmax 。三、問答題1.酶的誘導合成需要哪些條件: 酶的誘導合成不是任何情況下都可進行的，而是有條件的。主要有下列三點： 基因必須完

43、整：酶的合成是在基因的控制下進行的，若基因受到破壞或變異，酶的合成將受影響。因為： 若酶所對應的結構基因改變，該酶將無法合成。 若同一操縱子中，第一位的結構基因受破壞，則第二位及其以后的各個結構基因即使完好，也無法合成相應的酶。 若操縱基因變異，將出現二種相反的情況：一是操縱基因變異后阻抑蛋白不能與之結合，那么將不受誘導物或阻遏物的影響，酶都可以合成；二是操縱基因變異后，與阻抑蛋白牢固結合，那么，就無論是否有誘導物，酶均無法合成相應的酶。 若調節基因變異，不能合成相應的阻抑蛋白。酶的合成也不受誘導物或阻遏物的影響。只有各有關基因完整，才能在添加誘導物時，有可能使酶誘導合成。 阻抑蛋白活性 當添

44、加誘導物時，誘導物與阻抑蛋白結合，使其與操縱基因分離，才能進行酶的合成。 阻遏物 在添加誘導物時，細胞所處環境中，不能有高濃度的分解代謝阻遏物或其它強阻遏劑存在，否則將無法誘導。因此，只有阻遏解除后，酶才能誘導合成。 2.酶動力學的研究主要包括哪些內容: 酶動力學研究主要包括：酶反應初速度的測定；底物濃度對酶反應速度的影響；米氏常數Km和最大反應速度vmax的測定；溫度對酶反應速度的影響；酶反應活化能的測定；pH對酶反應速度的影響；激活劑的作用；抑制劑對反應速度的影響；抑制類型的確定3.酶分子修飾技術不斷發展，主要的修飾方法有哪些: 酶分子修飾技術不斷發展，修飾方法多種多樣。主要的有：金屬離子

45、置換修飾；大分子結合修飾；肽鏈有限水解修飾；酶蛋白側鏈基團修飾；氨基酸置換修飾；物理修飾。4.試述蛋白質工程的主要步驟:新蛋白質結構的設計根據已知蛋白質或酶的化學結構、空間結構及其特性，確定欲得到的新蛋白質或酶的氨基酸排列次序，確定欲置換的氨基酸及位置。突變基因的核苷酸序列的確定根據欲得到的蛋白質的氨基酸序列，確定其對應的mRNA上的核苷酸序列。再根據互補原則，從mRNA核苷酸序列確定其所對應的突變基因上的核苷酸序列。根據欲置換的氨基酸確定需要置換的核苷酸及其位置。突變基因的獲得根據欲得到的突變基因的核苷酸序列以及需要置換的核苷酸位置，首先用DNA合成儀合成有一個或幾個核苷酸被置換了的寡核苷酸

46、。再用此寡核苷酸為引物，通過定點突變(Site directed mutagenesis)技術，而獲得所需的突變基因。這稱之為寡核苷酸誘導的定位突變，是蛋白質工程中常用的技術。新蛋白質的產生將上述獲得的突變基因插入到合適的基因載體中，轉化或轉導到宿主細胞之中，在適宜的條件下進行表達，就可產生出經過氨基酸置換的新的蛋白質或酶。第十二章 克隆技術一、名詞解釋1.克隆技術: 是在分子的水平上，通過人工方法將外源基因引入細胞，而獲得具有新的遺傳特性的細胞技術，又稱重組DNA技術。 2.基因: 是載有遺傳信息的DNA(有的是RNA)片段，是遺傳性狀在分子水平上的物質基礎。 3.聚合酶鏈式反應(Polym

47、erase Chain Reaction): 簡稱PCR，是由穆利斯(K. B. Mullis)于1988年首創的一種在體外模擬發生于細胞內的DNA快速擴增特定基因或DNA序列的復制過程的技術。 4.質粒: 質粒是染色體外的遺傳因子，是一種雙鏈環狀的DNA分子。質粒本身含有復制基因，能在細胞質中獨立自主地進行自我復制。 5.限制性內切酶: 是生物體內能識別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種專一性很強的核酸 HYPERLINK /view/3851484.htm t _blank 內切酶，是目前克隆技術不可缺少的工具酶。 6.基因重組: 是通過酶的作用，使特異的基因(外源DNA)和載體DNA在試管

48、中進行重新組合，而得到雜種DNA分子的方法。 二、填空1.獲得特異基因的主要方法有： 分離 法、 反轉錄合成 法、 化學合成 法和 聚合酶鏈式反應(PCR) 技術。2.真核細胞的mRNA一般在3-末端含有多聚腺嘌呤核苷酸(Poly A) 的尾巴，可以用接上 寡聚脫氧胸腺嘧啶核苷酸 的纖維素柱進行 親和 層析，而從RNA復合物中分離得到 mRNA 。3.雙鏈DNA在加熱或堿性條件下，雙鏈之間的 氫鍵 斷開，解離為單鏈DNA，這稱為DNA的 變性 。4.單鏈DNA在溫度逐漸 降低 時，會重新與其互補的引物或另一條單鏈結合，形成雙鏈，這叫 退火 。5.在PCR擴增過程中，是以目標 DNA 為模板，以

49、 引物 為固定起點，以 為底物，在 四種脫氧核苷三磷酸(dNTP) 的作用下，由 DNA聚合酶5-端 向 3-端 的方向進行DNA復制。6.在PCR擴增過程中，反應液中加入 50mmol/L的KCl 有利于退火，但過高則對 Taq DNA聚合酶 有抑制作用。明膠和牛血清蛋白等蛋白質，以及吐溫20等非離子型表面活性劑對 Taq DNA聚合酶 有穩定作用，必要時可適量添加。7.Ti質粒是 根瘤農桿菌 的質粒，在 植物基因工程方面是一種常用的基因載體。8.選擇質粒作為基因載體時，要考慮兩個條件：首先是經限制性內切酶 作用后，仍保留 復制起始區 。此外是仍要有 抗藥標記 ，以利于重組體的篩選。9.基因

50、重組有多種途徑，常用的三種方法是 粘性末端連接 、 平頭連接 和借助于 末端轉移酶 的連接方法。10.把重組DNA引入動物細胞，常用的有磷酸鈣 沉淀法、 病毒 導入法、 顯微 注射法、 電擊 導入法等。三、問答題1.克隆技術主要包括哪幾個方面：基因的獲取；載體的制備；限制性內切核酸酶的應用和；基因重組；細胞轉化和基因表達。2.簡述PCR技術的基本過程：雙鏈DNA的熱變性(解鏈)、引物與單鏈DNA退火結合、引物延伸三個步驟。這三個步驟反復進行，一般經過30次循環，可使目的基因擴增幾百萬倍。第十三章 細胞和原生質融合技術一、名詞解釋1.細胞融合技術：是在助融劑的作用下，將兩種細胞融合在一起，經過細

51、胞內DNA重組，而選育出具有新的遺傳特性的雜種細胞的技術。 2.免疫：是指用所需的抗原注射進動物體內，使之產生免疫反應，由淋巴細胞產生相應的抗體的過程。 3.原生質體融合(protoplast fusion)：指通過人為的方法，使遺傳性狀不同的兩個細胞的原生質體進行融合，借以獲得兼有雙親遺傳性狀的穩定重組子的過程。 4.異核體：融合后的原生質體由于含有兩種細胞核，稱之為異核體。二、填空1.細胞融合技術的主要過程包括： 免疫 、 融合 、 篩選 三個步驟。2.細胞融合技術常用的助融劑是 聚乙二醇(PEG) 。3.要把雜種細胞篩選出來，就要求服務于融合的動物細胞帶有 遺傳標記 ，并采用特定的 選擇

52、培養基 。4.雜種細胞分裂時有一種特性，即傾向于 保留 一個親本細胞的全套 染色體 ，而 排斥 另一個親本細胞的 染色體 。根據這種特性，雜種細胞分裂時總量要丟失某個親本細胞的某些 染色體 ，要分裂 幾十 代后才比較穩定。例如，人體細胞與鼠細胞融合成的雜種細胞總是保留 鼠類染色體 ，而排斥 人 的某些 染色體 。5.原生質體的分離方法是：將細胞 懸浮 在等滲 或 高滲 溶液中，然后用酶使 細胞壁 破壞或溶解，而得到原生質體。6.在分離原生質體的過程中，除了選擇不同的酶以外，還要注意酶濃度、 溫度 、pH值 、離子強度 、時間 等條件，以提高分離效果。7.原生質體形成率可用 顯微 計數法或 平板

53、菌落 計數法測定和計算。8.原生質體是否已經融合必須經過檢測。檢測的方法通常是利用 親株細胞 原有的 遺傳標記 。三、問答題1.試述對不同細胞(細菌、酵母、霉菌、植物細胞)原生質體分離時酶的選擇：由于不同的細胞有不同的細胞壁結構，故應選擇不同專一性的酶。細菌原生質體的分離：對革蘭氏陽性菌，其細胞壁主要由肽多糖組成。分離其原生質體主要使用從蛋清中分離得到的溶菌酶，該酶專一性地作用于肽多糖，使細菌細胞壁破壞。對革蘭氏陰性菌，其細胞壁除了肽多糖以外，還有一層脂多糖。故此，需由EDTA與溶菌酶共同作用，才能達到較好的效果。酵母原生質體的分離：酵母的細胞壁分兩層，外層由磷酸甘露糖及蛋白質組成，內層由-葡

54、聚糖構成細胞壁的骨架。所以，制備酵母原生質體通常采用蝸牛酶，即從蝸牛消化道中分離得到的主要含-1,3葡聚糖酶的混合酶。若同時添加磷酸甘露糖酶和蛋白酶共同作用，效果更佳。霉菌原生質體的分離：毛霉、根霉等霉菌的細胞壁主要由幾丁質組成，制備原生質體時主要用由放線菌或細菌產生的幾丁質酶。若加入中性蛋白酶共同作用，效果更好。曲霉、青霉的細胞壁主要成分為幾丁質和葡聚糖，采用-1,3葡聚糖酶和幾丁質酶協同作用，可使其細胞壁破壞，分離得到原生質體。植物原生質體的分離：植物細胞壁主要由纖維素、半纖維素和果膠組成，故此，制備植物原生質體主要用植物的鮮嫩組織或細胞、添加纖維素酶和果膠酶而使其細胞壁破壞，分離得到原生

55、質體。2.怎樣檢測原生質體是否已經融合：檢測的通常是利用親株細胞原有的遺傳標記。例如，一個親株有抗卡那霉素的標記，另一個親株具有抗氨芐青霉素的標記，在同時卡那霉素含有和氨芐青霉素的培養基中，兩個親株本身都不能生長，只有同時具有兩種抗藥性的融合子才能生長，從而很容易地檢測出融合子。附錄資料：不需要的可以自行刪除長方體和正方體知識要點名稱面棱頂點長方體有6個面 一般情況下6個面都是長方形，相對的面完全相同（特殊情況下有兩個相對的面是正方形，其余的4個面是完全相同的長方形）有12條棱（相對的4條棱的長度相等）有8個頂點正方體有6個面 是6個完全相同的正方形有12條棱12條棱的長度都相等有8個頂點 長

56、方體的棱長總和 = 長4+寬4+高4 或 長方體的棱長總和=（長+寬+高）4 正方體的棱長總和 = 棱長12 長方體或正方體六個面的總面積，叫做它的表面積。長方體的表面積 = （長寬 + 長高 + 寬高） 2 上面或下面 前面或后面 左面或右面正方體的表面積 = 棱長棱長 6 一個面的面積 6個面物體所占空間的大小叫做物體的體積。容器所能容納物體的體積，叫做這個容器的容積。常用的體積單位有：（立方厘米）、（立方分米）、（立方米）。 棱長1厘米的正方體，體積是1立方厘米。棱長1分米的正方體，體積是1立方分米。棱長1米的正方體，體積是1立方米。計量液體的體積，常用（ 升 ）和（ 毫升 ）作單位。1

57、立方分米 = 1升 1立方厘米 = 1毫升長方體的體積=長寬高 正方體的體積=棱長棱長棱長V = abh V =a.a.a 或 V=a3 讀作a的立方表示3個a相乘。 長方體和正方體底面的面積，叫做它們的底面積。長方體和正方體體積計算的統一公式：長方體（或正方體）的體積 = 底面積高 V = sh正方體的棱長擴大縮小若干倍，它的表面積擴大或縮小這個倍數的平方，體積擴大或縮小這個倍數的立方。長方體的長、寬、高同時擴大縮小若干倍，它的表面積擴大或縮小這個倍數的平方，體積擴大或縮小這個倍數的立方。分數乘法知識要點：分數與分數相乘，用分子相乘的積作分子，分母相乘的積作分母。分數與分數相乘的計算方法對于整數與分數相乘也適用，因為整數可以化成分母是1的分數。求一個數的幾分之幾是多少，用乘法計算。（求一個數的幾倍是多少，也用乘法計算）乘積是1的兩個數互為倒數。A、求一個分數的倒數，把它的分子和分母調換位置。 B、整數（0除外）的倒數是 C、 1的倒數是1 D、 0沒有倒數。E、真分數的倒數都大于1，假分數的倒數都小于或等于1。分數除法知識要點1、甲數除以乙數（乙數不為0），等