1、多指標綜合評分法優化更年康顆粒醇提工藝【摘要】：目的優化更年康顆粒的醇提工藝。方法采用正交試驗設計,以芍藥苷、黃芪甲苷含量為評定指標,用多指標綜合評分法進展數據處理,優化提取條件。結果更年康顆粒優化醇提工藝為18倍量70%乙醇,分3次回流提取,每次1.5h。結論該提取工藝合理,有效成分提取效率高。【關鍵詞】更年康顆粒芍藥苷黃芪甲苷正交實驗綜合評分法abstrat：bjetivetptiizetheextratintehnlgyfrgengniankanggranules.ethdsanrthgnaltestasadptedinthestudy.thententsfpaeniflrinandas

2、tragalsideereusedasindiesfappraisal.datapressingasarriedutiththeultipleguidelinesgradingethdfrptiizingtheextratinnditin.resultstheptiizedextratintehnlgyfrgengniankanggranulesasshntbe：eighteenfldvluef70%alhlshuldbeaddedt1vluefthegranulesfr3suessiverefluxextratinsith1.5hfeah.nlusintheptiizedextratinte

3、hnlgyasratinalandtheextratinrateftheativepnentsashigh.keyrds：gengniankanggranules；paeniflrin；astragalside；rthgnaltest；gradingethds更年康顆粒是在?景岳全書?歸腎丸的根底上,根據辨證施治原理并結合臨床理論挑選出來的,由白芍、枸杞子、熟地黃、黃芪、合歡皮、淫羊藿、鉤藤等9味中藥組成,具有滋腎養陰、平肝寧心的成效。主要用于治療婦女更年期潮熱汗出、心煩失眠等病癥。為減少藥物用量及更好地發揮其成效,通過查閱文獻,將方中的白芍、黃芪、合歡皮、鉤藤4味藥物進展乙醇提取,其余藥物進

4、展水煎煮提齲本試驗就上述4味藥物的醇提工藝,應用正交試驗法,以芍藥苷、黃芪甲苷含量為指標,采用綜合評分法進展優眩1儀器與試藥l-10advp型高效液相色譜儀(日本島津公司)；spd-6av紫外檢測器(日本島津公司)；美國allteh公司500型蒸發光散射檢測器；h-2000色譜工作站；電子天平(ettlertledag285)；kq-500e型醫用超聲清洗器(昆山超聲儀器)。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號110736-202226)；黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用,批號110781-202212)；中藥材購自南京市藥材公司,經南京中醫藥大學藥學院生藥教研室鑒定

5、為符合2022版?中華人民共和國藥典?規定藥材。甲醇為色譜純,其余所用試劑均為分析純,均購自上海化學試劑；水為重蒸水(自制)。2方法與結果2.1正交設計方中白芍為君藥,其活性成分為芍藥苷,可溶于醇類；黃芪、合歡皮主要成分為皂苷和多糖類物質,且這兩局部均為活性成分,工藝中采用醇提取,可兼顧兩局部成分；鉤藤主要活性成分為各種吲哚類生物堿,主要有鉤藤堿、異鉤藤堿、柯諾辛因堿等,其在乙醇中有較好的溶解性,為充分進步生物堿的利用率,采用醇回流提齲故根據方中這4味藥的主要化學成分的理化性質,以乙醇為提取溶媒,采用l9(34)正交表進展正交設計,對乙醇的濃度(b)、用量(a)、提取次數()、提取時間(d),

6、用4因素3程度進展考察,以芍藥苷、黃芪甲苷含量為考察指標,進展提取工藝最正確參數確實定。其提取工藝因素程度設計見表1。按處方配比取處方藥材9份,每份45g,按照因素程度表操作,參加乙醇,加熱回流,過濾后將所得的濾液減壓濃縮成稠膏。表1因素程度表略2.2考察指標的測定2.2.1hpl法測定芍藥苷含量色譜條件：采用依利特hypersilds色譜柱(2504.6,5)；流動相：甲醇-水(2575)；流速：1l/in；檢測波長：230n；柱溫：30。線性關系考察：精細汲取0.601g/l芍藥苷對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5l,分別置于5l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,使濃度分別為0

7、.0601、0.1202、0.1803、0.2404、0.3005g/l。分別汲取上述各對照品溶液20l,進樣,按上述色譜條件測定峰面積值,以峰面積均值(y)為縱坐標,進樣濃度(x)為橫坐標,繪制標準曲線。得回歸方程：y6223541.78x38695.056,r0.9998(n5)。結果說明,芍藥苷在0.06010.3005g/l范圍內呈良好的線性關系。含量測定：取按各提取工藝制備的稠膏約0.2g,精細稱定,置離心管中,精細參加稀乙醇20l,稱定重量,超聲處理1h,再稱定重量,用稀乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液,即得芍藥苷供試品溶液。汲取20l,注入液相色譜儀,每個樣品平行進樣2次

8、,以外標兩點法計算,測定各樣品中的芍藥苷含量。結果見表2。2.2.2hpl-elsd測定黃芪甲苷含量色譜條件：采用依利特hypersilds色譜柱(2504.6,5)；流動相：甲醇-水(7921)；流速：1l/in；elsd漂移管溫度：90；霧化氣流速：2.20l/in。線性關系考察：精細汲取1.306g/l黃芪甲苷對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5l,分別置于5l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,使濃度分別為0.1306、0.2612、0.3918、0.5224、0.6530g/l。分別汲取上述各對照品溶液20l,進樣,按上述色譜條件測定峰面積值,以峰面積均值的對數值(y)為縱坐

9、標,進樣量的對數值(x)為橫坐標,繪制標準曲線。得回歸方程：y0.9416x5.7208,r0.9996(n5)。結果說明,黃芪甲苷在2.61213.06g范圍內呈良好的線性關系。含量測定：取按各提取工藝制備的稠膏約4g,精細稱定,加水10l,超聲溶解30in,用水飽和正丁醇振搖提取4次,每次40l,合并正丁醇液,用氨試液充分洗滌2次,每次40l,棄去氨試液,正丁醇液蒸干。殘渣加蒸餾水5l使溶解,放冷,通過d101型大孔樹脂柱(內徑1.5,長12),以水50l洗脫,棄去水液,再用40%乙醇30l洗脫,棄去40%乙醇洗脫液,繼用70%乙醇50l洗脫,搜集洗脫液,蒸干,用甲醇溶解并轉移至5l量瓶中

10、,甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,注入液相色譜儀,每個樣品平行進樣2次,以外標兩點對數方程法計算,測定各樣品中的黃芪甲苷含量。結果見表2。2.3實驗結果按照l9(34)正交設計表的條件進展實驗,分別測得芍藥苷、黃芪甲苷的含量。將結果用多指標試驗全概率方法進展數據處理,詳細運算及公式相關符號的意義可參考文獻1。根據各指標影響作用的大小,本試驗按其重要程度之比為12芍藥苷權重黃芪甲苷權重0.60.4,計算p(aj)及各指標的p(b?/aj)xij/sj,那么綜合評分()p(bi)2p(a1)p(b?/a1)p(a2)p(b?/a2)0.6xi1/s10.4xi2/s2。在上述各式中bi為第i號試

11、驗,aj為第j個指標。xij表示第j個指標下的第i個測定值,以sj表示第j個指標下各次(n次)試驗結果的和。i1,2n；j1,2k。數據處理和方差分析見表2、表3。表2正交試驗結果略表3方差分析略注：f0.05(2,2)=19.00,f0.01(2,2)=99.00結果說明,a、b、d對試驗結果均無顯著影響。經直觀比擬分析,同時結合消費實際,綜合比擬,確定最優工藝條件為a2b33d2,即18倍量70%乙醇,分3次回流提取,每次1.5h。2.4最正確工藝驗證取處方藥材3份,根據挑選得到的提取工藝a2b33d2,進展正交驗證試驗,得芍藥苷含量為1.51%,rsd1.51%(n3)；黃芪甲苷含量為0

12、.061%,rsd1.97%(n3)。可見,按優化工藝進展提取,芍藥苷、黃芪甲苷均獲得較理想的結果。說明該工藝穩定可行。3討論當處方中有多味藥材時,其制劑工藝的評價如采用單一指標那么代表性較差,用不同種類的成分作為評判指標其結果才有較廣泛的代表性。但由于不同藥材中的成分含量有時不在同一數量級,直接累加那么使數量級大的對結果的奉獻大,而小的奉獻小,常不符合組方原那么及治那么。用多指標正交試驗進展工藝優選時,首先需解決指標間量綱不一致和指標間的相容與否的問題,然后需針對指標間的重要性差異給出各指標權重,綜合評分后再進展統計分析。在應用此法時,如何設置指標的權重,需根據詳細情況詳細分析。本方劑需進展醇提的各味藥物中因白芍為本方君藥,同時黃芪的皂苷類成分在療效上都將發揮重要作用,故將二者的權重定為0.60.4。在進展芍藥苷含量測定時,由于本處方醇提局部含有4味藥,樣品中含有一些極性小的物質在樣品測定時不易從色譜柱上洗脫,連續進樣易造成芍藥苷位置附近有雜質干擾,甚至會出現肩峰,影響其別離效果,因此,提取時需對樣品進展凈化處理,如可以采用乙醚進展脫脂處理,還可以在樣品測定時經常用乙腈或純甲醇對色譜柱進展沖洗,以除去弱極性物質,保證樣品的重現