1、脫鎂葉綠酸的制備及其光敏抗菌活性唐蕾徐磊韓躍毛洪【摘要】以開端純化的葉綠素為質料，使用葉綠素酶水解、選擇性酸落解兩種要領制備脫鎂葉綠酸。高效液相色譜闡發表現兩種要領得到的產物圖譜相似，酸落解產物中脫鎂葉綠酸A的含量較高?？咕鷮嵭斜戆酌撴V葉綠酸對革蘭陽性菌具有光敏抑菌結果，對革蘭陰性菌和酵母無顯著作用?！娟P鍵詞】脫鎂葉綠酸；葉綠素酶；高效液相色譜；光敏抗菌活性KEYRDSPhephrbide;hlrphyllase;Highperfraneliquidhratgraphy;Phtsensitiveantiirbialativity光敏劑是一些具有光活性的化合物，可以選擇性地富集在特定的構造，在紫

2、外或可見光的引發下，產生光動力殺傷作用，起到殺菌和治療腫瘤的成果。比年來，由于抗生素的濫用所引起的毒副作用、耐藥菌的出現和天然微生物群落的粉碎，使得天然、環境友愛、可以或許有用地殺滅有害菌而不傷及相近構造的光敏劑頗受存眷1。脫鎂葉綠酸(Pheide)作為卟啉類光敏活性劑具有布局明白、不變，在紅外區有較強的汲取，光敏活性更有用等特點，在癌癥的光敏動力學治療中已有報道24，但其光敏殺菌作用尚待探究。別的，脫鎂葉綠酸作為葉綠素(hl)的中心落解產物在植物中很少積聚，分散困難，但可以通過葉綠素的酶促水解和酸落解法得到5，6?；谏鲜鲫U發，本文對酶法和酸法葉綠素落解產物舉行了比力，并研究了其對細菌和酵母

3、的光敏活性。1質料與要領細菌產氣腸桿菌(Aerbateraergenes)、金葡菌(Staphylusaureus)、四聯球菌(irustetraglnus)、枯草芽孢桿菌(Baillussubtillis)、北京棒桿菌(rynebateriupekinese)、白葡萄球菌(Staphylusalbus)、大腸埃希菌(Esherihiali)。均為實行室收藏菌種。1.2造就基及造就條件酵母造就基酵母膏5g，卵白胨10g，葡萄糖20g，定容至1000l，pH6.0。細菌造就基Nal5g，卵白胨10g，牛肉膏3g，定容至1000l，pH7.0。121滅菌20in。造就溫度酵母28，細菌37，光照為

4、造就箱內置光源。1.3抗菌實行(1)在固體平板上勻稱涂布200l菌液，取10l待測樣品溶液于直徑6的濾紙片上，稍干后貼于已接菌的瓊脂造就基外貌，光照條件下恒溫造就24h，不雅察、記載抑菌圈巨細，并與陽性比擬藥物(細菌為氨芐西林，酵母為放線菌酮)比擬力，每個處置懲罰設3個重復。(2)將待測菌在含有50g/l的Pheide造就基上十字劃線，比力光、暗條件對微生物生長的影響，每個處置懲罰設3個重復。1.4葉綠素的提取參照Iriyaa法7，從菠菜中提取和純化葉綠素，丙酮溶解，測定溶液在645和663n處的吸光值，根據Arnn公式盤算葉綠素含量：hlA(g/l)=0.0127A663-0.00269A6

5、45hlB(g/l)=0.0229A645-0.00468A6631.5脫鎂葉綠酸的制備1.6高效液相色譜條件2結果與討論2.1脫鎂葉綠酸的制備脫鎂葉綠酸作為天然卟啉是葉綠素落解的中心產物，在茶葉、柑橘、老化葉中普及存在，但含量低，分散困難。一樣平常通過葉綠素酶催化，植醇基水解，得到脫植醇葉綠素，繼而酸化得到脫鎂脫植醇葉綠酸即PhEide(圖1)。由于疏水性植醇基的去除，Pheide的親水性大大增長，可以通過液液分散將底物hl與產物Pheide分散。由于hlA和hlB同時可以作為葉綠素酶的底物，因此產物中除PheideA外還常含有少量的PheideB。Hynninen等6根據hlA、B植醇基水

6、解本領的差異，開拓了直接從hlA、B混淆物通過選擇性酸落解制備PheideA的要領。圖2為菠菜色素的粗提液，顛末Iriyaa法純化得到hlA、B，和選擇性酸落解產物的薄層層析結果。得到的產物條帶經質譜闡發表現分子量為592與PheideA同等。高效液相色譜是檢測葉綠素、類胡蘿卜素、葉黃素等色素的常用闡發本領，本研究用反相高效液相色譜，選擇葉綠素和類胡蘿卜素的檢測波長430n比力兩種制備要領，圖譜表現兩者的結果相似，此中選擇性酸落解的純度較高(圖3)。2.2脫鎂葉綠酸抗菌實行我們起首選擇實行室保存的5種細菌和6種酵母舉行了光敏抑菌實行，結果表白脫鎂葉綠酸對革蘭陽性菌有顯著的抑菌作用，但對革蘭陰性菌和酵母沒有按捺作用(表1)。為了進一步驗證該結果，以多種細菌(產氣腸桿菌、金葡菌、四聯球菌、北京棒桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、大腸埃希菌)為工具，比力了光照和暗中造就條件下細菌的生長環境，創造光照明顯按捺了革蘭陽性菌的生長(圖略)。該結果與別的卟啉類化合物所得的結果同等810。制備要領(酸法和酶法落解)對所得的結果沒有明顯影響。3結論天然光敏抗菌劑在辦理抗生素的毒副作用和抗生素耐藥性、選擇性殺滅有害菌和庇護天然微生物群落方面具有上風。葉綠素泉源普及，其卟啉